家畜传染病学、禽病学 实验指导 王川庆 刘红英 陈陆 河南农业大学牧医工程学院 二零零四年二月一日
家畜传染病学、禽病学 实验指导 王川庆 刘红英 陈陆 河南农业大学牧医工程学院 二零零四年二月一日
1 目录 第一部分 基本技术 一、消毒 二、免疫接种 三、剖检技术及病变检查要点 四、细菌分离、培养技术 五、药敏试验 六、病毒分离培养技术 七、鸡胚接种技术 八、动物试验技术 九、病原体的鉴定方法 第二部分 传染病实验室诊断技术 一、鸡新城疫的诊断及免疫监测技术 二、减蛋综合征的诊断及抗体检测 三、马立克氏病琼扩试验 四、鸡传染性法氏囊病琼扩试验 五、鸡传染性喉气管炎的诊断 六、传染性支气管炎的诊断及防制 七、包涵体肝炎的实验室诊断 八、禽脑脊髓炎的实验室诊断 九、鸡传染性贫血的实验室诊断 十、禽霍乱的诊断 十一、鸡白痢的检疫 十二、鸡枝原体的检疫 十三、大肠杆菌病的实验室诊断 十四、禽流感的实验室诊断 十五、炭疽的诊断和防治 十六、布病的实验室诊断 十七、结核的实验室诊断 十八、巴氏杆菌的实验室诊断 十九、口蹄疫的实验室诊断 二十、兔瘟的诊断 二十一、乳胶凝集试验检测猪细小病毒 二十二、犬细小病毒的实验室诊断 二十三、间接血凝抑制试验测定猪瘟抗体 二十四、乳胶凝集试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体 二十五、乳胶凝集试验检测猪伪狂犬病毒抗体 二十六、乳胶凝集试验测猪萎缩性鼻炎病毒抗体 二十七、猪圆环病毒的血清学诊断 第三部分 疫苗制造技术
1 目录 第一部分 基本技术 一、消毒 二、免疫接种 三、剖检技术及病变检查要点 四、细菌分离、培养技术 五、药敏试验 六、病毒分离培养技术 七、鸡胚接种技术 八、动物试验技术 九、病原体的鉴定方法 第二部分 传染病实验室诊断技术 一、鸡新城疫的诊断及免疫监测技术 二、减蛋综合征的诊断及抗体检测 三、马立克氏病琼扩试验 四、鸡传染性法氏囊病琼扩试验 五、鸡传染性喉气管炎的诊断 六、传染性支气管炎的诊断及防制 七、包涵体肝炎的实验室诊断 八、禽脑脊髓炎的实验室诊断 九、鸡传染性贫血的实验室诊断 十、禽霍乱的诊断 十一、鸡白痢的检疫 十二、鸡枝原体的检疫 十三、大肠杆菌病的实验室诊断 十四、禽流感的实验室诊断 十五、炭疽的诊断和防治 十六、布病的实验室诊断 十七、结核的实验室诊断 十八、巴氏杆菌的实验室诊断 十九、口蹄疫的实验室诊断 二十、兔瘟的诊断 二十一、乳胶凝集试验检测猪细小病毒 二十二、犬细小病毒的实验室诊断 二十三、间接血凝抑制试验测定猪瘟抗体 二十四、乳胶凝集试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体 二十五、乳胶凝集试验检测猪伪狂犬病毒抗体 二十六、乳胶凝集试验测猪萎缩性鼻炎病毒抗体 二十七、猪圆环病毒的血清学诊断 第三部分 疫苗制造技术
2 一、新城疫Ⅰ系弱毒疫苗的制造 二、鸡新城疫Ⅱ系弱毒疫苗的制造 三、鸡新城疫 LaSota 系弱毒疫苗的制造 四、鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗制造 五、氢氧化铝胶苗的制造 六、动物脏器组织灭活疫苗的制造 七、油乳剂灭活疫苗的制造 八、猪瘟兔化弱毒苗的制备 第四部分 抗体制备技术 一、传染性法氏囊病高免卵黄抗体的制备 二、抗新城疫高免血清的制备 三、猪瘟高免血清的制备及应用 四、抗体提纯技术
