X=0.0004x5xD1000 V 式中 X一试样中黄曲霉毒素B1的含量(gkg: V一加入苯-乙腈混合液的体积(mL): V一出现最低荧光时滴加样液的体积(mL): D—样液的总稀释倍数： m一加入苯-乙腈混合液溶解时相当试样的质量(g): 0.0004一黄曲霉毒素B1的最低检出量(g)。 结果表示到测定值的整数位。 六、注意事项及说明 1、实验后污染的玻璃仪器可用10gL次氯酸钠溶液浸泡半天或用50gL次氯酸钠溶液 浸泡片刻后，即可达到去毒效果.消毒用次氯酸钠溶液的配制如下：取100g漂白粉，加500mL 水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠(NaCO3.10HO)溶于500mL温水中，再将两液混 合，搅拌，澄清后过滤。此溶液含次氯酸钠浓度约为25gL。若用漂粉精制备，则碳酸钠的 量可以加倍，所得溶液的浓度约为50gL. 2、黄曲霉毒素B标准液的保存方法：将标准液保存于具塞试管中，将塞密闭并封严 避光，贮于4℃冰箱。用后在标准液的液面处作记号，用前检查标准液在贮存期的体积有否 改变，若有明显的减少，则应准确补充溶剂到记号处后再用。必要时重做其浓度及纯度测定。 3、如用单向展开法展开后，薄层色谱由于杂质干扰掩盖了黄曲霉毒素B,的荧光强度 需采用双向展开法。薄层板先用无水乙醚作横向展开，将干扰的杂质展至样液点的一边而黄 曲霉毒素B1不动，然后再用丙酮-三氯甲烷(8+92)作纵向展开，试样在黄曲霉毒素B1相 应处的杂质底色大量减少，因而提高了方法灵敏度。如用双向展开中滴加两点法展开仍有杂 质干扰时，则可改用滴加一点法。检测方法可参照GB/T500922一2003标准方法进行。 七、思考题
X = V m V D 1000 0.0004 2 1 × × × 式中 X——试样中黄曲霉毒素Ｂ1 的含量（µg/kg）； V1——加入苯–乙腈混合液的体积（mL）； V2——出现最低荧光时滴加样液的体积（mL）； Ｄ——样液的总稀释倍数； m——加入苯–乙腈混合液溶解时相当试样的质量(g)； ０.0004——黄曲霉毒素 B1 的最低检出量（µg）。 结果表示到测定值的整数位。 六、注意事项及说明 1、实验后污染的玻璃仪器可用 10g/L 次氯酸钠溶液浸泡半天或用 50g/L 次氯酸钠溶液 浸泡片刻后，即可达到去毒效果。消毒用次氯酸钠溶液的配制如下：取 100g 漂白粉，加 500mL 水，搅拌均匀。另将 80g 工业用碳酸钠（Na2CO3.10H2O）溶于 500mL 温水中，再将两液混 合，搅拌，澄清后过滤。此溶液含次氯酸钠浓度约为 25g/L。若用漂粉精制备，则碳酸钠的 量可以加倍，所得溶液的浓度约为 50g/L。 2、黄曲霉毒素 B1 标准液的保存方法：将标准液保存于具塞试管中，将塞密闭并封严， 避光，贮于 4℃冰箱。用后在标准液的液面处作记号，用前检查标准液在贮存期的体积有否 改变，若有明显的减少，则应准确补充溶剂到记号处后再用。必要时重做其浓度及纯度测定。 3、如用单向展开法展开后，薄层色谱由于杂质干扰掩盖了黄曲霉毒素 B1 的荧光强度， 需采用双向展开法。薄层板先用无水乙醚作横向展开，将干扰的杂质展至样液点的一边而黄 曲霉毒素 B1不动，然后再用丙酮–三氯甲烷（8+92）作纵向展开，试样在黄曲霉毒素 B1 相 应处的杂质底色大量减少，因而提高了方法灵敏度。如用双向展开中滴加两点法展开仍有杂 质干扰时，则可改用滴加一点法。检测方法可参照 GB/T5009·22—2003 标准方法进行。 七、思考题
1、薄层层析点样操作时，为何要控制点样的直径大小？ 2、单向展开法测定中“稀释定量”操作步骤的目的是什么？ 3、要使测定结果比较准确，操作中应注意哪些问题？ 实验二肉制品中苯并(a)花的测定方法 方法一荧光分光测定法 一、目的要求 学习分析检测苯并(a)花的原理和方法。 二、实验原理 苯并(a)花是多环芳烃类化合物中一种主要的食品污染物。 粮食谷物在烟道中直接烘干或熏制鱼、肉等制品，特别是熏烤时食品直接和炭火接触 即可受到苯并(a)花的污染或产生苯并(a)花。 检测时试样先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液-液分配或色谱柱净 化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘，因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝色荧光斑点， 将分离后有苯并()花的滤纸部分剪下，用溶剂浸出解吸后，用荧光分光光度计测定荧光 强度与标准比较定量。 三、试剂与仪器 (一)试剂 1、苯：重蒸馏。 2、环已烷（或石油酷，沸程30℃一60℃）重蒸馏或经氧化铝柱处理至无荧光。 3、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。 4、无水乙醇：重蒸馏 5、无水硫酸钠。 6、展开剂：95%乙醇-二氯甲烷(2：1)
