实验9 RTPCR
目的 观察某一特定基因转录量的变化。反转录酶聚合酶链 式反应(RTPCR)以其灵敏度高，要求样品量少，实验周期 短而倍受青睐。有人将RTPCR实验结果与Northern blot 结果等进行比较分析，发现两种不同方法所得到的实验结 果相一致。 类似的有Northern blot、原位杂交，甚至原位PCR 等
原理 首先，以目的基因mRNA为模板，利用反转录酶的活 性，合成对应的cDNA。然后在模板cDNA、目的基因特异 引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依靠Tag DNA 聚合酶的酶促反应，通过变性、退火、延伸的反复循环中， 扩增出大量特异的目的DNA产物。最后，扩增产物通过琼 脂糖凝胶电泳分离，显色，并进行图象分析
实验准备
实验步骤 1.分光光度计检测RNA的浓度与纯度 各样品总RNA取5ul加入1ml水中测0D值，当 0D26/0D20≥1.8时，方可使用。根据以下公式计算RNA的浓 度： 样品总RNA含量(ug/ul)=0D20×稀释倍数X40/1000