10 城疫)，或者效力检查不合格(例如鸡新城疫疫苗接种后，血凝抑抗体滴度不能达到应有的水 平或抽检攻毒保护率低于标准要求)。均认为免疫接种失败。 分析免疫接种失败原因，必须从客观实际出发，周密地考虑各方面的因素，切忌主观武 断。事实上，每次免疫接种失败，都有其特殊的原因，但为了便于分析，开阔思路，把一些 可能的原因归纳如下，以供参考。 1．雏禽在免疫接种时，存在有母源抗体。 2．疫苗选择不当，在疫病严重流行的地区，仅选用安全性好，但免疫效果较低的疫苗 品系，例如，在有速发嗜内脏型新城疫流行的地区选用Ⅲ系苗。 3．免疫接种途径错误，例如，1 周龄内的雏鸡，采用饮水法接种新城疫疫苗；强化免 疫时，把新城疫Ⅰ系疫苗用于点眼、滴鼻。把灭活苗用于饮水等。 4．疫苗质量差。 5．疫苗运输、保管不当，造成疫苗失效或减效。 6．使用超过有效期的疫苗。 7．免疫接种工作不认真，例如采用饮水法免疫时饮水器不足，进行疫苗稀释时计算错 误或稀释不均匀，没有把应该接种的禽只全部接种等。 8．鸡群中有免疫抑制性疾病存在，如法氏囊病、马立克氏病等。 9．不同种类疫苗之间的干扰作用。 10．服用抗菌药物或免疫抑制性药物。 11．接种时禽群内已潜伏有强毒病原微生物，或由接种人员及接种工具带入强毒病原微 生物。 三、剖检技术及病变检查要点 病理剖检和病变检查是诊断传染病的重要方法之一。它既可验证临床诊断结果的正确与 否，又可为实验室诊断方法和内容的选择提供进一步的参考依据。 对家禽的基本剖技术可参考下述方法： 1．将病、死禽只羽毛、皮肤用水浸湿，以减少空气染污。用力压迫，使髋关节断袭， 两腿叉开。 2．在靠近胸骨柄处剪开腹肌，沿两侧胁骨缘向前剪开胸肌，用力将胸骨向上折断、掀 起，充分暴露胸腔和腹腔。 3．先检查胸腔脏器，如心、肺、气囊等；再检查腹腔脏器，如肝、脾、肾、法氏囊、 卵巢、睾丸、气囊、输卵管、输尿管及胃、肠浆膜，观察有无变性、坏死、肿瘤等明显异常 变化。需要做细菌或病毒分离培养时，则应按照无菌手续采取所需病料。最后剖开口腔、气 管、食道、胃及肠管检查有无典型病理变化。 四、细菌分离、培养技术 细菌分离培养不仅是确诊传染病的重要和可靠手段，而且也是进上步研究病原特性，如 耐药性、致病性和生化特性等必不可少的步骤。病原细菌分离培养的一般方法如下： 1．采取接种材料：分离细菌一般多采取心血、淋巴结、肝脏或脾脏，雏鸡白痢可取胆 汁或未吸收完的卵黄。所选病料应在病鸡自然残废后立即采取，并严格按照无菌要求操作。 病料取好后应尽快接种到培养基上，不应久放，以免被杂菌污染或病料中细菌死亡而得出错 误培养结果
10 城疫)，或者效力检查不合格(例如鸡新城疫疫苗接种后，血凝抑抗体滴度不能达到应有的水 平或抽检攻毒保护率低于标准要求)。均认为免疫接种失败。 分析免疫接种失败原因，必须从客观实际出发，周密地考虑各方面的因素，切忌主观武 断。事实上，每次免疫接种失败，都有其特殊的原因，但为了便于分析，开阔思路，把一些 可能的原因归纳如下，以供参考。 1．雏禽在免疫接种时，存在有母源抗体。 2．疫苗选择不当，在疫病严重流行的地区，仅选用安全性好，但免疫效果较低的疫苗 品系，例如，在有速发嗜内脏型新城疫流行的地区选用Ⅲ系苗。 3．免疫接种途径错误，例如，1 周龄内的雏鸡，采用饮水法接种新城疫疫苗；强化免 疫时，把新城疫Ⅰ系疫苗用于点眼、滴鼻。