1、薄层层析点样操作时，为何要控制点样的直径大小？ 2、单向展开法测定中“稀释定量”操作步骤的目的是什么？ 3、要使测定结果比较准确，操作中应注意哪些问题？ 实验二 肉制品中苯并（a）芘的测定方法 方法一 荧光分光测定法 一、目的要求 学习分析检测苯并（a）芘的原理和方法。 二、实验原理 苯并（a）芘是多环芳烃类化合物中一种主要的食品污染物。 粮食谷物在烟道中直接烘干或熏制鱼、肉等制品，特别是熏烤时食品直接和炭火接触， 即可受到苯并（a）芘的污染或产生苯并（a）芘。 检测时试样先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液–液分配或色谱柱净 化，然后在乙酰化滤纸上分离苯并（a）芘，因苯并（a）芘在紫外光照射下呈蓝色荧光斑点， 将分离后有苯并（a）芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出解吸后，用荧光分光光度计测定荧光 强度与标准比较定量。 三、试剂与仪器 （一）试剂 １、苯：重蒸馏。 ２、环已烷（或石油醚，沸程 30℃～60℃）重蒸馏或经氧化铝柱处理至无荧光。 ３、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。 ４、无水乙醇：重蒸馏。 ５、无水硫酸钠。 ６、展开剂：95％乙醇–二氯甲烷（２：1）
7、硅镁吸附剂：将60目~100目筛孔的硅镁吸附剂经水洗四次（每次用水量为吸 附剂质量的4倍)于垂融漏斗上抽滤干后，再以等量的甲醇洗（甲醇与吸附剂量克数相等）： 抽滤干后，吸附剂铺于干净瓷盘上，在130℃干燥5h后，装瓶贮存于干燥器内，临用前加 5%水减活，混匀并平衡4h以上，最好放置过夜。 8、层析用氧化铝（中性）：120℃活化4h. 9、乙酰化滤纸：将中速层析用滤纸裁成30cm×4cm的条状，逐条放入盛有乙酰 化混合液(180mL苯、130mL乙酸酐、01mL硫酸)的500mL烧杯中，使滤纸充分地接 触溶液，保持溶液温度在21℃以上，时时搅排，反应6，再放置过夜。取出滤纸条，在通 风橱内吹干，再放入无水乙醇中浸泡4h,取出后放在垫有滤纸的干净白瓷盘上，在室温内 风干压平各用，一次可处理滤纸15-18条。 10、苯并(a)花标准溶液：精密称取10.0mg苯并(a)花，用苯溶解后移入100mL 棕色容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于苯并()花100g。放置冰箱中保存。 11、苯并(a)花标准使用液：吸取1.00mL苯并(a)花标准溶液置于10mL容最瓶 中，用苯稀释至刻度，同法依次用苯稀释，最后配成每毫升相当于1.0及0.1g苯当()花两 种标准使用液，放置冰箱中保存。 (二)仪器 1、脂肪抽提器 2、层析柱：内径10mm,长350mm,上端有内径25mm,长80mm~100mm内径漏 斗，下端具有活塞。 3、层析缸 4、K-D全玻璃浓缩器。 5、紫外光灯：带有波长为365nm,或254nm的滤光片。 6、回流皂化装置：锥形瓶磨口处接冷凝管。 7、荧光分光光度计
７、硅镁吸附剂：将 60 目～100 目筛孔的硅镁吸附剂经水洗四次（每次用水量为吸 附剂质量的４倍）于垂融漏斗上抽滤干后，再以等量的甲醇洗（甲醇与吸附剂量克数相等）； 抽滤干后，吸附剂铺于干净瓷盘上，在 130℃干燥５h 后，装瓶贮存于干燥器内，临用前加 ５％水减活，混匀并平衡 4h 以上，最好放置过夜。 ８、层析用氧化铝（中性）：120℃活化４h。 ９、乙酰化滤纸：将中速层析用滤纸裁成 30cm×４cm 的条状，逐条放入盛有乙酰 化混合液（180mＬ苯、130mL 乙酸酐、０.1mL 硫酸）的 500mL 烧杯中，使滤纸充分地接 触溶液，保持溶液温度在 21℃以上，时时搅拌，反应 6h，再放置过夜。取出滤纸条，在通 风橱内吹干，再放入无水乙醇中浸泡 4h，取出后放在垫有滤纸的干净白瓷盘上，在室温内 风干压平备用，一次可处理滤纸 15~18 条。 10、苯并（a）芘标准溶液：精密称取 10.0mg 苯并（a）芘，用苯溶解后移入 100mL 棕色容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于苯并（a）芘 100µg。放置冰箱中保存。 11、苯并（a）芘标准使用液：吸取 1.00mL 苯并（a）芘标准溶液置于 10mL 容量瓶 中，用苯稀释至刻度，同法依次用苯稀释，最后配成每毫升相当于 1.0 及 0.1µg 苯当(a)芘两 种标准使用液，放置冰箱中保存。 （二）仪器 1、脂肪抽提器。 2、层析柱：内径 10mm，长 350mm，上端有内径 25mm ，长 80mm~100mm 内径漏 斗，下端具有活塞。 3、层析缸。 4、K-D 全玻璃浓缩器。 5、紫外光灯：带有波长为 365nm，或 254nm 的滤光片。 6、回流皂化装置：锥形瓶磨口处接冷凝管。 7、荧光分光光度计