3.说明与讨论 (1)本方法可同时测定乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因、天门冬酰苯丙氨酸甲酯，检出限为0.004mgmL。 (2)样品须温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气。通过微孔滤膜过滤 (三)山梨糖醇的检测 山梨糖醇的甜度与蔗糖相近。易溶于水，稳定性高，不易与氨基酸、蛋白质等发生褐变反应。我国和 AO/WHO对ADI值均未作特殊规定。我国允许在冷饮类、糕点、浓果汁、饼干、面包、酱菜类和糖果中 按正常生产需要使用。 用水或乙醇溶液从样品中提取山梨糖醇，用减压浓缩方法将水分全部除去后，制各乙酰化山梨糖醇， 用乙醚萃取乙酰化山梨糖醇，浓缩至干，用丙邵定容后进行气相色谱分析。以保留时间定性、峰高或峰面 积定量。 2.乙酰化山梨糖醇衔生物的制备 准确吸取样品溶液和山梨糖醇标准溶液各10mL,放入50mL浓缩器中，准确加入5mL4n gmL木糖 醇作为内标液 在60℃水浴上减压浓缩，除去水分，然后加入14mL无水吡啶和7mL无水乙醇，在60 70℃水浴上激烈振摇，使残渣溶解，放置过夜。加水20mL后，用10mL水定量转移到分液漏斗中，用50mL、 30mL、30mL乙醚分3次萃取，合并全部乙醚层，用20mL0.1 mol/LH,S0,洗2次，再用20mL水洗1次， 乙醚层加入无水硫酸钠，放置1h。将此液过滤，残渣用S0mL乙酰分数次洗涤，将滤液和洗液合并于圆底 烧瓶中，减压浓缩除去乙醚，向残渣中加丙酮使其溶解，准确加至10mL。 3.色谱条件 检测器：氢焰电离检测器： 色谱柱：玻璃柱，内径为3mm,长度为2m:内装涂以XE-60(3%)的60~80目硅烷化处理过的硅 藻土担体： 温度：柱温从150℃到220℃以6℃min速度升温：检测器为250℃ 载气：氨气，40 mL/min 第三节几种常用的防腐剂的检测 防腐剂是能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的的一类物质总称。防腐 剂使用简单。可使食品在常温下及简易保藏条件下短期贮藏，在现阶段尚有一定作用，随若食品保藏新工 艺、新设备的不断完善，防腐剂将逐步减少使用，甚至不用。目前，我国许可使用的品种有： 苯甲酸、苯 甲酸钠、山梨酸 ,丙酸钠、丙酸钙 对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、脱氢醋酸等 一、苯甲酸钠和山梨酸钾的检测 苯甲酸又名安息香酸。为白色有丝光的鳞片或针状结晶，熔点122℃，沸点249.2℃。100℃开始升 华。在酸性条件下可随水蒸汽蒸馏。微溶于水。易溶于氯仿、丙酮、乙醇、乙醚等有机溶剂。化学性质较 稳定。苯甲酸钠为白色题粒或结品性粉末，无息或微有安息香味，在空气中稳定，易溶于水和乙醇，难 溶于有机溶剂 其水溶液呈弱碱性 (pH值约为8)，在酸性条件下(p2.54)能转化为苯甲 在酸性条件下苯甲酸及苯甲酸钠防腐效果较好， 适宜用于偏酸的食品(pH4.55)。苯甲酸进入人体 后，大部分与甘氨酸结合形成无害的马尿酸。其余部分与葡萄糖醛酸结合生成苯甲酸葡萄糖醛酸甙从尿中 排出，不在人体内积累。苯甲酸的毒性较小，1996年FAO/WHO限定苯甲酸及盐的ADI值以苯甲酸计为 0-5mgkg体重。我国《食品添加剂使用卫生标准》GB27601996规定碳酸饮料的最大使用量为0.2/kg: 低盐酱菜、酱类、蜜饯、食醋、果酱（不包括罐头）、果汁饮料、塑料桶装浓缩果疏汁最大限最以苯甲酸 计为2gkg 山梨酸又名花揪酸，为无色、无嗅的针状结品，熔点134℃，沸点228℃。