第六章种子检验原理和技术 本章教学时数：8学时（第25-32讲） 第七节种子生活力测定 (第32讲) 种子生活力是指种子萌发的潜在能力。其测定通常采用化学染色 或物理方法，鉴定结果不如发芽试验的幼苗鉴定准确，但也可用以下 两种情况：一是己知供检样品尚处于休眠状态或试验终期发现尚有较 多休眠种子，二是在短期内急需了解种子发芽力时采用生活力测定进 行估计。目前在国际种子检验上较为通有的标准方法有四唑染色图形 技术，离体胚培养技术，不过其它方法，尤其软X射线造影技术，也 有一定实际应用价值，我们以四唑染色图形技术来加以说明： 四唑染色法是当前国内外较广泛应用的一种具快速、简便、准确 和稳定的方法，可广泛地应用于各种作物。 一、方法原理 种子活体细胞内有脱氢酶，可与氧化还原指示剂三苯基氯化四氮 唑或三苯基溴化四氮唑反应显色，这种无色物质从脱氢酶接受氢，在 活细胞或组织里产生稳定而不扩散的红色物质三苯基甲臜，染成红色 表示有生命的组织，而末染色的则代表无生命组织：此外还有部分染 色种子，说明不同部位存在有不同比例的坏死组织。在胚和胚乳或配 子体组织中，这种坏死面积的大小和部位，以及颜色深浅要据对形成 幼苗主要结构的影响来判断健康和死亡，综合鉴定种子是否有生活 力。 二、测定方法 1.试剂配制：应用四唑的0.1%-1.0%(m/w)溶液，1.0%溶液用于 不切开胚的种子染色，而0.1%-0.5%溶液用于已经切开胚的种子染色
配成的溶液须贮存在黑暗处或棕色瓶里。如用蒸馏水配制溶液，H 值不在6.5-7.5范围内，则采用磷酸缓冲液配制，方法如下： 溶液I:称取9.078g磷酸二氢钾(KHP0)溶于1000ml蒸馏水中： 溶液IⅡ：称取9.472g磷酸氢二钠(NaHP0,)或11.876g磷酸氢二 钠(NaHP0,·2L0)溶于1000ml蒸馏水中。 取溶液I2份和溶液Ⅱ3份混合即成缓冲液，在该缓冲液中溶解 准确数量的四唑盐类，以获准确的浓度。如每100ml缓冲液中溶入 1g四唑盐即1%浓度的溶液。 2.数取试样：；从经净度分析后并充分混合的净种子中随机数取 2份，名100粒或少于100粒的若干副重复。如测发芽末期休眠种子 生活力，则单用试验末期的休眠种子。 3.预措预湿： (1)月的使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备和促 进活组织酶系统的活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确 性。 (2)预措除去种子外部的附属物。其方法包括剥去果壳和在种 子非要害部位弄破种皮，但必须注意，不能损伤种子内部胚的主要构 造。 (3)预湿 ①快速水浸预湿适用于直接浸入水中不会造成组织破裂损伤，不 会影响鉴定正确性的种子。 ②缓慢纸床预湿适用于直接浸在水中容易破裂和损伤的种子，以 及衰弱的种子或过分干燥的种子。 ③202溶液浸种为加快种子吸胀和促进酶的活化以及缩短预 湿时间。 4.染色前准备： (1)月的 为使四唑溶液快速和充分渗入种子的全部活组织，加快染色反应 和正确鉴定胚的主要构造，必须按其胚和营养组织的位置和特性，采
