变性与复性 变性并非是不可逆的变化,当变性程度较轻时,去除 变性因素,有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的 构象及功能,变性的可逆变化称为复性( renaturation) 如核糖核酸酶中四对二硫键及其氢键,在β-巯基乙醇和 8M尿素作用下,发生变性,失去生物学活性,变性后 如经过透析去除尿素,β-巯基乙醇,并对空气缓慢氧化 使疏基氧化成二硫键,酶蛋白又可恢复其原来的构象, 酶学活性也几乎全部恢复,称为变性核糖核酸酶的复 性 许多蛋白质变性时被破坏严重,即使撤去变性因素紊也 不能恢复,称为不可逆性变性
变性与复性 • 变性并非是不可逆的变化，当变性程度较轻时，去除 变性因素，有的蛋白质仍能恢复或部分恢复其原来的 构象及功能，变性的可逆变化称为复性(renaturation)。 如核糖核酸酶中四对二硫键及其氢键，在β-巯基乙醇和 8 M尿素作用下，发生变性，失去生物学活性，变性后 如经过透析去除尿素，β-巯基乙醇，并对空气缓慢氧化 使疏基氧化成二硫键，酶蛋白又可恢复其原来的构象， 酶学活性也几乎全部恢复，称为变性核糖核酸酶的复 性。 • 许多蛋白质变性时被破坏严重，即使撤去变性因素也 不能恢复，称为不可逆性变性
RNase的变性与复性
RNase的变性与复性
盐行 (Salting Out) 在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏 蛋白质胶体的稳定性而使其析出,这种方法称 为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯 化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH 不同,故可用于对混和蛋白质组分的分离。例 如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白, 饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都 沉淀出来,盐析沉淀的蛋白质,经透析除盐 仍保证蛋白质的活性。调节蛋白质溶液的pH至 等电点后,再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更 好
盐 析 (Salting Out) 在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏 蛋白质胶体的稳定性而使其析出，这种方法称 为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯 化钠等。各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH 不同，故可用于对混和蛋白质组分的分离。例 如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白， 饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都 沉淀出来，盐析沉淀的蛋白质，经透析除盐， 仍保证蛋白质的活性。调节蛋白质溶液的pH至 等电点后，再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更 好
白质的溶和盐 盐溶 盐析 离子强度(硫酸铵浓度) 硫酸铵对马血红蛋白的溶解度的影响
蛋白质的盐溶和盐析 硫酸铵对马血红蛋白的溶解度的影响 离子强度（硫酸铵浓度） 盐溶 盐 析
蛋白质的沉淀( Precipitation) 蛋白质分子凝聚从溶液中析岀的现象蛋白质沉淀, 变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉 淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀。 蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素,即 颗粒表面的水化层和电荷。若无外加条件,不致互相凝 集。然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH至p和加 入脱水剂),蛋白质便容易凝集析出。但如将溶液p调 节到蛋白质p,蛋白质分子呈等电状态,虽然分子间同 性电荷相互排斥作用消失了。但是还有水化膜起保护作 用,一般不致于发生凝聚作用,如果这时再加入某种脱 水剂,除去蛋白质分子的水化膜,则蛋白质分子就会互 相凝聚而析出沉淀;反之,若先使蛋白质脱水,然后再 调节p到等电点,也同样可使蛋白质沉淀析出
蛋白质的沉淀 (Precipitation) • 蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象-蛋白质沉淀， 变性蛋白质一般易于沉淀，但也可不变性而使蛋白质沉 淀，在一定条件下，变性的蛋白质也可不发生沉淀。 • 蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素，即 颗粒表面的水化层和电荷。若无外加条件，不致互相凝 集。然而除掉这两个稳定因素(如调节溶液pH至pI和加 入脱水剂)，蛋白质便容易凝集析出。但如将溶液pH调 节到蛋白质pI，蛋白质分子呈等电状态，虽然分子间同 性电荷相互排斥作用消失了。但是还有水化膜起保护作 用，一般不致于发生凝聚作用，如果这时再加入某种脱 水剂，除去蛋白质分子的水化膜，则蛋白质分子就会互 相凝聚而析出沉淀；反之，若先使蛋白质脱水，然后再 调节pH到等电点，也同样可使蛋白质沉淀析出