把灭活苗用于饮水等。 4．疫苗质量差。 5．疫苗运输、保管不当，造成疫苗失效或减效。 6．使用超过有效期的疫苗。 7．免疫接种工作不认真，例如采用饮水法免疫时饮水器不足，进行疫苗稀释时计算错 误或稀释不均匀，没有把应该接种的禽只全部接种等。 8．鸡群中有免疫抑制性疾病存在，如法氏囊病、马立克氏病等。 9．不同种类疫苗之间的干扰作用。 10．服用抗菌药物或免疫抑制性药物。 11．接种时禽群内已潜伏有强毒病原微生物，或由接种人员及接种工具带入强毒病原微 生物。 三、剖检技术及病变检查要点 病理剖检和病变检查是诊断传染病的重要方法之一。它既可验证临床诊断结果的正确与 否，又可为实验室诊断方法和内容的选择提供进一步的参考依据。 对家禽的基本剖技术可参考下述方法： 1．将病、死禽只羽毛、皮肤用水浸湿，以减少空气染污。用力压迫，使髋关节断袭， 两腿叉开。 2．在靠近胸骨柄处剪开腹肌，沿两侧胁骨缘向前剪开胸肌，用力将胸骨向上折断、掀 起，充分暴露胸腔和腹腔。 3．先检查胸腔脏器，如心、肺、气囊等；再检查腹腔脏器，如肝、脾、肾、法氏囊、 卵巢、睾丸、气囊、输卵管、输尿管及胃、肠浆膜，观察有无变性、坏死、肿瘤等明显异常 变化。需要做细菌或病毒分离培养时，则应按照无菌手续采取所需病料。最后剖开口腔、气 管、食道、胃及肠管检查有无典型病理变化。 四、细菌分离、培养技术 细菌分离培养不仅是确诊传染病的重要和可靠手段，而且也是进上步研究病原特性，如 耐药性、致病性和生化特性等必不可少的步骤。病原细菌分离培养的一般方法如下： 1．采取接种材料：分离细菌一般多采取心血、淋巴结、肝脏或脾脏，雏鸡白痢可取胆 汁或未吸收完的卵黄。所选病料应在病鸡自然残废后立即采取，并严格按照无菌要求操作。 病料取好后应尽快接种到培养基上，不应久放，以免被杂菌污染或病料中细菌死亡而得出错 误培养结果
11 2．制备培养基：一般大多数细菌在普通营养琼脂平板或肉汤中均能良好生长，因此最 常用的培养基主要是普通琼脂或肉汤。为了特殊目的，有时需用特殊培养基，例如禽霍乱巴 氏杆菌，为检查其荧光性菌落，要用血清琼脂平板（普通琼脂中加入 10%的鸡或绵羊血清）； 为让其生长更旺盛并检查有无溶血性，要用血液琼脂平板（普通琼脂中加入 10%的新鲜绵 羊血）。另外，对霉形体、孤菌、霉菌及传染性鼻炎等病原体的分离培养，也需要较特殊的 培养基。 普通琼脂的制备方法：取牛肉汤 100 毫升，加蛋白胨 1 克，氯化钠 0.8 克，琼脂粉 2 克，加 热使其充分溶化，用 NaHO 溶液调 PH7.8，15 磅高压灭菌 30 分钟，冷至 45℃左右时倾注于 干烤消毒过的平皿中，每个平皿约 20 毫升，冷却凝固后用消毒纸包好放 4℃冰箱备用，可 保存 1～2 周。 若上述培养基中不加琼脂粉便叫普通肉汤。将普通肉汤装入 10 毫升的试管中，每管 2～ 3 毫升，高压灭菌 30 分钟后放 4℃冰箱备用，可保存数月。 3．细菌的接种：将选好的病料放于灭菌容器内，在无菌室或无菌罩或酒精灯下，以烧 热的铁片或剪刀在病料表面烧烙消毒，然后在烧烙处剪一小口，用接种棒插入小口，勾取少 量组织接入肉汤内，或在普通琼脂平板上划线接种，然后将接种过的肉汤或平皿放入 37℃ 温箱培养 18～24 小时，观察细菌生长情况，并将培养物涂片染色镜检，或进一步纯培养后 作生化试验，动物接种试验或药敏试验。