2 一、新城疫Ⅰ系弱毒疫苗的制造 二、鸡新城疫Ⅱ系弱毒疫苗的制造 三、鸡新城疫 LaSota 系弱毒疫苗的制造 四、鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗制造 五、氢氧化铝胶苗的制造 六、动物脏器组织灭活疫苗的制造 七、油乳剂灭活疫苗的制造 八、猪瘟兔化弱毒苗的制备 第四部分 抗体制备技术 一、传染性法氏囊病高免卵黄抗体的制备 二、抗新城疫高免血清的制备 三、猪瘟高免血清的制备及应用 四、抗体提纯技术
3 第一部分 基本技术 一、消毒 1．人员的消毒：所有进入禽场生产区的人员，必须在更衣室内更衣换鞋，然后方可进 入场区。要控制或谢绝参观人员进入禽舍内。在场区(生产区)入口应设有喷雾消毒装置和消 毒池。喷雾消毒药物可用 0.1%新洁尔灭或 3～5%来苏儿，使用新洁尔灭时应避免与肥皂或 碱类接触，以防减弱其杀菌能力，消毒池要经常更换消毒药液。凡进入场内的人员及车辆都 必须经过消毒。也可采用紫外线照射消毒。 2．禽舍消毒：禽舍在消毒前必须进行彻底清扫与冲刷，以增强消毒效果，一般按以下 步骤进行消毒： 向禽舍的空间喷洒雾状消毒剂，使禽舍内空中飘浮的尘埃沉落，常用药为 3～5%的来 苏儿溶液。 将舍内一切可移动的设备移出。进行洗刷和消毒。夏季应尽量利用阳光曝晒消毒；用 1～ 2%热氢氧化钠，20%草木灰，10～20%石灰乳洗刷墙壁和地面；金属笼或用具冲洗晾干后， 用 0.1%新洁尔灭溶液喷洒，或用火焰喷射消毒。 最后将禽舍密闭堵严，用甲醛熏蒸消毒。根据禽舍污染微生物种类和密闭程度，一般 每平方米空间用甲醛 20～40 毫升，高锰酸钾是甲醛的半量(即 2 毫升甲醛、1 克高锰酸钾、 1 毫升清水)放在大容量瓷器内进行熏蒸消毒。操作时先把盛有高锰酸钾的瓷器放在需要烟 熏消毒的地方，然后加入甲醛，决不可将高锰酸钾加到甲醛中去，这两种药物结合后生成大 量的热，所以在操作完后应立即离开现场，切忌使烟雾进入眼内。熏蒸时间最少 2～4 小时， 延长至 8 小时更好，消毒后，要打开窗户，排除剩余的甲醛蒸气，消毒后的禽舍应闭置 1～ 2 周后再使用。 3．用具的消毒：禽场的蛋箱、笼子、雏盒、工具等。应先洗刷干净，晾干或晒干，再 放到密闭的房间内用甲醛熏蒸 5～10 小时，进行严格消毒。 4．孵化消毒：种蛋的消毒方法很多，下面介绍几种：(1)福尔马林消毒法：将种蛋放入 孵化机内，关闭进、出气孔和鼓风机。每立方米用 30 毫升福尔马林，另加 15 克高锰酸钾， 经 20～30 分钟后，打开门和进出气孔，开动鼓风机。这种方法对病毒和霉形体的消毒效果 显著。(2)新洁尔灭消毒法：新洁尔灭溶液呈碱性，忌与肥皂、碘、高锰酸钾配用。消毒种 蛋时配成千分之一浓度的溶液。喷于种蛋表面。有较强的除污和消毒作用。(3)氯消毒法： 将种蛋浸入含 1.5%活性氯的漂白粉溶液中 3 分钟，取出晾干。(4)高锰酸钾消毒法：用千分 之 5 的高锰酸钾溶液泡种蛋 1 分钟，取出晾干。注意高锰酸钾溶液必须现配现用。(5)红霉 素消毒法：将孵化前的种蛋先加温至 37.8℃，然后置于 2～4℃红霉素溶液中。浸泡 15 分钟。 红霉素溶液的浓度是每1000毫升含400～1000毫克。