第五节蛋白质的分离、纯化和表征 蛋白质的酸碱性质 二 蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 三 蛋白质相对分子质量的测定 四、蛋白质的分离纯化 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 本节小结
2 第五节 蛋白质的分离、纯化和表征 一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 三、蛋白质相对分子质量的测定 四、蛋白质的分离纯化 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 本节小结
一、蛋白质的酸碱性质 OH OH 带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 带负电荷的蛋白质 1.蛋白质的等电点I: 2.蛋白质电泳： 3
3 一、蛋白质的酸碱性质 1.蛋白质的等电点PI： 2.蛋白质电泳：
二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 1.蛋白质溶液是胶体溶液 2.维持蛋白质的胶体系统稳定的因素 ●1一100nm大小的质点在动力学上是稳定的. ●某一pH下质点带有同种电荷，互相排斥。 ·质点能与溶剂（水）形成水化层，相互间不易靠拢
4 二、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 1.蛋白质溶液是胶体溶液 2.维持蛋白质的胶体系统稳定的因素 ⚫1－100nm大小的质点在动力学上是稳定的. ⚫某一pH下质点带有同种电荷，互相排斥。 ⚫质点能与溶剂（水）形成水化层，相互间不易靠拢
蛋白质的沉淀作用 1.可逆沉淀： 2.不可逆沉淀： 3.沉淀蛋白质的方法 冬等电点沉淀（可逆，不变性）强酸碱沉淀（不可逆）： 蛋白质的盐析（可逆，不变性）：硫酸铵、硫酸钠、氯化钠。 ~有机溶剂沉淀蛋白质（可逆或不可逆）：乙醇、丙酮或甲醇。 重金属盐和生物碱剂沉淀蛋白质：Hg2+、Ag2+、单宁酸、 苦味酸。 加热（变性）沉淀蛋白质：
5 蛋白质的沉淀作用 1.可逆沉淀: 2.不可逆沉淀: 3.沉淀蛋白质的方法 ❖等电点沉淀(可逆，不变性)强酸碱沉淀(不可逆): ❖蛋白质的盐析(可逆,不变性)：硫酸铵、硫酸钠、氯化钠。 ❖有机溶剂沉淀蛋白质(可逆或不可逆):乙醇、丙酮或甲醇。 ❖重金属盐和生物碱剂沉淀蛋白质：Hg2＋ 、Ag2＋、单宁酸、 苦味酸。 ❖加热（变性）沉淀蛋白质：
三、蛋白质相对分子质量的测定 1.根据化学组成测定最低相对分子质量 X(某.)的原子量 最低相对分子质量= ×100 Y(某.)的百分含量 例1：肌红蛋白和血红蛋白含铁量均为0.335%，计算二者的相对分 子质量。 例2：一种纯酶按重量计算含亮氨酸1.65%和异亮氨酸2.48%，问 其最低相对分子质量？ 2.沉降法（超速离心法）
6 三、蛋白质相对分子质量的测定 1.根据化学组成测定最低相对分子质量 例1：肌红蛋白和血红蛋白含铁量均为0.335%,计算二者的相对分 子质量。 例2：一种纯酶按重量计算含亮氨酸1.65%和异亮氨酸2.48%，问 其最低相对分子质量？ 2. 沉降法（超速离心法） X（某.）的原子量 Y（某.）的百分含量 最低相对分子质量＝ ×100