重庆医科大学基础医学院 生物化学实验大纲 生物化学是一门实验性学科，生物化学的所有理论知识都来源于科学实 验，或是经过实验证实了的，因此生物化学实验是学习生物化学必要的补充 和必不可少的内容。 生物化学实验的目的在于通过实验操作使学习者了解生物化学实验的 基本内容，掌握生物化学实验的基本技能，学习和培养在实验中观察问题、 解决问题的能力，以及科学的思维方法。 生物化学基本实验技术主要包括五大方面： 1、分光光度法 2、离心技术 3、层析技术 4、电泳技术 5、分子生物学的一些基本实验技术。 这些实验技术，既能在生物化学中使用，也能在其他学科中使用。近年 来，生物化学实验技术发展迅速，新的技术不断地涌现。新技术简化实验操 作，节省人力、节约时间，为科学研究尤其是临床标本的测定提供了方便。 但美中不足的是试验试剂、耗材价格太高，有些实验操作太少，对培养动手 能力帮助不大。为了让学生学习和接触到这些实验技术，本次修订的新大纲， 在原来生物化学实验的基础上，进行了修改，保留了一些动手操作性强，应 用广泛的基础性实验，增加了一些新的实验内容，形成完整的生物化学实验 大纲。从学校今后扩招和增加专业出发，本次修订还特意增加了5个选修实 验，供不同的专业选择使用。本教学大纲将在新的教学年度中应用，并根据 教学实践不断完善。本大纲的第九个实验是酶学的大型综合性实验，最好是 能利用集中的时间，连续的进行实验。最好是能在部分七年制学生中试点， 然后再推广。本大纲对每个实验提出了目的要求、思考题供同行参考和学生 学习。 生物化学与分子生物学教研室 2006年9月
重庆医科大学基础医学院 生物化学实验大纲 生物化学是一门实验性学科，生物化学的所有理论知识都来源于科学实 验，或是经过实验证实了的，因此生物化学实验是学习生物化学必要的补充 和必不可少的内容。 生物化学实验的目的在于通过实验操作使学习者了解生物化学实验的 基本内容，掌握生物化学实验的基本技能，学习和培养在实验中观察问题、 解决问题的能力，以及科学的思维方法。 生物化学基本实验技术主要包括五大方面： 1、分光光度法 2、离心技术 3、层析技术 4、电泳技术 5、分子生物学的一些基本实验技术。 这些实验技术，既能在生物化学中使用，也能在其他学科中使用。近年 来，生物化学实验技术发展迅速，新的技术不断地涌现。新技术简化实验操 作，节省人力、节约时间，为科学研究尤其是临床标本的测定提供了方便。 但美中不足的是试验试剂、耗材价格太高，有些实验操作太少，对培养动手 能力帮助不大。为了让学生学习和接触到这些实验技术，本次修订的新大纲， 在原来生物化学实验的基础上，进行了修改，保留了一些动手操作性强，应 用广泛的基础性实验，增加了一些新的实验内容，形成完整的生物化学实验 大纲。从学校今后扩招和增加专业出发，本次修订还特意增加了 5 个选修实 验，供不同的专业选择使用。本教学大纲将在新的教学年度中应用，并根据 教学实践不断完善。本大纲的第九个实验是酶学的大型综合性实验，最好是 能利用集中的时间，连续的进行实验。最好是能在部分七年制学生中试点， 然后再推广。本大纲对每个实验提出了目的要求、思考题供同行参考和学生 学习。 生物化学与分子生物学教研室 2006 年 9 月
实验一双缩脲法测定蛋白质含量 一、 目的要求 1、掌握分光光度法的基本原理、双缩脲法测定蛋白质含量的原理。学习双缩脲法测 定蛋白质含量的方法。 2、掌握分光光度法中吸收光谱曲线、标准曲线的制备和应用。掌握根据测定得数据 获得未知溶液浓度方法，标准曲线法、公式计算法。 3、了解721分光光度计的构造，熟悉操作步骤。 二、思考题 1、在分光光度法中光吸收值的大小与溶液浓度、溶液液层厚度的关系如何？ 2、在朗伯-比尔定律中吸光系数大小与什么有关？ 3、双缩脲法测定蛋白质含量的原理是什么？ 4、双缩脲法测定蛋白质含量有哪些影响因素？ 实验二N一末端氨基酸测定[新开] 一、 目的要求 1、掌握丹黄酰氯法测定N-末端氨基酸的基本原理。 2、熟悉基本的操作过程。 3、了解丹黄酰氯法测定N-末端氨基酸的影响因素。 二、思考题 1、丹黄酰氯法测定N-末端氨基酸的基本原理是什么？ 2、丹黄酰氯法测定N-末端氨基酸的影响因素有哪些？ 3、丹黄酰氯法测定N-末端氨基酸的有哪些局限性？ 4、还有什么方法可以测定N-末端氨基酸？ 5、你知道C-末端氨基酸的测定方法吗？ 实验三 血糖浓度的测定（吴宪-Folin法) 一、 目的要求 1、掌握吴宪-Folin法测定血糖的原理。 2、了解无蛋白血滤液制备的原理及意义。 3、熟悉血糖测定的临床意义。 二、思考题 2
