五、酶的活力测定和生产方法 一、酶活力测定及其表示方法 酶活力测定就是酶的定量测定（检查酶的含量不能用重量或体 积来表示) (一)酶活力(Enzyme activity) 指酶催化化学反应的能力，一般用一定条件下酶催化某一化 学反应的反应速度来表示。（酶活高低是以酶的活力单位数） ES ※引起酶促反应速 率随时间延长而降 低的原因？ 产物生成量 ※测定酶活力，应 测定酶促反应的初 速率？（即底物消 耗量<5%时测得的 时间 反应速度) 酶促反应的速率曲线
16 五、酶的活力测定和生产方法 一、酶活力测定及其表示方法 酶活力测定就是酶的定量测定（检查酶的含量不能用重量或体 积来表示） （一）酶活力(Enzyme activity) 指酶催化化学反应的能力，一般用一定条件下酶催化某一化 学反应的反应速度来表示。(酶活高低是以酶的活力单位数） 产 物 生 成 量 时间 酶促反应的速率曲线 ※引起酶促反应速 率随时间延长而降 低的原因？ ※测定酶活力，应 测定酶促反应的初 速率？（即底物消 耗量<5％时测得的 反应速度）
1.酶活力单位（即酶含量的多少） IU:酶在一定条件下（温度25pH等条件采用最适)，转化 1moL/min底物所需的酶量叫做1个酶活力单位。 Kat:在最适条件下，转化1mol/s底物所需的酶量叫做1个 酶活力单位。(1Kat=6×107U) 2.比活力与回收率（代表酶的纯度） 比活力=活力单位数/毫克蛋白 总活力=比活力×总体积(ml) 对同一种酶来说比活力愈高酶愈纯。 纯化倍数=每次比活力/第一次比活力 回收率（%)=（每次总活力/第一次总活力)×100%
17 1.酶活力单位(即酶含量的多少) IU：酶在一定条件下（温度250pH等条件采用最适），转化 1µmoL/min底物所需的酶量叫做1个酶活力单位。 Kat：在最适条件下，转化1mol / s 底物所需的酶量叫做1个 酶活力单位。（1 Kat＝6×107 IU） 2. 比活力与回收率(代表酶的纯度) 比活力＝活力单位数/ 毫克蛋白 总活力＝比活力× 总体积 (ml) 对同一种酶来说比活力愈高酶愈纯。 纯化倍数＝每次比活力 / 第一次比活力 回收率（％）＝（每次总活力/ 第一次总活力）×100％
(二) 酶活力的测定方法（多种多样） 化学测定法、光学测定法、气体测定法等 要求：快速、简便、准确 一般包括两个阶段： 首先在一定条件下，酶与底物反应一段时间； 然后再测定反应液中底物或产物的消耗量或生成量。（一般以产物的生成 量来表示)。 一般经如下几个步骤： >选择适宜的一定浓度的底物 确定酶促反应的条件 将一定量的酶液和底物溶液混合 >反应到一定时间（因要测定酶促反应初速度），取出反应液终止反应 测定产物的生成量。 二、酶的生产方法 酶的生产：指通过人工操作获得所需酶的技术过程。 酶的生产方法：提取分离法、生物合成法和化学合成法
18 （二） 酶活力的测定方法（多种多样） 化学测定法、光学测定法、气体测定法等 要求：快速、简便、准确 一般包括两个阶段： 首先在一定条件下，酶与底物反应一段时间； 然后再测定反应液中底物或产物的消耗量或生成量。（一般以产物的生成 量来表示）。 一般经如下几个步骤： ➢ 选择适宜的一定浓度的底物 ➢ 确定酶促反应的条件 ➢ 将一定量的酶液和底物溶液混合 ➢ 反应到一定时间（因要测定酶促反应初速度），取出反应液终止反应 ➢ 测定产物的生成量。 二、酶的生产方法 酶的生产：指通过人工操作获得所需酶的技术过程。 酶的生产方法：提取分离法、生物合成法和化学合成法
提取分离法 步骤及注意事项 选材：低温保存或立即开始。 破碎：制成组织匀浆。 提取：在一定的条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分 溶解到溶剂中的过程。（提取液体积为原料体积的35倍）。 提取方法：水、盐、酸、碱、有机溶剂。 ”分离纯化：采用各种生化分离技术，如离心、过滤、萃取、沉淀、 层析、电泳、浓缩、结晶、干燥等，使酶与各种质分离，达到 所需的纯度。 方法的选择：根据酶分子物理化学性质；与杂质的差异；使用 目的；技术难易；成本；污染等 ~保存：冰冻干燥成酶粉，低温；将酶的浓溶液制成含25%甘油低 温。-20℃ 判断一个纯化酶的方法优劣主要依据：酶的比活力和总活力
19 提取分离法 步骤及注意事项 ❖选材：低温保存或立即开始。 ❖破碎：制成组织匀浆。 ❖提取 ：在一定的条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分 溶解到溶剂中的过程。(提取液体积为原料体积的3~5倍）。 提取方法：水、盐、酸、碱、有机溶剂。 ❖分离纯化：采用各种生化分离技术，如离心、过滤、萃取、沉淀、 层析、电泳、浓缩、结晶、干燥等，使酶与各种质分离，达到 所需的纯度。 方法的选择：根据酶分子物理化学性质；与杂质的差异；使用 目的；技术难易；成本；污染等 ❖保存：冰冻干燥成酶粉，低温；将酶的浓溶液制成含25%甘油低 温。－20℃ 判断一个纯化酶的方法优劣主要依据：酶的比活力和总活力
六、核酶及酶工程 2.2,7 1.核酶 颜之G0Dp A U1可能的二级结焖 核酸酶是唯一的非蛋白酶。 C-G A 它是一类特殊的RNA,能够催化 RNA分子中的磷酸酯键的水解及 G-C 4C0G-C 其逆反应 1982美国T.Cech和Altman于1989 年共获诺贝尔化学奖
20 六、核酶及酶工程 1.核酶 核酸酶是唯一的非蛋白酶。 它是一类特殊的RNA，能够催化 RNA分子中的磷酸酯键的水解及 其逆反应. 1982美国T.Cech和Altman于1989 年共获诺贝尔化学奖