根据以上培养特性，染色镜检特性、生化试验结果 以及动物接种结果对疫病做出最后诊断。不同细菌的各种特性可参考后面有关内容或微生物 学教材。 所有过程都应严格无菌操作。 五、病原菌药敏试验 抗菌药物（中草药、抗菌素、磺胺类等）是兽医临床常用的药物，但是各种病原体对抗 菌药物的敏感性各不相同，同时，由于抗菌药物的广泛应用，以及广谱抗菌素的不断增加， 它们虽然对病原体有一定的作用，但在使用不当时常导致抗药性的形成，甚至干扰机体内的 正常微生物群的作用，反而对机体带来不良影响。因此，测定病原菌对抗菌药物的敏感性， 正确使用抗菌药物，对于临床治疗工作具有重要的意义，药敏试验有以下几种方法。 （一）纸片法 纸片法操作简单，应用也最普遍。 抗菌素纸片的制备 1．将质量较好的滤纸用打孔机打成直径 6 毫米的圆片，每 100 片放入一小瓶中，160℃ 干热灭菌 1～2 小时，或用高压灭菌（15 磅 30 分钟）后在 60℃条件下烘干。 2．抗菌药物的浓度（用蒸馏水或生理盐水稀释） 青霉素 200 单位/毫升 其他抗菌素 1000 微克/毫升 磺胺类药物 10 毫克/毫升 中草药制剂 1 克/毫升 3．用无菌操作法将欲测的抗菌药物溶液 1 毫升，加入 100 片纸片中，置冰箱内浸泡 1～ 2 小时，如立即试验可不烘干，若保存备用可用下法烘干（干燥的抗菌素纸片可保存六个月）。 （1）培养皿烘干法：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于 37℃温箱内保持 2～3 小时即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥。 （2）真空抽干法：将放有抗菌药物纸片的试管，放在干燥器内，用真空抽气机抽干， 一般需要 18～24 小时。 4．将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱内保存备用，并用标准敏感菌株作
11 2．制备培养基：一般大多数细菌在普通营养琼脂平板或肉汤中均能良好生长，因此最 常用的培养基主要是普通琼脂或肉汤。为了特殊目的，有时需用特殊培养基，例如禽霍乱巴 氏杆菌，为检查其荧光性菌落，要用血清琼脂平板（普通琼脂中加入 10%的鸡或绵羊血清）； 为让其生长更旺盛并检查有无溶血性，要用血液琼脂平板（普通琼脂中加入 10%的新鲜绵 羊血）。另外，对霉形体、孤菌、霉菌及传染性鼻炎等病原体的分离培养，也需要较特殊的 培养基。 普通琼脂的制备方法：取牛肉汤 100 毫升，加蛋白胨 1 克，氯化钠 0.8 克，琼脂粉 2 克，加 热使其充分溶化，用 NaHO 溶液调 PH7.8，15 磅高压灭菌 30 分钟，冷至 45℃左右时倾注于 干烤消毒过的平皿中，每个平皿约 20 毫升，冷却凝固后用消毒纸包好放 4℃冰箱备用，可 保存 1～2 周。 若上述培养基中不加琼脂粉便叫普通肉汤。将普通肉汤装入 10 毫升的试管中，每管 2～ 3 毫升，高压灭菌 30 分钟后放 4℃冰箱备用，可保存数月。 3．细菌的接种：将选好的病料放于灭菌容器内，在无菌室或无菌罩或酒精灯下，以烧 热的铁片或剪刀在病料表面烧烙消毒，然后在烧烙处剪一小口，用接种棒插入小口，勾取少 量组织接入肉汤内，或在普通琼脂平板上划线接种，然后将接种过的肉汤或平皿放入 37℃ 温箱培养 18～24 小时，观察细菌生长情况，并将培养物涂片染色镜检，或进一步纯培养后 作生化试验，动物接种试验或药敏试验。