实验26 质粒转化大肠杆菌
目的 1.重组质粒的鉴定 当质粒的重组或其它载体重组后，通常会发生质粒的 重组失败，包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选，把 重组成功的质粒找出来。 在目前常用的质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗 性基因，一旦重组成功，或者不含插入片段的质粒自身环 化，抗生素抗性基因表达，被转化的大肠杆菌便具备抵抗 相应抗生素的能力，可以在含该抗生素的培养基上生长传 代。不然，假如重组失败，大肠杆菌便不能抵抗该抗生素 而死亡
2.为扩增质粒和其它载体作准备 由于大肠杆菌繁殖快，在适宜的条件下繁殖一代仅需 要20-30分钟，而且常用质粒可以在大肠杆菌中增殖达到 几百个拷贝。因此，通过对转化成功的大肠杆菌培养，可 以在短时内极大地扩增目的质粒。 *作为分子生物学用大肠杆菌，是经过实验室改造过 的工程菌
原理 本实验通过CaCl2对特定的大肠杆菌处理，制备感受 态的细菌。这些细菌可使每微克超螺旋质粒DNA,如一些 插入目的DNA片段的重组质粒，产生5×10-2X10'个转 化的菌落。 当质粒与这些大肠杆菌混合后，质粒粘附在大肠杆 菌的表面，在42C的温度时，大肠杆菌出现热休克，质 粒可通过大肠杆菌细胞膜上形成的空隙进入菌体内。随 后，加入LB培养液，于37℃振动培养可使细菌复苏，并 且表达质粒编码的抗生素抗性基因，提高转化效率。转化 成功的大肠杆菌可以在相应抗生素培养皿中传代，形成菌 落
实验淮备 (参考教材)