十、常用蛋白质分子量标准参照物 高分子量标准参照 中分子量标准参物 低分子量标准参照 蛋白质 蛋白质 蛋白质 肌球蛋白 212000磷酸化酶B 97400碳酸酐酶 31000 B一半乳糖苷酶116000牛血清清蛋白 大豆胰蛋白酶制剂|21500 磷酸化酶B 谷氨酸脱氢酶 55000马心肌球蛋白 16900 牛血清清蛋白 66200卵清蛋白 溶菌酶 14400 过氧化氢酶 57000醛缩酶 40000肌球蛋白(F1) 8100 醛缩酶 40000碳酸酐酶 31000肌球蛋白(F2) 6200 大豆胰蛋白酶抑制剂21500肌球蛋白(F3) 2500 L溶菌酶 14400 十一、层析法常用数据表及性质 (一)离子交换纤维素 目前常用的离子交换纤维素列于下表 蛋白吸附容量(毫克克)床体积(毫升克) DEAE- 长度 交换当量 形状 胰岛素牛血清清蛋白 纤维素 (微米)(毫克当量克) l60pH7.5 (pH8.5) (pH8.5) DE22改良纤维性*12-4001.0±01 750 DE23同上(除细粒)18-4001.0±01 750 DE32微粒性(干粉)24-631.0±0.1 DE52同上(溶胀)24631.0±01 CM-纤维素 溶菌酶7S-y球蛋白pH50pH75 (pH5.0) (pH5.0) CM-22 改良纤维性 12-4000.6±0.06 150 7.7 CM-23 同上(除细粒)18-400 0.6±0.06 CM32微粒性(干粉)24-631.0±0.1 CM-52 同上(溶胀 24~-63 *:英国 Whatman厂的型号,原来有旧型号如DE-1,为长纤维性,长度1000微米。还有DE-1l, 纤维性,50~250微米,对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克
十、常用蛋白质分子量标准参照物 高分子量标准参照 中分子量标准参物 低分子量标准参照 蛋白质 Mr 蛋白质 Mr 蛋白质 Mr 肌球蛋白 β－半乳糖苷酶 磷酸化酶 B 牛血清清蛋白 过氧化氢酶 醛缩酶 212 000 116 000 97 400 66 200 57 000 40 000 磷酸化酶 B 牛血清清蛋白 谷氨酸脱氢酶 卵清蛋白 醛缩酶 碳酸酐酶 大豆胰蛋白酶抑制剂 溶菌酶 97 400 66 200 55 000 42 700 40 000 31 000 21 500 14 400 碳酸酐酶 大豆胰蛋白酶制剂 马心肌球蛋白 溶菌酶 肌球蛋白（F1） 肌球蛋白（F2） 肌球蛋白（F3） 31 000 21 500 16 900 14 400 8 100 6 200 2 500 十一、层析法常用数据表及性质 （一） 离子交换纤维素 目前常用的离子交换纤维素列于下表 DEAE－ 纤维素 形状 长度 （微米） 交换当量 （毫克当量/克） 蛋白吸附容量 （毫克/克） 床体积（毫升/克） 胰岛素 （pH8.5） 牛血清清蛋白 （pH8.5） pH6.0 pH7.5 DE-22 DE-23 DE-32 DE-52 CM-纤维素 CM-22 CM-23 CM-32 CM-52 改良纤维性 * 同上（除细粒） 微粒性（干粉） 同上（溶胀） 改良纤维性 同上（除细粒） 微粒性（干粉） 同上（溶胀） 12~400 18~400 24~63 24~63 12~400 18~400 24~63 24~63 1.0±0.1 1.0±0.1 1.0±0.1 1.0±0.1 0.6±0.06 0.6±0.06 1.0±0.1 1.0±0.1 750 750 850 850 溶菌酶 (pH5.0) 600 600 1,260 1,260 450 450 660 660 7S －γ球蛋白 （pH5.0） 150 150 400 400 7.7 8.3 6.0 6.0 pH5.0 7.7 9.1 6.8 6.8 7.7 9.1 6.3 6.3 pH7.5 7.7 9.1 6.7 6.7 *：英国 Whatman 厂的型号，原来有旧型号如 DE-1，为长纤维性，长度 1000 微米。还有 DE-11， 纤维性，50～250 微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为 130 毫克/克
(二)丙烯酰胺凝胶的技术数据 膨胀所需最少时间 排阻的下限分级分离的范围膨胀后的床体积 型号 (室温,小时) (Mr) (Mr (mL/g干凝胶) Bio-geI-P-2 1600 200~2000 Bio-gel-P-4 500~4000 Bio-gel-P-10 10000 5000~17000 Bio-geI-P-30 30000 20000~50000 14 Bio-gel-P-60 60000 30000~70000 19.0 Bio-gel-P-100 100000 40000~100000 19.0 Bio-gel-P-150 50000~150000 4.0 Bio-gel-P-200200000 80000~300000 34.0 300000 00000~400000 40.0 注:上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒,在水和缓冲溶液中很容易膨胀,生产厂为 Bio-Rad Laboratories. Rich-mond. California S.a (三)琼脂糖凝胶的技术数据 琼脂糖是琼脂内非离子型的组分,它在0~4℃,pH4-9范围内是稳定的。) 