根据以上培养特性，染色镜检特性、生化试验结果 以及动物接种结果对疫病做出最后诊断。不同细菌的各种特性可参考后面有关内容或微生物 学教材。 所有过程都应严格无菌操作。 五、病原菌药敏试验 抗菌药物（中草药、抗菌素、磺胺类等）是兽医临床常用的药物，但是各种病原体对抗 菌药物的敏感性各不相同，同时，由于抗菌药物的广泛应用，以及广谱抗菌素的不断增加， 它们虽然对病原体有一定的作用，但在使用不当时常导致抗药性的形成，甚至干扰机体内的 正常微生物群的作用，反而对机体带来不良影响。因此，测定病原菌对抗菌药物的敏感性， 正确使用抗菌药物，对于临床治疗工作具有重要的意义，药敏试验有以下几种方法。 （一）纸片法 纸片法操作简单，应用也最普遍。 抗菌素纸片的制备 1．将质量较好的滤纸用打孔机打成直径 6 毫米的圆片，每 100 片放入一小瓶中，160℃ 干热灭菌 1～2 小时，或用高压灭菌（15 磅 30 分钟）后在 60℃条件下烘干。 2．抗菌药物的浓度（用蒸馏水或生理盐水稀释） 青霉素 200 单位/毫升 其他抗菌素 1000 微克/毫升 磺胺类药物 10 毫克/毫升 中草药制剂 1 克/毫升 3．用无菌操作法将欲测的抗菌药物溶液 1 毫升，加入 100 片纸片中，置冰箱内浸泡 1～ 2 小时，如立即试验可不烘干，若保存备用可用下法烘干（干燥的抗菌素纸片可保存六个月）。 （1）培养皿烘干法：将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于 37℃温箱内保持 2～3 小时即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥。 （2）真空抽干法：将放有抗菌药物纸片的试管，放在干燥器内，用真空抽气机抽干， 一般需要 18～24 小时。 4．将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱内保存备用，并用标准敏感菌株作
12 敏感性试验，记录抑制圈的直径，若抑菌圈比原来的缩小，则表明该抗菌药物已失效，不能 再用。 培养基：一般细菌如肠道杆菌及葡萄球菌等可用普通琼脂平板；链球菌、巴氏杆菌或肺 炎球菌等可用血液琼脂平板；测定对磺胺类药物的敏感试验时，应使用无蛋白胨琼脂平板。 菌液：为培养 10～13 小时的幼龄菌液（抑菌圈的大小受菌液浓度的影响较大，因而菌液培 养的时间一般不宜超过 17 小时）。 试验方法：用白金耳取培养 10～18 小时的幼龄菌，均匀涂抹于琼脂平板上，待干燥后， 用镊子夹取各种抗菌素纸片，平均分布于琼脂表面（每个平板放置 4～5 片），在 37℃温箱 内培养 18 小时后观察结果。 结果测定：根据抗菌纸片周围无菌区（抑菌区）的大小，测定其抗药程度。因此，必须 测量抑菌圈的直径（包括纸片），按其大小，报告该菌株对某种药物敏感与否。 1．青霉素抑菌圈的标准： 抑菌圈直径 敏感性 ＜10 毫米 10～20 毫米 ＞20 毫米 抗药 中度敏感 极度敏感 2．其他抗菌素及磺胺类药物的敏感标准： 抑菌圈直径 敏感性 ＜10 毫米 11～15 毫米 ＞15 毫米 抗药 中度敏感 极度敏感 3．