(6)氢氧化钠消毒法：将种蛋浸泡在0.5% 的氢氧化钠溶液中 5 分钟。能有效地杀灭蛋壳表面的鼠伤寒沙门氏菌。(7)庆大霉素消毒： 用 100 毫升水含 0.5 克庆大霉素的溶液浸泡种蛋，能杀死种蛋中严重污染的沙门氏菌。孵化 室每天用 3%来苏儿喷洒消毒，蛋盘、出雏器用 3%来苏儿洗刷消毒后，再用清水冲洗干净。 5．环境消毒：禽场周围每季度喷洒消毒一次，运动场每年更换一次表土或清扫干净用 火焰彻底消毒。 6．粪便消毒：最常用生物热消毒法。即用堆粪法进行消毒。在距离场 100 米以外设一 粪场。堆粪的方法如下：在地面挖一浅沟，深红约 20 厘米、宽约 1.5～2 米，长度不限，随 粪便多少而定。先将非传染性的粪便或秸、秆等堆至 25 厘米厚，其上堆入欲消毒的粪便、 垫草等，高达 1～1.5 米，然后在粪堆外面再铺上 10 厘米厚的非传染性的粪便或麦草，并覆
3 第一部分 基本技术 一、消毒 1．人员的消毒：所有进入禽场生产区的人员，必须在更衣室内更衣换鞋，然后方可进 入场区。要控制或谢绝参观人员进入禽舍内。在场区(生产区)入口应设有喷雾消毒装置和消 毒池。喷雾消毒药物可用 0.1%新洁尔灭或 3～5%来苏儿，使用新洁尔灭时应避免与肥皂或 碱类接触，以防减弱其杀菌能力，消毒池要经常更换消毒药液。凡进入场内的人员及车辆都 必须经过消毒。也可采用紫外线照射消毒。 2．禽舍消毒：禽舍在消毒前必须进行彻底清扫与冲刷，以增强消毒效果，一般按以下 步骤进行消毒： 向禽舍的空间喷洒雾状消毒剂，使禽舍内空中飘浮的尘埃沉落，常用药为 3～5%的来 苏儿溶液。 将舍内一切可移动的设备移出。进行洗刷和消毒。夏季应尽量利用阳光曝晒消毒；用 1～ 2%热氢氧化钠，20%草木灰，10～20%石灰乳洗刷墙壁和地面；金属笼或用具冲洗晾干后， 用 0.1%新洁尔灭溶液喷洒，或用火焰喷射消毒。 最后将禽舍密闭堵严，用甲醛熏蒸消毒。根据禽舍污染微生物种类和密闭程度，一般 每平方米空间用甲醛 20～40 毫升，高锰酸钾是甲醛的半量(即 2 毫升甲醛、1 克高锰酸钾、 1 毫升清水)放在大容量瓷器内进行熏蒸消毒。操作时先把盛有高锰酸钾的瓷器放在需要烟 熏消毒的地方，然后加入甲醛，决不可将高锰酸钾加到甲醛中去，这两种药物结合后生成大 量的热，所以在操作完后应立即离开现场，切忌使烟雾进入眼内。熏蒸时间最少 2～4 小时， 延长至 8 小时更好，消毒后，要打开窗户，排除剩余的甲醛蒸气，消毒后的禽舍应闭置 1～ 2 周后再使用。 3．用具的消毒：禽场的蛋箱、笼子、雏盒、工具等。应先洗刷干净，晾干或晒干，再 放到密闭的房间内用甲醛熏蒸 5～10 小时，进行严格消毒。 4．孵化消毒：种蛋的消毒方法很多，下面介绍几种：(1)福尔马林消毒法：将种蛋放入 孵化机内，关闭进、出气孔和鼓风机。每立方米用 30 毫升福尔马林，另加 15 克高锰酸钾， 经 20～30 分钟后，打开门和进出气孔，开动鼓风机。这种方法对病毒和霉形体的消毒效果 显著。(2)新洁尔灭消毒法：新洁尔灭溶液呈碱性，忌与肥皂、碘、高锰酸钾配用。消毒种 蛋时配成千分之一浓度的溶液。喷于种蛋表面。有较强的除污和消毒作用。(3)氯消毒法： 将种蛋浸入含 1.5%活性氯的漂白粉溶液中 3 分钟，取出晾干。(4)高锰酸钾消毒法：用千分 之 5 的高锰酸钾溶液泡种蛋 1 分钟，取出晾干。