用适当的方法使胚的主要构造和（或）活的营养组织暴露出来 (2)样品准备方法 每种种子要求选择最适合的方法来制备种子样品 5.染色： (1)月的通过染色反应，能将胚和活的营养组织里的健壮、衰 弱和死亡部分的差异正确地显现出来，以便进行确切的鉴别 (2)染色程序将经过样品准备或不需准备的规定数量的种子 分别放入四唑溶液里染色。 (3)染色的温度和时间染色时间因种子种类、样品准备方法、 本身生活力的强弱、四唑溶液浓度、p州值和温度等因素的不同而有 差异，其中特别是温度影响为最大。 (4)暂停染色因没有按时进行鉴定，可将正在进行染色的样品 移到低温或冰冻条件下，以中止或延缓染色反应进程。 (⑤)染色失调当染色溶液变为混浊，并出现泡沫或粉红色的沉 淀，可能原因： ①样品中含有死亡、衰弱、热伤、冻害或机械损伤的种子 ②样品的胚与营养组织在预湿前已在水中或四唑溶液里浸过。 ③染色溶液温度过高而引起种子组织（特别是衰弱组织）的严重 劣变，导致外溢物增加和微生物的活动， (6)真空技术的应用 可加速四唑还原成甲臜的速度：能加速 四唑溶液渗入胚组织 6.鉴定前处理： 再进一步使胚的主要构造和活的营养组织明显地暴露出来，以便 观察、鉴定 (1)不需处理，直接观察 (2)轻压出胚，观察鉴定 (3)扯开营养组织，暴露出胚 (4)切去一层营养组织，暴露出胚和活营养组织 (5)沿胚中轴纵切，暴露出胚的构造
(6)剥去半透明的种皮或种子组织，暴露出胚 (7)乳酸苯酚透明液的应用 7.观察鉴定： (1)目的 ①确切计算种子能产生正常幼苗的能力，即种子生活力百分率 ②按种子样品染色程度和组织特征，判断其强壮程度，将种子分 为强或弱2一3个等级，以便统计种子活力。 ③按局部解剖染色图形，观察染色部位，查明种子劣变和生活力 丧失的原因，为种子生理、种子加工、种子贮藏和种子处理提供指导 情报。 (2)一般鉴定原则 凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜红色，且组 织状态正常的，为有生活力种子。凡是胚的主要构造局部不染色或染 成异常的颜色和光泽，并且活营养组织不染色部分己超过二分之一， 或超过允许范围以及组织软化的，为不正常种子。 凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色，且组织已软腐 或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子 022902 公0g200
图6,3小麦种子四唑测定结果的鉴定标准 8.结果表示 计算各重复中有生活力种子数，重复间最大差距不得超过表 12.19规定，平均百分率计算到最近似的整数。 第八节其它测定 一、种子健康度测定方法 (一)末经培养的检验 1.直接检查：适用于较大的病原体或杂质外表有明显症状的病 害，如麦角、线虫瘿，螨类等。必要时，可应用双目显微镜对试样进 行检查，取出病原体或病粒，称重或计数。 2.吸胀种子检查，为使子实体、病症或害虫更易观察到或促进孢 子释放，把试验样品浸入水中或其他溶液中，吸胀后检查表面或内部， 最好用双目显微镜 3.洗涤检查： 用于检查附着在种子表面的病菌孢子或颖壳上的病原线虫。 分取样品两份，每份5g分别倒入100mL,三角瓶内，加无菌水 10mL如使病原体洗涤更彻底，可加入0.1%润滑剂（如磺化二羧酸酯）。 置振荡机上振荡，光滑种子振荡5min,粗糙种子振荡10min。将洗涤 液移入离心管内，在1000-1500×g离心3-5min。用吸管吸去上清 液，留1mL的沉淀部分，稍加振荡。用干净的细玻璃棒将悬浮液分别 滴于5片载玻片上。盖上盖玻片，用40-500倍的显微镜检查，每片 检查10个视野，并计算每视野平均孢子数，据此可计算病菌孢子负 荷量。 4.剖粒检查 取试样5-10g(小麦等中粒种子5g,玉米、豌豆大粒种子10g)用 刀剖开或切开种子的被害或可疑部分，检查害虫。 5.染色检查