中药抑菌素的标准： 抑菌圈直径 敏感性 ＜15 毫米 15 毫米 15～20 毫米 抗药 中度敏感 极度敏感 （二）快速敏感试验――葡萄糖指示法 许多细菌能分解葡萄糖而产酸，使培养基 PH 值发生改变，若在培养基中加入抗菌药物， 接种的细菌对抗菌药物敏感时，培养基中的葡萄糖就不被细菌分解利用，不会形成酸性物质， PH 值不发生变化，因而指示剂也不变色，相反，细菌对抗菌药物不敏感时，抗菌药物抑制 不了该菌的生长繁殖，因而分解葡萄糖并产酸，使加入其中的溴甲酚紫由紫变黄，以此来测 定细菌对药物的敏感性。具体操作方法如下： 1．抗菌素纸片及菌液的准备，同纸片法。 2．配制指示培养基：取普通琼脂 15 毫升，加入 1%葡萄糖及 0.6%溴甲酚紫指示剂 0.7 毫升。 3．灭菌后，待培养基凉至 50℃左右时，加入菌液 0.5 毫升，充分混匀后（防止气泡） 作倾注培养。 4．待凝固后，用镊子将抗菌素纸片分别贴于表面，于 37℃条件下培养 24 小时后观察。 5．结果判定：纸片周围有细菌生长者呈现黄色，不生长时仍为紫色，并侧量抑菌圈的 直径，判定其敏感方法，方法同纸片法。 （三）试管法
12 敏感性试验，记录抑制圈的直径，若抑菌圈比原来的缩小，则表明该抗菌药物已失效，不能 再用。 培养基：一般细菌如肠道杆菌及葡萄球菌等可用普通琼脂平板；链球菌、巴氏杆菌或肺 炎球菌等可用血液琼脂平板；测定对磺胺类药物的敏感试验时，应使用无蛋白胨琼脂平板。 菌液：为培养 10～13 小时的幼龄菌液（抑菌圈的大小受菌液浓度的影响较大，因而菌液培 养的时间一般不宜超过 17 小时）。 试验方法：用白金耳取培养 10～18 小时的幼龄菌，均匀涂抹于琼脂平板上，待干燥后， 用镊子夹取各种抗菌素纸片，平均分布于琼脂表面（每个平板放置 4～5 片），在 37℃温箱 内培养 18 小时后观察结果。 结果测定：根据抗菌纸片周围无菌区（抑菌区）的大小，测定其抗药程度。因此，必须 测量抑菌圈的直径（包括纸片），按其大小，报告该菌株对某种药物敏感与否。 1．青霉素抑菌圈的标准： 抑菌圈直径 敏感性 ＜10 毫米 10～20 毫米 ＞20 毫米 抗药 中度敏感 极度敏感 2．其他抗菌素及磺胺类药物的敏感标准： 抑菌圈直径 敏感性 ＜10 毫米 11～15 毫米 ＞15 毫米 抗药 中度敏感 极度敏感 3．中药抑菌素的标准： 抑菌圈直径 敏感性 ＜15 毫米 15 毫米 15～20 毫米 抗药 中度敏感 极度敏感 （二）快速敏感试验――葡萄糖指示法 许多细菌能分解葡萄糖而产酸，使培养基 PH 值发生改变，若在培养基中加入抗菌药物， 接种的细菌对抗菌药物敏感时，培养基中的葡萄糖就不被细菌分解利用，不会形成酸性物质， PH 值不发生变化，因而指示剂也不变色，相反，细菌对抗菌药物不敏感时，抗菌药物抑制 不了该菌的生长繁殖，因而分解葡萄糖并产酸，使加入其中的溴甲酚紫由紫变黄，以此来测 定细菌对药物的敏感性。具体操作方法如下： 1．抗菌素纸片及菌液的准备，同纸片法。 2．配制指示培养基：取普通琼脂 15 毫升，加入 1%葡萄糖及 0.6%溴甲酚紫指示剂 0.7 毫升。 3．灭菌后，待培养基凉至 50℃左右时，加入菌液 0.5 毫升，充分混匀后（防止气泡） 作倾注培养。 4．待凝固后，用镊子将抗菌素纸片分别贴于表面，于 37℃条件下培养 24 小时后观察。 5．结果判定：纸片周围有细菌生长者呈现黄色，不生长时仍为紫色，并侧量抑菌圈的 直径，判定其敏感方法，方法同纸片法。 （三）试管法