2 实验一 双缩脲法测定蛋白质含量 一、 目的要求 1、掌握分光光度法的基本原理、双缩脲法测定蛋白质含量的原理。学习双缩脲法测 定蛋白质含量的方法。 2、掌握分光光度法中吸收光谱曲线、标准曲线的制备和应用。掌握根据测定得数据 获得未知溶液浓度 方法，标准曲线法、公式计算法。 3、了解 721 分光光度计的构造，熟悉操作步骤。 二、 思考题 1、在分光光度法中光吸收值的大小与溶液浓度、溶液液层厚度的关系如何？ 2、在朗伯-比尔定律中吸光系数大小与什么有关？ 3、双缩脲法测定蛋白质含量的原理是什么？ 4、双缩脲法测定蛋白质含量有哪些影响因素？ 实验二 Ｎ－末端氨基酸测定［新开］ 一、 目的要求 1、 掌握丹黄酰氯法测定 N-末端氨基酸的基本原理。 2、 熟悉基本的操作过程。 3、 了解丹黄酰氯法测定 N-末端氨基酸的影响因素。 二、 思考题 1、 丹黄酰氯法测定 N-末端氨基酸的基本原理是什么？ 2、 丹黄酰氯法测定 N-末端氨基酸的影响因素有哪些？ 3、丹黄酰氯法测定 N-末端氨基酸的有哪些局限性？ 4、还有什么方法可以测定 N-末端氨基酸？ 5、你知道Ｃ-末端氨基酸的测定方法吗？ 实验三 血糖浓度的测定（吴宪- Folin 法） 一、 目的要求 1、 掌握吴宪- Folin 法测定血糖的原理。 2、 了解无蛋白血滤液制备的原理及意义。 3、 熟悉血糖测定的临床意义。 二、 思考题
1、血糖测定为什么要去掉血液中的蛋白质？ 2、血糖测定的临床意义有哪些？ 3、吴宪-Folin法测定血糖需要注意哪些方面？ 4、吴宪-Folin法测定血糖的缺点是什么？ 5、钨酸钠沉淀蛋白质需要什么条件？ 实验四 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的 竞争性抑制作用 一、目的要求 1、复习酶的竞争性抑制的概念、特点。 2、学习酶竞争性抑制的实验方法。 3、学习酶活性观察的方法。 二、思考题 1、何谓酶的竞争性抑制作用？有何特点？ 2、本实验如何观察、说明酶的竞争性抑制作用？ 3、琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂是什么物质？它为什么能抑制琥珀酸脱氢酶的活性？ 实验五、葡聚糖(sephadex)凝胶柱层析分 离血红蛋白与核黄素 一、目的要求 1、Sephadex分离蛋白质等物质的原理是什么？ 2、掌握凝胶层析的原理、熟悉凝胶层析的操作、了解凝胶层析的的主要用途。 二、思考题 1、层析介质可分为哪几大类？ 2、样品与介质通过什么样的相互作用使不同的样品的得以分离？ 实验六、血清碱性磷酸酶活性测定 一、目的要求 3、学习酶定量活性测定方法和原则。了解血清碱性磷酸酶活性测定的临床意义。 3
3 1、 血糖测定为什么要去掉血液中的蛋白质？ 2、 血糖测定的临床意义有哪些？ 3、 吴宪- Folin 法测定血糖需要注意哪些方面？ 4、 吴宪- Folin 法测定血糖的缺点是什么？ 5、钨酸钠沉淀蛋白质需要什么条件？ 实验四 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的 竞争性抑制作用 一、目的要求 1、 复习酶的竞争性抑制的概念、特点。 2、 学习酶竞争性抑制的实验方法。 3、 学习酶活性观察的方法。 二、思考题 1、 何谓酶的竞争性抑制作用？有何特点？ 2、 本实验如何观察、说明酶的竞争性抑制作用？ 3、 琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂是什么物质？它为什么能抑制琥珀酸脱氢酶的活性？ 实验五、葡聚糖（sephadex）凝胶柱层析分 离血红蛋白与核黄素 一、目的要求 1、Sephadex 分离蛋白质等物质的原理是什么？ 2、 掌握凝胶层析的原理、熟悉凝胶层析的操作、了解凝胶层析的的主要用途。 二、思考题 1、层析介质可分为哪几大类？ 2、样品与介质通过什么样的相互作用使不同的样品的得以分离？ 实验六、血清碱性磷酸酶活性测定 一、目的要求 3、学习酶定量活性测定方法和原则。了解血清碱性磷酸酶活性测定的临床意义