注意高锰酸钾溶液必须现配现用。(5)红霉 素消毒法：将孵化前的种蛋先加温至 37.8℃，然后置于 2～4℃红霉素溶液中。浸泡 15 分钟。 红霉素溶液的浓度是每1000毫升含400～1000毫克。(6)氢氧化钠消毒法：将种蛋浸泡在0.5% 的氢氧化钠溶液中 5 分钟。能有效地杀灭蛋壳表面的鼠伤寒沙门氏菌。(7)庆大霉素消毒： 用 100 毫升水含 0.5 克庆大霉素的溶液浸泡种蛋，能杀死种蛋中严重污染的沙门氏菌。孵化 室每天用 3%来苏儿喷洒消毒，蛋盘、出雏器用 3%来苏儿洗刷消毒后，再用清水冲洗干净。 5．环境消毒：禽场周围每季度喷洒消毒一次，运动场每年更换一次表土或清扫干净用 火焰彻底消毒。 6．粪便消毒：最常用生物热消毒法。即用堆粪法进行消毒。在距离场 100 米以外设一 粪场。堆粪的方法如下：在地面挖一浅沟，深红约 20 厘米、宽约 1.5～2 米，长度不限，随 粪便多少而定。先将非传染性的粪便或秸、秆等堆至 25 厘米厚，其上堆入欲消毒的粪便、 垫草等，高达 1～1.5 米，然后在粪堆外面再铺上 10 厘米厚的非传染性的粪便或麦草，并覆
4 盖 10 厘米厚的沙子或土，如此堆入三个星期到三个月，即可用以肥田，若粪便太干可加入 适量水，当粪便较稀时应加杂草，使其不稀不干，以促其迅速发酵。 7．带动物消毒：常用药物有过氧乙酸、新洁尔灭、抗毒威等，可按说明使用。 消毒药种类很多，理想的消毒药物应具有下列特性：(1)价廉易得；(2)对人、畜安全；(3)易 溶于硬水；(4)对用具和纺织物不会损伤；(5)在空气中较稳定；(6)无恶臭味；(7)无残余毒性； (8)在肉或蛋中不会有积存；(9)对杀灭大多数病原微生物有效。 目前尚无一种消毒药能全部符合上述要求，因此选用消毒药时应根据具体情况而定， 常用化学消毒剂见表 1。 表 1 常用化学消毒剂 消毒剂 名称 使用浓度 使用对象 注意事项 苛性钠 (火碱) 1～3%热 溶液 禽舍、车船、用 具等 对病毒性传染病消毒效果很好。但对皮肤有腐蚀作 用禽舍消毒后数小时用清水冲洗后才能放入家禽。 生石灰 10～20% 乳剂 同上 必须新鲜配制。如用 1～2%碱水和 5～10%石灰乳 混合液消毒效果更好。 草木灰 10～20% 热溶液 同上 用 10 公斤水和 2 公斤草木灰煮沸 2 小时，过滤后 备用，用时再加 2～4 倍热水稀释。 漂白粉 0.5% ～ 20% 一 般 常用为 2～5% 饮水、污水、禽 舍、用具、车船、 土壤和排泄物 含氯量应在 25%以上，新鲜配制，用其澄清液，对 金属用具和衣物有腐蚀作用。禽舍消毒后应彻底通 风以防中毒。 来苏儿 (石炭酸) 2～5% 器械、用具和洗 手等 用于含大量蛋白质的分泌物或排泄物消毒时，效果 不够好。 臭药水 5～10% 禽舍、土壤和用 具等 即来苏儿粗制品，注意点同上 福尔马 林( 甲醛 溶液) 5～10% 孵化器、蛋壳、 蛋盘等 空气消毒时可用福尔马林熏蒸法，每立方米空间用 福尔马林 20 毫升，加 10 克高锰酸钾和 10 毫升水 在瓷器内，室内密闭消毒至少半小时后彻底通风 新洁尔 灭 0.1% 蛋壳消毒，洗手 且市售 5%新洁尔灭 20 毫升，加 25%亚硝酸钠 20 毫升，清水加至 1000 毫升即成。使用时不能接触 肥皂或洗衣粉。 