13 试管法是将药物作倍比稀释，观察不同含量对细菌的抑制能力，以判定细菌对药物的敏 感度，常用于测定抗菌素及中草药对细菌的抑制能力。 试验方法：取无菌试管 10 支，排列于试管架上，于第一管中加入肉汤 1.9 毫升，其余 9 管各加入 1 毫升，吸取配制好的抗菌素原液、磺胺类原液或中药原液 0.1 毫升，加入第一管 中，充分混合后吸出 1 毫升吸入第二管中，混合后，再从第二管移 1 毫升到第三管，依此移 到第九管中，吸出 1 毫升弃去。第十管不加药液作对照。然后向各管中加入幼龄菌液稀释液 0.05 毫升（培养 17 小时的菌液作 1:1000 稀释，培养 6 小时作 1:10 稀释），于 37℃温箱中培 养 18～24 小时后观察结果。 结果测定：培养 18 小时后，凡无细菌生长的药物最高稀释管中即为该菌对药物的敏感 度。若由于加入药物（如中药）而使培养基变为混浊，眼观不易判断时，可进行接种或涂片 染色镜检判定结果。 药物名称 敏感（微克/毫克） 中度敏感（微克/毫 克） 抗药（微克/毫克） 磺胺类药 ＜50 50～1000 ＞1000 链霉素 ＜5 5～20 ＞20 青霉素 ＜0.1 0.1～0.2 ＞2 多粘菌素、庆大霉素 ＜1 1～10 ＞10 金霉素、土霉素、 四环素、红霉素 新霉素、氯霉素 合霉素 ＜2 2～6 ＞6 影响抗菌药物敏感试验的因素 1．器材：抗菌药物敏感性试验是利用微生物学方法进行的，其用量极微，实验仪器的 规格和精确度会直接影响实验结果，因此必须严格要求。试管、吸管、培养皿和其它器皿， 尤其是定量用的吸管，均须选用中性，硬质一级品，并且必须经过彻底灭菌。 2．培养基成分：培养基成分不但影响敏感菌株的生长繁殖，并可影响到抑菌圈的直径。 不同批号的蛋白胨，所含的氨基氮的总量不同，因而抑菌圈大小有一定差别。氯化钠、琼脂 中的钙、镁离子影响链霉素、新霉素的扩散，尤其是氯化钠对链霉素影响大，含量越高，抑 菌圈越小，甚至不出现反应，但氯化钠对多粘菌素反而有助于扩散。琼脂含量和平板厚度也 影响抑菌圈的大小，含量大，影响抗菌素的扩散，一般以 1.3～1.6%的浓度较合适，琼脂层 过厚抑菌圈也较小，以 2～4 厘米为最适宜。磺胺类药用琼脂平板法试验时，不能含蛋白胨， 因胨会使磺胺失去作用。血清成分的吸附或结合作用，会使金霉素、中药提取物抗菌作用减 弱。 表 4 抗菌素的溶解度、稳定性及保存有效期 抗菌素 溶解度及稳定性 保存期 青霉素： 易溶于水，在中性水溶液中较 稳定，尢在 PH6～6.5 的磷酸 盐缓冲液中最稳定 4℃2～3 周，-10℃可延长 1 倍 链霉素 易溶于水，水溶液中较稳定 4℃保存 2 周 盐酸四环素 溶于水，溶解度为 132 毫克/ 毫升，PH6.3 缓冲液中溶解 4℃有效期 2 周
