实验29 酶切重组质粒 电泳分离所插入的DNA
目的 1.鉴定。鉴定所培养的单菌落中是否含有重组质粒， 或仅含有自身环化的质粒。当酶切产物电泳后，重组成功 者电泳后会出现大小不等的两条DNA条带，一条为线性质 粒载体的DNA,分子量大，在后面，另一条为插入的目的基 因，分子量小，在前面；而自身环化者仅有一条载体的DNA 条带。 2.收获。通过电泳分离，使载体与插入目的基因分 开，便于分别回收载体和已大量扩增了的插入目的基因。 比如探针用片段
本实验由2个部分组成 1)酶切重组质粒； 2)DNA的琼脂糖凝胶电泳。 关于限制性内切酶 本实验选用的限制性内切酶是分子生物学中最为常 用的工具酶。通常不同的限制性内切酶分别能识别一小 段双链DNA序列，长度多在4-6个核苷酸，且呈双重对 称的DNA序列，并将其切断。有粘端和钝端两种形式：
EcoR I ↓ 5'..GAATTC...3'→ 5..G AATTC...3' 3...CTTAAG...5' 3'...CTTAA G..5 Pst I ↓ 5'..CTGCAG..3'→ 5'...CTGCA G...3 3'...GACGTC...5' 3..G ACGTC...5' Sma I ↓ 5..CCCGGG...3→ 5...CCC GGG...3' 3'...GGGCCC...5' 3'...GGG CCC...5
利用这种特性，可以选择适当的酶来切割所需的DNA 片段，或选择适当的酶切开载体，造成载体的粘端序列与 插入DNA的粘端序列相同，以便于重组质粒。具体酶的特 性、识别位点等可以参考不同公司的试剂目录。 invitrogen BioDirec CLONTECE 8哭