合形成紫红色染料，既得亚硝酸盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。 二、仪器与试剂 1.仪器 (1)镉柱 ①海编状镉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于500mL硫酸镉溶液(200gL)中，经3h~ 4h,当其中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余锌棒，使镉沉底，倾去 上层清液，以水用倾泻法多次洗涤，然后移入组织捣碎机中，加500mL水，捣碎约2s 用水将金属细粒洗至标准筛上，取20目~40目之间的部分。 ②镉柱的装填：如图1。用水装满镉柱玻璃管，并装入2m高的玻璃棉做垫，将玻璃 棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状镉8m~ 10cm高，上面用lcm高的玻璃棉覆盖，上置一心液漏斗，末端要穿过橡皮塞与镉柱玻 璃管紧密连接。（如无上述镉柱玻璃管时，可以25L酸式滴定管代用）。当镉柱填装好 后，先用25mL盐酸(0.1molL)洗涤，再以水洗两次，每次25mL。镉柱不用时用水 封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使辐层夹有气泡。 ③镉柱每次使用完毕后，应先以25mL盐酸(0.1molL)洗涤，再以水洗两次，两次 25mL,最后用水覆盖辆柱。 ④镉柱还原效率的测定：吸取20mL硝酸钠标准使用液于50mL烧杯中，以下按样品 测定步骤中2.(2)自“加入5mL氨缓冲溶液-(4)”起依法进行操作。根据标准 曲线计算测得结果，与加入量一致，还原效率应大于98%为符合要求。 ⑤结果计算：还原效率按式下式进行计算。 式中： X 一还原效率： A一测得亚硝酸钠的质量，单位为微克（μg): 10 一测定用溶液相当亚硝酸钠的质量，单位为 微克（μg)。 1一贮液漏斗，内径35mm,外径37mm: 2一进液毛细管，内径04mm,外径6mm: 3—像皮塞： 4一辐柱玻璃管，内径12mm,外径16mm: 5、7 玻璃棉： 6 一海绵状锅： 8- -出液毛细管，内径2mm,外径8mm。 图4-4
合形成紫红色染料，既得亚硝酸盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。 二、仪器与试剂 1.仪器 （1）镉柱 ① 海绵状镉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于 500mL 硫酸镉溶液（200g/L）中，经 3h～ 4h，当其中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余锌棒，使镉沉底，倾去 上层清液，以水用倾泻法多次洗涤，然后移入组织捣碎机中，加 500mL 水，捣碎约 2s， 用水将金属细粒洗至标准筛上，取 20 目～40 目之间的部分。 ② 镉柱的装填：如图 1。用水装满镉柱玻璃管，并装入 2cm 高的玻璃棉做垫，将玻璃 棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状镉 8cm～ 10cm 高，上面用 1cm 高的玻璃棉覆盖，上置一贮液漏斗，末端要穿过橡皮塞与镉柱玻 璃管紧密连接。（如无上述镉柱玻璃管时，可以 25mL 酸式滴定管代用）。当镉柱填装好 后，先用 25mL 盐酸（0.1mol/L）洗涤，再以水洗两次，每次 25mL。镉柱不用时用水 封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。 ③ 镉柱每次使用完毕后，应先以 25mL 盐酸（0.1mol/L）洗涤，再以水洗两次，两次 25mL，最后用水覆盖镉柱。 ④ 镉柱还原效率的测定：吸取 20mL 硝酸钠标准使用液于 50mL 烧杯中，以下按样品 测定步骤中 2.（2）自“加入 5mL 氨缓冲溶液-（4）” 起依法进行操作。根据标准 曲线计算测得结果，与加入量一致，还原效率应大于 98%为符合要求。 ⑤ 结果计算：还原效率按式下式进行计算。 100% 10 = × A X 式中： X——还原效率； A—测得亚硝酸钠的质量，单位为微克（μg）； 10——测定用溶液相当亚硝酸钠的质量，单位为 微克（μg）。 1——贮液漏斗，内径 35mm，外径 37 mm； 2——进液毛细管，内径 0.4 mm，外径 6 mm； 3——像皮塞； 4——镉柱玻璃管，内径 12 mm，外径 16 mm； 5、7——玻璃棉； 6——海绵状镉； 8——出液毛细管，内径 2 mm，外径 8 mm。 图 4-4
2.试剂 (1)氨缓冲溶液(pH9.6~9.7):量取20ml盐酸注入50mL水中，混匀后加50ml 氨水，再加水稀释至1000mL,混匀。 (2)稀氨缓冲液：量取50mL氨缓冲溶液，加水稀释至500mL,混匀。 (3)盐酸溶液(0.1mol/L):吸取5mL盐酸，注入水中并稀释至600mL。 (4)硝酸钠标准溶液：准确称取0.1232g于110℃~120℃干燥恒重的硝酸钠，加 水溶解，移于500mL容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于200μg硝酸钠。 (5)硝酸钠标准使用液：临用时吸取硝酸钠标准溶液2.50mL,置于100mL容量 瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于5μg亚硝酸钠。 (6)亚硝酸钠标准溶液：同亚硝酸钠含量的检测中二、2.（⑤）亚硝酸钠标准溶液。 (7)亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氧化钾K4F©(CN6·3HO,用水溶解， 并稀释至1000nL. (8)乙酸锌溶液：称取220.0g乙酸锌[2n(CHC00h·2H,O],加30mL冰乙酸溶 于水，并稀释至1000mL。 (9)饱和硼砂溶液：同1.二、2.) (10)对氨基苯磺酸溶液(4gL):同1.二、2.(3) (11)盐酸萘乙二胺溶液(2gL):同1.二、2.(4) 三、分析步骤 1.试样处理 称取5.0g经绞碎混匀的试样，置于50mL烧杯中，加12.5mL骊砂饱和液，搅拌均匀， 以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min,取出后冷 却至室温，然后一面转动，一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5ml.乙酸锌溶液 以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置0.5h,除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤 液30mL,滤液备用 2.样品测定 (1)先以25mL稀氨缓冲液冲洗镉柱，流速控制在3mL5mL/min(以滴定管代替的可 控制在2 nL/min-~3 nL/min). (2)吸取20mL处理过的样液于50mL烧杯中，加5mL氨缓冲溶液，混合后注入贮液 漏斗，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当贮液漏斗中的样液流完后，再加5mL水 置换柱内留存的样液。 (3)将全部收集液如前再经镉柱还原一次，第二次流出液收集于100L容量瓶中，殊 以水流经镉柱洗涤三次，每次20mL,洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。 (4)亚硝酸钠总量的测定：吸取10mL~20mL还原后的样液于50mL带塞比色管中， 另吸取0.00、0.20、0.40、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0、 1、2、4、5、7.5、10、12.5μg亚硝酸钠)，分别置于50mL带塞比色管中，于标准管与试 样管中分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液(4g/L),混匀，静置3~5min后各入1mL盐酸萘
2. 试剂 （1）氨缓冲溶液（pH9.6～9.7）：量取 20mL 盐酸注入 50mL 水中，混匀后加 50mL 氨水，再加水稀释至 1000mL，混匀。 （2）稀氨缓冲液：量取 50mL 氨缓冲溶液，加水稀释至 500mL，混匀。 （3）盐酸溶液（0.1mol/L）：吸取 5mL 盐酸，注入水中并稀释至 600mL。 （4）硝酸钠标准溶液：准确称取 0.1232g 于 110℃～120℃干燥恒重的硝酸钠，加 水溶解，移于 500mL 容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 200μg 硝酸钠。 （5）硝酸钠标准使用液：临用时吸取硝酸钠标准溶液 2.50mL，置于 100mL 容量 瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 5μg 亚硝酸钠。 （6）亚硝酸钠标准溶液：同亚硝酸钠含量的检测中二、2.(5)亚硝酸钠标准溶液。 （7）亚铁氰化钾溶液：称取 106.0g 亚铁氧化钾[K4Fe (CN)6·3H2O]，用水溶解， 并稀释至 1000nL。 （8）乙酸锌溶液：称取 220.0g 乙酸锌[Zn (CH3COO)2·2H2O]，加 30mL 冰乙酸溶 于水，并稀释至 1000mL。 （9）饱和硼砂溶液：同Ⅰ.二、2.(1) （10）对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：同Ⅰ.二、2.(3) （11）盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：同Ⅰ.二、2.(4) 三、分析步骤 1. 试样处理 称取 5.0g 经绞碎混匀的试样，置于 50mL 烧杯中，加 12.5mL 硼砂饱和液，搅拌均匀， 以 70℃左右的水约 300mL 将试样洗入 500mL 容量瓶中，于沸水浴中加热 15min，取出后冷 却至室温，然后一面转动，一面加入 5mL 亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入 5mL 乙酸锌溶液， 以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置 0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤 液 30mL，滤液备用。 2. 样品测定 （1）先以 25mL 稀氨缓冲液冲洗镉柱，流速控制在 3mL/5mL/min（以滴定管代替的可 控制在 2mL/min～3mL/min）。 （2）吸取 20mL 处理过的样液于 50mL 烧杯中，加 5mL 氨缓冲溶液，混合后注入贮液 漏斗，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当贮液漏斗中的样液流完后，再加 5mL 水 置换柱内留存的样液。 （3）将全部收集液如前再经镉柱还原一次，第二次流出液收集于 100mL 容量瓶中，继 以水流经镉柱洗涤三次，每次 20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。 （4）亚硝酸钠总量的测定：吸取 10mL～20mL 还原后的样液于 50mL 带塞比色管中， 另吸取 0.00、0.20、0.40、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50mL 亚硝酸钠标准使用液（相当于 0、 1、2、4、5、7.5、10、12.5μg 亚硝酸钠），分别置于 50mL 带塞比色管中，于标准管与试 样管中分别加入 2mL 对氨基苯磺酸溶液（4g/L），混匀，静置 3～5min 后各入 1mL 盐酸萘