实验8 Northern blot
目的 1.定量分析某一特定基因mRNA的转录与否，以及转 录的水平。 2.比较两个或两个以上不同组织某一已知基因转录的 差异。 3.比较两个或两个以上不同组织某一未知基因转录的 差异
由于此方法具有稳定、可靠、假阳性少等特点，多 年来一直深受广大研究者的喜爱。其结果可以同时反映 某一特定基因RNA分子量的大小及其数量。在中医药实 验中通常以此来判别某一中医药方法对某一已知基因转 录的调控作用。例如我们的GnRH、N-ras、白蛋白等研究。 通常观察某一分子的变化有两个层次，蛋白水平的 和核酸水平的。两者的含量变化均与其生成、代谢有关， 而两者的作用发挥还关系到其质量、修饰、环境条件等 因素，这些变化采用观察蛋白与核酸的量是不能回答的， 所以对Northern blot的结果要有客观的分析。 类似目的的实验主要为RTPCR
原理 采用变性凝胶电泳，使RNA分子由小到大排列于凝 胶之中。应用虹吸原理，将RNA转移至硝酸纤维素膜，烘 干，使RNA牢固地结合在硝酸纤维素膜上。与放射性标记 的探针杂交，杂交后，洗去未被杂交上的探针和游离的同 位素，将硝酸纤维素膜放射自显影，使胶片上出现对应于 相应分子量mRNA的条带。最后，对条带进行光密度扫描， 并统计分析
实验准备 (参考教材)