13 试管法是将药物作倍比稀释，观察不同含量对细菌的抑制能力，以判定细菌对药物的敏 感度，常用于测定抗菌素及中草药对细菌的抑制能力。 试验方法：取无菌试管 10 支，排列于试管架上，于第一管中加入肉汤 1.9 毫升，其余 9 管各加入 1 毫升，吸取配制好的抗菌素原液、磺胺类原液或中药原液 0.1 毫升，加入第一管 中，充分混合后吸出 1 毫升吸入第二管中，混合后，再从第二管移 1 毫升到第三管，依此移 到第九管中，吸出 1 毫升弃去。第十管不加药液作对照。然后向各管中加入幼龄菌液稀释液 0.05 毫升（培养 17 小时的菌液作 1:1000 稀释，培养 6 小时作 1:10 稀释），于 37℃温箱中培 养 18～24 小时后观察结果。 结果测定：培养 18 小时后，凡无细菌生长的药物最高稀释管中即为该菌对药物的敏感 度。若由于加入药物（如中药）而使培养基变为混浊，眼观不易判断时，可进行接种或涂片 染色镜检判定结果。 药物名称 敏感（微克/毫克） 中度敏感（微克/毫 克） 抗药（微克/毫克） 磺胺类药 ＜50 50～1000 ＞1000 链霉素 ＜5 5～20 ＞20 青霉素 ＜0.1 0.1～0.2 ＞2 多粘菌素、庆大霉素 ＜1 1～10 ＞10 金霉素、土霉素、 四环素、红霉素 新霉素、氯霉素 合霉素 ＜2 2～6 ＞6 影响抗菌药物敏感试验的因素 1．器材：抗菌药物敏感性试验是利用微生物学方法进行的，其用量极微，实验仪器的 规格和精确度会直接影响实验结果，因此必须严格要求。试管、吸管、培养皿和其它器皿， 尤其是定量用的吸管，均须选用中性，硬质一级品，并且必须经过彻底灭菌。 2．培养基成分：培养基成分不但影响敏感菌株的生长繁殖，并可影响到抑菌圈的直径。 不同批号的蛋白胨，所含的氨基氮的总量不同，因而抑菌圈大小有一定差别。氯化钠、琼脂 中的钙、镁离子影响链霉素、新霉素的扩散，尤其是氯化钠对链霉素影响大，含量越高，抑 菌圈越小，甚至不出现反应，但氯化钠对多粘菌素反而有助于扩散。琼脂含量和平板厚度也 影响抑菌圈的大小，含量大，影响抗菌素的扩散，一般以 1.3～1.6%的浓度较合适，琼脂层 过厚抑菌圈也较小，以 2～4 厘米为最适宜。磺胺类药用琼脂平板法试验时，不能含蛋白胨， 因胨会使磺胺失去作用。血清成分的吸附或结合作用，会使金霉素、中药提取物抗菌作用减 弱。 表 4 抗菌素的溶解度、稳定性及保存有效期 抗菌素 溶解度及稳定性 保存期 青霉素： 易溶于水，在中性水溶液中较 稳定，尢在 PH6～6.5 的磷酸 盐缓冲液中最稳定 4℃2～3 周，-10℃可延长 1 倍 链霉素 易溶于水，水溶液中较稳定 4℃保存 2 周 盐酸四环素 溶于水，溶解度为 132 毫克/ 毫升，PH6.3 缓冲液中溶解 4℃有效期 2 周
14 1000 微克/毫升 盐酸金霉素 易溶于水，溶解度 0.5～0.6 毫克/毫升，PH2～5 之间较稳 定，高浓度 PH2～2.9 范围更 稳定 4℃有效期 60 天 氯化四环素和氧化四环素 溶于水，酸性溶液较稳定 4℃有效期 6 周 新霉素 易溶于水 4℃,1 年 紫霉素硫酸盐 易溶于水，溶解度 500 毫克/ 毫升 4℃，1 年 卡那霉素硫酸盐 溶于水，250 毫克/毫升， PH2～9 范围稳定 4℃，有效期半年 多粘菌素 PH3～5 的溶液中最稳定 4℃，1 周 杆菌肽 易溶于甲醇、乙醇，也能溶于 水，在酸性环境中稳定 4℃，1 周 氯霉素 微溶于水，易溶于甲醇、乙醇、 丁醇、丙酮及醋酸中 4～20℃有效期 1 年 红霉素 易溶于有机溶媒中，水中溶解 度仅为 2 毫克/毫升，PH7 最 稳定 4℃，二个月 黄霉素 易溶于 N/10 氢氧化钠溶液， 乙醇、乙醚，溶解度 1%，耐 热，蛋白胨、血清成分可阻止 其抑菌作用 3．