过氧乙 酸 0.2 ～ 0.5% 禽舍、除金属制 品外，可用于各 种对象 对各种病原微生物杀灭效果都很好，价格低廉，无 公害，禽舍消毒时可喷雾，用具可浸泡 二、免疫接种 免疫接种是预防和控制传染病的一项极为重要的措施。免疫接种就是用人工的方法，把 有效疫苗或菌苗引入动物体内，从而激发机体产生特异性抵抗力，使易感动物转化为有抵抗 力的动物，以免传染病的发生和流行。免疫接种的目的，就是提高动物对传染病的抵抗力， 预防传染，保证动物健康。 (一)免疫程序的制订 免疫程序就是预防计划，它包括预防疾病的种类、疫苗的选择、免疫次数、免疫时间
4 盖 10 厘米厚的沙子或土，如此堆入三个星期到三个月，即可用以肥田，若粪便太干可加入 适量水，当粪便较稀时应加杂草，使其不稀不干，以促其迅速发酵。 7．带动物消毒：常用药物有过氧乙酸、新洁尔灭、抗毒威等，可按说明使用。 消毒药种类很多，理想的消毒药物应具有下列特性：(1)价廉易得；(2)对人、畜安全；(3)易 溶于硬水；(4)对用具和纺织物不会损伤；(5)在空气中较稳定；(6)无恶臭味；(7)无残余毒性； (8)在肉或蛋中不会有积存；(9)对杀灭大多数病原微生物有效。 目前尚无一种消毒药能全部符合上述要求，因此选用消毒药时应根据具体情况而定， 常用化学消毒剂见表 1。 表 1 常用化学消毒剂 消毒剂 名称 使用浓度 使用对象 注意事项 苛性钠 (火碱) 1～3%热 溶液 禽舍、车船、用 具等 对病毒性传染病消毒效果很好。但对皮肤有腐蚀作 用禽舍消毒后数小时用清水冲洗后才能放入家禽。 生石灰 10～20% 乳剂 同上 必须新鲜配制。如用 1～2%碱水和 5～10%石灰乳 混合液消毒效果更好。 草木灰 10～20% 热溶液 同上 用 10 公斤水和 2 公斤草木灰煮沸 2 小时，过滤后 备用，用时再加 2～4 倍热水稀释。 漂白粉 0.5% ～ 20% 一 般 常用为 2～5% 饮水、污水、禽 舍、用具、车船、 土壤和排泄物 含氯量应在 25%以上，新鲜配制，用其澄清液，对 金属用具和衣物有腐蚀作用。禽舍消毒后应彻底通 风以防中毒。 来苏儿 (石炭酸) 2～5% 器械、用具和洗 手等 用于含大量蛋白质的分泌物或排泄物消毒时，效果 不够好。 臭药水 5～10% 禽舍、土壤和用 具等 即来苏儿粗制品，注意点同上 福尔马 林( 甲醛 溶液) 5～10% 孵化器、蛋壳、 蛋盘等 空气消毒时可用福尔马林熏蒸法，每立方米空间用 福尔马林 20 毫升，加 10 克高锰酸钾和 10 毫升水 在瓷器内，室内密闭消毒至少半小时后彻底通风 新洁尔 灭 0.1% 蛋壳消毒，洗手 且市售 5%新洁尔灭 20 毫升，加 25%亚硝酸钠 20 毫升，清水加至 1000 毫升即成。使用时不能接触 肥皂或洗衣粉。 过氧乙 酸 0.2 ～ 0.5% 禽舍、除金属制 品外，可用于各 种对象 对各种病原微生物杀灭效果都很好，价格低廉，无 公害，禽舍消毒时可喷雾，用具可浸泡 二、免疫接种 免疫接种是预防和控制传染病的一项极为重要的措施。免疫接种就是用人工的方法，把 有效疫苗或菌苗引入动物体内，从而激发机体产生特异性抵抗力，使易感动物转化为有抵抗 力的动物，以免传染病的发生和流行。免疫接种的目的，就是提高动物对传染病的抵抗力， 预防传染，保证动物健康。 (一)免疫程序的制订 免疫程序就是预防计划，它包括预防疾病的种类、疫苗的选择、免疫次数、免疫时间