3.凝胶过滤法测定相对分子质量（分子筛层析） 凝胶过滤的介质：多孔网状 凝胶珠。 ·排阻极限。被分离的相对分 说86： 子质量范围。 。经常使用的凝胶：交联葡聚 糖(44页，Sephadex),聚 polymer beads 丙烯酰胺和琼脂糖（49 页，Sepharose)。 。凝胶过滤的原理：与分子大 Protein mixture is added 小和形状有关。 to column containing cross-linked polymer ●颗粒大的移动快，颗粒小的 移动慢。形状接近球体。 (b
7 3. 凝胶过滤法测定相对分子质量（分子筛层析） ⚫ 凝胶过滤的介质：多孔网状 凝胶珠。 ⚫ 排阻极限。被分离的相对分 子质量范围。 ⚫ 经常使用的凝胶：交联葡聚 糖（44页，Sephadex），聚 丙烯酰胺和琼脂糖（49 页,Sepharose）。 ⚫ 凝胶过滤的原理：与分子大 小和形状有关。 ⚫ 颗粒大的移动快，颗粒小的 移动慢。形状接近球体
测定方法： 测几种蛋白质相对分子质量 分子量≈49000 标准物的Ve(洗脱体)。 ● 再测待测样品的Ve。 4.5 F 4.0 A B 待测的 蛋白质 10000067000 25000 80 90 100 洗脱体积(ml) 图3106洗脱体积与分子量的关系
8 测定方法： ⚫ 测几种蛋白质相对分子质量 标准物的Ve（洗脱体）。 ⚫ 再测待测样品的Ve
4.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 SDS:阴离子去污剂，十二烷基硫酸纳 o Cfa一(H知10CHgD O-Na+ 破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用。 巯基乙醇：HO-CH2-CH2-SH能打开二硫键 SDS以其烃链与蛋白质分子的侧链结合成复合体， 每两个氨基酸残基结合一个SDS分子
9 4. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 ⚫ SDS: 阴离子去污剂，十二烷基硫酸纳 破裂蛋白质分子中的氢键和疏水作用。 ⚫ 巯基乙醇：HO – CH2 – CH2 - SH 能打开二硫键 SDS以其烃链与蛋白质分子的侧链结合成复合体， 每两个氨基酸残基结合一个SDS分子。 10