名称、型号凝胶内琼脂糖百分排阻的下限(M)分级分离的范围(M) 生产厂商 含量(W/w) Sagavac 10 2.5×10 1×104~2.5×105 Seravac laboratories Sagavac6 2×10° 5×104~2×10° Sagavac4 15×10° 2×105~15×10° 50×10° Bio-GelA-0.5M10 0.5×10 <1×104~2.5×10° Bio-Rad Laboratories Bio-GelA-1.5M8 1.5×106 <1×104~1.5×10° California U.S.A Bio-GelA-15M4 15×105 4×104~15×10° Bio-GelA-50M2 50×106 1×105~50×106 Bio-GelA-150M 1 50×10° 1×10°~150×106
（二）聚丙烯酰胺凝胶的技术数据 型号 排阻的下限 （Mr） 分级分离的范围 （Mr） 膨胀后的床体积 （mL/g 干凝胶） 膨胀所需最少时间 （室温，小时） Bio-gel-P-2 Bio-gel-P-4 Bio-gel-P-6 Bio-gel-P-10 Bio-gel-P-30 Bio-gel-P-60 Bio-gel-P-100 Bio-gel-P-150 Bio-gel-P-200 Bio-gel-P-300 1 600 3 600 4 600 10 000 30 000 60 000 100 000 150 000 200 000 300 000 200~2 000 500~4 000 1 000~5 000 5 000~17 000 20 000~50 000 30 000~70 000 40 000~100 000 50 000~150 000 80 000~300 000 100 000~400 000 3.8 5.8 8.8 12.4 14.9 19.0 19.0 24.0 34.0 40.0 2~4 2~4 2~4 2~4 10~12 10~12 24 24 48 48 注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为 Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A. （三）琼脂糖凝胶的技术数据 （琼脂糖是琼脂内非离子型的组分，它在 0 ~ 4℃，pH 4~9 范围内是稳定的。） 名称、型号 凝胶内琼脂糖百分 含量（W/W） 排阻的下限（Mr） 分级分离的范围（Mr） 生产厂商 Sagavac 10 Sagavac 8 Sagavac6 Sagavac4 Sagavac2 10 8 6 4 2 2.5×105 7×105 2×106 15×106 150×106 1×104~2.5×105 2.5×104~7×105 5×104~2×106 2×105~15×106 5×105~15×107 Seravac Laboratories, Maidenhead, England Bio-GelA-0.5M Bio-GelA-1.5M Bio-GelA-5M Bio-GelA-15M Bio-GelA-50M Bio-GelA-150M 10 8 6 4 2 1 0.5×105 1.5×106 5×106 15×105 50×106 150×106 <1×104~2.5×106 <1×104~1.5×106 1×104~5×106 4×104~15×106 1×105~50×106 1×106~150×106 Bio-Rad Laboratories, California,U.S.A
(四)凝胶过滤层析介质的技术数据 凝胶过滤介质 颗粒 pH稳定耐压最快 分离范围 大小 特性应用 性工作(Mpa)流速 Superdex 30 1000024肽类、寡糖、小蛋白等 3~12 100 3000~70000 重组蛋白、细胞色素 3~12 Superdex001000600004单抗、大蛋白 3~12 5000-5×10 0~40蛋白、肽类、多糖、核酸3-12 Superose 12 1000~300000 蛋白、肽类、寡糖、多糖3~2 100100005-75肽类、小蛋白 3~11 0~39 S-100 HR 50000042-75蛋白,如清蛋白 3~ 0~39 S-200 HR 100015×10625-75蛋白、抗体 3~11 S-300 HR 20008×0625~75多糖、具延伸结构的大分3-1102 S-400 HR 子如蛋白多糖、脂质体 Sepharose61000410平均90巨大分子 2~12 0.1 300 Fast Flow Sepharose 4 6002020290巨大分子如重组乙型肝 2~12 0.1 Fast Flow 炎表面抗原 Sepharose 2B|0004×1060-200蛋白、大分子复合物、病490004 每、不对称分子如核酸和 多糖(蛋白多糖) 600020×10545-165蛋白、多糖 90.008 11.5 Sepharose 6B 10000-4x10 45-165蛋白、多糖 70040060蛋白、大分子复合物、病49005 CL-2B 毒、不对称分子如核酸和 多糖(蛋白多糖) Sepharose 6000020×10545-165蛋白、多糖 0.012 CL-4B 10004×10645-165蛋白、多糖 CL-6B