4、掌握酶活性表示的方法。 5、掌握凝胶层析的原理、熟悉凝胶层析的操作、了解凝胶层析的的主要用途 二、思考题 1、酶测定实验中活性单位的规定是什么？ 2、层析介质可分为哪几大类？ 3、样品与介质通过什么样的相互作用使不同的样品的得以分离？ 实验七转氨基作用的观察（纸层析法） 一、目的要求 1、复习转氨基作用的概念，掌握转氨基作用的知识。 2、学习纸层析法观察转氨基作用的实验方法。 3、学习纸层析法的基本原理 二、思考题 1、什么叫转氨基作用？GPT催化什么化学反应？ 2、什么叫Rf值？在纸层析法实验中有何使用价值？ 3、本实验是如何观察转氨基作用的？ 实验八动物肝组织核酸的分离提取 与组成成分鉴定 一、 目的要求 1、掌握核酸的种类、组成。 2、熟悉离心机的操作方法。 3、掌握离心法分离提取混合物的原理。 4、了解组织中核酸的分离提取原理。 二、思考题 1、核酸分哪两类？其组成成分有哪些？ 2、本实验如何鉴定核酸的组成成分？ 3、组织核酸主要的存在方式是什么？实验中如何将核酸与其分开？ 4、离心机使用有哪些注意事项？ 实验九SDS-PAGE[新开]
4 4、掌握酶活性表示的方法。 5、 掌握凝胶层析的原理、熟悉凝胶层析的操作、了解凝胶层析的的主要用途 二、思考题 1、酶测定实验中活性单位的规定是什么？ 2、层析介质可分为哪几大类？ 3、样品与介质通过什么样的相互作用使不同的样品的得以分离？ 实验七 转氨基作用的观察（纸层析法） 一、目的要求 1、 复习转氨基作用的概念，掌握转氨基作用的知识。 2、 学习纸层析法观察转氨基作用的实验方法。 3、 学习纸层析法的基本原理 二、思考题 1、 什么叫转氨基作用？GPT 催化什么化学反应？ 2、 什么叫 Rf 值？在纸层析法实验中有何使用价值？ 3、 本实验是如何观察转氨基作用的？ 实验八 动物肝组织核酸的分离提取 与组成成分鉴定 一、 目的要求 1、 掌握核酸的种类、组成。 2、 熟悉离心机的操作方法。 3、 掌握离心法分离提取混合物的原理。 4、 了解组织中核酸的分离提取原理。 二、 思考题 1、核酸分哪两类？其组成成分有哪些？ 2、 本实验如何鉴定核酸的组成成分？ 3、 组织核酸主要的存在方式是什么？实验中如何将核酸与其分开？ 4、离心机使用有哪些注意事项？ 实验九 SDS-PAGE [新开]
一、目的要求： 1、SDS-PAGE分离纯化蛋白质的基本原理。 2、熟悉SDS-PAGE的基本操作方法？ 3、了解操作时要注意的安全问题？ 二、思考题： 1、SDS-PAGE分离纯化蛋白质的基本原理是什么？ 2、SDS的作用是什么？ 3、从本次实验中所学到的知识，谈谈你对聚丙烯酰胺疑胶类美容产品 的安全性认识。 第十、醋酸纤维薄膜电泳 第十一、血清无机磷测定 第十二、 胆固醇的测定 第十三、血球y一球蛋白的分离纯化[综合实验，] 注：1一9为必开的基本实验内容，10一13为供选择的实验内容。 5
5 一、 目的要求： 1、SDS-PAGE 分离纯化蛋白质的基本原理。 2、熟悉 SDS-PAGE 的基本操作方法？ 3、了解操作时要注意的安全问题？ 二、思考题： 1、SDS-PAGE 分离纯化蛋白质的基本原理是什么？ 2、SDS 的作用是什么？ 3、从本次实验中所学到的知识，谈谈你对聚丙烯酰胺凝胶类美容产品 的安全性认识。 第十、 醋酸纤维薄膜电泳 第十一、 血清无机磷测定 第十二、 胆固醇的测定 第十三、 血球－球蛋白的分离纯化［综合实验，］ 注：１－9 为必开的基本实验内容， １０－１3 为供选择的实验内容