敏感菌株：菌种的敏感度差别较大，如金黄色葡萄球菌对青霉素最敏感。四联球菌 对四环素族最敏感。大肠杆菌对链霉素、多粘菌素敏感。因此，接种量要适宜，接种量多， 即使最敏感的菌株也不能抑制其发育，影响实验结果。 4．标准液和被检液：要用同一方法和在同一条件下配制，避免因操作方法不一致而造 成误差。 5．培养时间：细菌在发育过程中，对数期繁殖最快，以后处于稳定和衰落期，必须掌 握这一规律和特性，以便达到预期试验目的。时间过短则细菌不繁殖，过长则敏感性降低， 抑菌圈不清楚。一般以 37℃16～18 小时为适宜。 6．PH 值：对实验结果有显著的影响，新霉素、链霉素在碱性环境中活性最大，而在酸 性时抑菌圈缩小。四环素族以酸性为佳。青霉素、氯霉素以中性为宜。 六、病毒分离培养技术 病毒分离培养是确诊病毒性传染病的最可靠方法之一，其分离培养技术包括鸡胚接种、 动物接种和细胞接种分离培养。其中最简便、适用因而也最常用的是用鸡胚分离培养病毒。 1．接种材料的制备 分离、培养病毒用的材料除了应新鲜、无菌外，还要做一些特殊处理。首先应将所选取 的病料在无菌容器中剪碎、研磨，并根据所培养病毒特性用肉汤、生物盐水或特定稀释液将
14 1000 微克/毫升 盐酸金霉素 易溶于水，溶解度 0.5～0.6 毫克/毫升，PH2～5 之间较稳 定，高浓度 PH2～2.9 范围更 稳定 4℃有效期 60 天 氯化四环素和氧化四环素 溶于水，酸性溶液较稳定 4℃有效期 6 周 新霉素 易溶于水 4℃,1 年 紫霉素硫酸盐 易溶于水，溶解度 500 毫克/ 毫升 4℃，1 年 卡那霉素硫酸盐 溶于水，250 毫克/毫升， PH2～9 范围稳定 4℃，有效期半年 多粘菌素 PH3～5 的溶液中最稳定 4℃，1 周 杆菌肽 易溶于甲醇、乙醇，也能溶于 水，在酸性环境中稳定 4℃，1 周 氯霉素 微溶于水，易溶于甲醇、乙醇、 丁醇、丙酮及醋酸中 4～20℃有效期 1 年 红霉素 易溶于有机溶媒中，水中溶解 度仅为 2 毫克/毫升，PH7 最 稳定 4℃，二个月 黄霉素 易溶于 N/10 氢氧化钠溶液， 乙醇、乙醚，溶解度 1%，耐 热，蛋白胨、血清成分可阻止 其抑菌作用 3．敏感菌株：菌种的敏感度差别较大，如金黄色葡萄球菌对青霉素最敏感。四联球菌 对四环素族最敏感。大肠杆菌对链霉素、多粘菌素敏感。因此，接种量要适宜，接种量多， 即使最敏感的菌株也不能抑制其发育，影响实验结果。 4．标准液和被检液：要用同一方法和在同一条件下配制，避免因操作方法不一致而造 成误差。 5．培养时间：细菌在发育过程中，对数期繁殖最快，以后处于稳定和衰落期，必须掌 握这一规律和特性，以便达到预期试验目的。时间过短则细菌不繁殖，过长则敏感性降低， 抑菌圈不清楚。一般以 37℃16～18 小时为适宜。 6．PH 值：对实验结果有显著的影响，新霉素、链霉素在碱性环境中活性最大，而在酸 性时抑菌圈缩小。四环素族以酸性为佳。青霉素、氯霉素以中性为宜。 六、病毒分离培养技术 病毒分离培养是确诊病毒性传染病的最可靠方法之一，其分离培养技术包括鸡胚接种、 动物接种和细胞接种分离培养。其中最简便、适用因而也最常用的是用鸡胚分离培养病毒。 1．接种材料的制备 分离、培养病毒用的材料除了应新鲜、无菌外，还要做一些特殊处理。首先应将所选取 的病料在无菌容器中剪碎、研磨，并根据所培养病毒特性用肉汤、生物盐水或特定稀释液将