（四）凝胶过滤层析介质的技术数据 凝胶过滤介质 名称 分离范围 颗粒 大小 （μm） 特性/应用 pH 稳定 性工作 耐 压 （Mpa） 最 快 流 速 （cm/h） Superdex 30 Superdex 75 Superdex200 Superose 6 Superose 12 Sephacryl S-100 HR Sephacryl S-200 HR Sephacryl S-300 HR Sephacryl S-400 HR Sepharose 6 Fast Flow Sepharose 4 Fast Flow Sepharose 2B Sepharose 4B Sepharose 6B Sepharose CL-2B Sepharose CL-4B Sepharose CL-6B <10000 3000~70000 3 000 10000~600000 5000~5×106 1000~300000 1000~ 100000 5000~250000 10000~1.5×106 20000~8×106 10000~4×106 60000~20×106 70000~40×106 60000~20×106 10000~4×106 70000~40×106 60000~20×105 10000~4×106 24~44 24~44 24~44 20~40 20~40 25~75 25~75 25~75 25~75 平均 90 平均 90 60~200 45~165 45~165 60~200 45~165 45~165 肽类、寡糖、小蛋白等 重组蛋白、细胞色素 单抗、大蛋白 蛋白、肽类、多糖、核酸 蛋白、肽类、寡糖、多糖 肽类、小蛋白 蛋白，如清蛋白 蛋白、抗体 多糖、具延伸结构的大分 子如蛋白多糖、脂质体 巨大分子 巨大分子如重组乙型肝 炎表面抗原 蛋白、大分子复合物、病 毒、不对称分子如核酸和 多糖（蛋白多糖） 蛋白、多糖 蛋白、多糖 蛋白、大分子复合物、病 毒、不对称分子如核酸和 多糖（蛋白多糖） 蛋白、多糖 蛋白、多糖 3~12 3~12 3~12 3~12 3~12 3~11 3~11 3~11 3~11 2~12 2~12 4~9 4~9 4~9 3~13 3~13 0.3 0.3 0.3 0.4 0.7 0.2 0.2 0.2 0.2 0.1 0.1 0.004 0.008 0.02 0.005 0.012 0.02 100 100 100 30 30 20~39 20~39 20~39 20~39 300 250 10 11.5 14 15 26 30
颗粒 干凝胶 溶胀最少最快 凝胶过滤介质 分离 大小 特性/应用 稳定性溶胀体积平衡时间(h)流速 (um) 工作(mg) 室温沸水|(cmh) SephadexG-10<700 干粉40~120 SephadexG-15<1500 干粉40-120 2-1325-35 Sephad2510008100脱盐及交换缓冲液2134-6 Coarse Sephadex25100500千粉50-150脱盐及交换缓冲液 Sephadex25100000千粉20-80脱盐及交换缓冲液2-134-6 Fine 用 Sephadex25000千粉10-40脱盐及交换缓冲液2-1346 Sephadex501500-3000千粉100-300小分子蛋白质分离 2~10 Coarse Sephadex50150000千粉50-150|小分子蛋白质分离 2~10 SephadexG-50 1500-3000 干粉20-80 小分子蛋白质分离 2-109~11 Sephadex-01500-3000千粉10-40小分子蛋白质分离 2-109-11 Sephadex-75300000千粉40-120中等蛋自质分离 2~1012~15 233 Sephadex75|300700千粉10-40中等蛋白质分离2-10 Sephadex-10040015105千粉40-120中等蛋白质分离 2~10 15~20 SephadexG-1004000-1x10 干粉10~40中等蛋白质分离2-1015-2048511 Sephadex1505003105千粉40-120稍大蛋白质分离 21020-3072 Sephadex150500415×105千粉10-40稍大蛋白质分离 2~10 5.6 Sephadex2005006×105千粉40-120较大蛋白质分离 0~40 Sephad200100050千粉10-40较大蛋白质分离 2-1020-25 2.8 SephadexLH20100- 干粉 特别为使用有机溶剂而设计。适合分离脂类、胆固醇、脂肪酸、激素、 嗜脂性 4000 维生素及其他小生物分子。此分离范围指以酒精为溶剂的分离
凝胶过滤介质 名称 分离 范围 颗粒 大小 （μm） 特性/应用 pH 稳定性 工作 干凝胶 溶胀体积 （mL/g） 溶胀最少 平衡时间（h） 最快 流速 (cm/h) 室温 沸水 SephadexG-10 SephadexG-15 SephadexG-25 Coarse SephadexG-25 Medium SephadexG-25 Fine SephadexG-25 Superfine SephadexG-50 Coarse SephadexG-50 Medium SephadexG-50 Fine SephadexG-50 Superfine SephadexG-75 SephadexG-75 Superfine SephadexG-100 SephadexG-100 Superfine SephadexG-150 SephadexG-150 Superfine SephadexG-200 SephadexG-200 Superfine <700 <1500 1000~5000 1000~5 000 1000~5000 1000~5000 1500~30000 1500~30000 1500~30000 1500~30000 3000~80000 3000~70000 4000~1.5×105 4000~1×105 5000~3×105 5000~1.5×105 5000~6×105 5000~2.5×105 干粉 40~120 干粉 40~120 干粉 100~300 干粉 50~150 干粉 20~80 干粉 10~40 干粉 100~300 干粉 50~150 干粉 20~80 干粉 10~40 干粉 40~120 干粉 10~40 干粉 40~120 干粉 10~40 干粉 40~120 干粉 10~40 干粉 40~120 干粉 10~40 脱盐及 交换 缓冲液 用 脱盐及 交换 缓冲液 用 脱盐及 交换 缓冲液 用 脱盐及 交换 缓冲液 用 小分子蛋白质分离 小分子蛋白质分离 小分子蛋白质分离 小分子蛋白质分离 中等蛋白质分离 中等蛋白质分离 中等蛋白质分离 中等蛋白质分离 稍大蛋白质分离 稍大蛋白质分离 较大蛋白质分离 较大蛋白质分离 2~13 2~13 2~13 2~13 2~13 2~13 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~10 2~3 2.5~3.5 4~6 4~6 4~6 4~6 9~11 9~11 9~11 9~11 12~15 12~15 15~20 15~20 20~30 18~22 30~40 20~25 3 3 6 6 6 6 6 6 6 6 24 24 48 48 72 72 72 72 1 1 2 2 2 2 2 2 2 2 3 3 5 5 5 5 5 5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 2~5 72 16 47 11 21 5.6 11 2.8 SephadexLH20 ( 嗜脂性 ) 100~ 4 000 干粉 25~106 特别为使用有机溶剂而设计。适合分离脂类、胆固醇、脂肪酸、激素、 维生素及其他小生物分子。此分离范围指以酒精为溶剂的分离
(五)高子交换层析介质的技术数据 离子交换介质名称最高载量颗粒大小 特性/应用 pH稳定性耐压 最快 (um) 作 (MPa) 流速 (cm/h) 蛋白 SOURCE 15 S 2~12 Q Sepharose SP Sepharose 3~12 核糖核酸酶 arose 120mg 45~165 2~12 SP Sepharose 75mg 45~165 DEAE Sepharose 110mg 45~165 2~9 0.2 300 CM Sepharose 100~300 6~13 核糖核酸酶 Q Sepharo 100~300 2~12 Big beads SP Sepharose 干粉 40~120
（五）离子交换层析介质的技术数据 离子交换介质名称 最高载量 颗粒大小 （μm） 特性/应用 pH 稳定性 工作 耐压 （MPa） 最快 流速 (cm/h) SOURCE 15 Q 25mg 蛋白 15 2～12 4 1800 SOURCE 15 S 25mg 蛋白 15 2～12 4 1800 Q Sepharose H.P. 70mg BSA 24～44 2～12 0.3 150 SP Sepharose H.P. 55mg 核糖核酸酶 24～44 3～12 0.3 150 Q Sepharose F.F. 120mg HSA 45～165 2～12 0.2 400 SP Sepharose F.F. 75mg BSA 45～165 4～13 0.2 400 DEAE Sepharose F.F. 110mg HSA 45～165 2～9 0.2 300 CM Sepharose F.F. 50mg 核糖核酸酶 100～300 6～13 0.2 300 Q Sepharose Big Beads 100～300 2～12 0.3 1200 ～ 1800 SP Sepharose Big Beads 60mg BSA 干粉 40～120 4～12 0.3 1200 ～ 1800