山梨酸难溶于水，易溶于 乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂，在酸性条件下可随水燕汽蒸馏，化学性质稳定。山梨酸钾易溶于水，难溶 于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。山梨酸及其钾盐也是用于酸性食品的防腐剂，适合于在pH5~6以下 仲用。是通与霉菌、母茵酶系中的基结合而到菌作用。但对厌氧芽询打菌、酸菌无效】 山梨酸是一种直链不饱和脂肪酸，可参与体内正常代谢，并被同化而产生C02和水，几乎对人体没有毒性
3.说明与讨论 （1）本方法可同时测定乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因、天门冬酰苯丙氨酸甲酯，检出限为 0.004 mg/mL。 (2) 样品须温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气。通过微孔滤膜过滤。 （三）山梨糖醇的检测 山梨糖醇的甜度与蔗糖相近。易溶于水，稳定性高，不易与氨基酸、蛋白质等发生褐变反应。我国和 FAO/WHO 对 ADI 值均未作特殊规定。我国允许在冷饮类、糕点、浓果汁、饼干、面包、酱菜类和糖果中 按正常生产需要使用。 1．原理 用水或乙醇溶液从样品中提取山梨糖醇，用减压浓缩方法将水分全部除去后，制备乙酰化山梨糖醇， 用乙醚萃取乙酰化山梨糖醇，浓缩至干，用丙酮定容后进行气相色谱分析。以保留时间定性、峰高或峰面 积定量。 2. 乙酰化山梨糖醇衍生物的制备 准确吸取样品溶液和山梨糖醇标准溶液各 10mL，放入 50mL 浓缩器中，准确加入 5mL 4mg/mL 木糖 醇作为内标液，在 60℃水浴上减压浓缩，除去水分，然后加入 14mL 无水吡啶和 7mL 无水乙醇，在 60～ 70℃水浴上激烈振摇，使残渣溶解，放置过夜。加水 20mL 后，用 10mL 水定量转移到分液漏斗中，用 50mL、 30mL、30mL 乙醚分 3 次萃取，合并全部乙醚层，用 20mL0．1mol/LH2SO4 洗 2 次，再用 20mL 水洗 1 次， 乙醚层加入无水硫酸钠，放置 1h。将此液过滤，残渣用 50mL 乙醚分数次洗涤，将滤液和洗液合并于圆底 烧瓶中，减压浓缩除去乙醚，向残渣中加丙酮使其溶解，准确加至 10mL。 3.色谱条件 检测器：氢焰电离检测器； 色谱柱：玻璃柱，内径为 3mm，长度为 2m；内装涂以 XE-60（3%）的 60～80 目硅烷化处理过的硅 藻土担体； 温度：柱温从 150℃到 220℃以 6℃/min 速度升温；检测器为 250℃； 载气：氮气，40mL/min。 第三节 几种常用的防腐剂的检测 防腐剂是能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的的一类物质总称。防腐 剂使用简单。可使食品在常温下及简易保藏条件下短期贮藏，在现阶段尚有—定作用，随着食品保藏新工 艺、新设备的不断完善，防腐剂将逐步减少使用，甚至不用。目前，我国许可使用的品种有：苯甲酸、苯 甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钠、丙酸钙、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、脱氢醋酸等。 一、苯甲酸钠和山梨酸钾的检测 苯甲酸又名安息香酸。为白色有丝光的鳞片或针状结晶，熔点 122℃，沸点 249．2℃。100℃开始升 华。在酸性条件下可随水蒸汽蒸馏。微溶于水。易溶于氯仿、丙酮、乙醇、乙醚等有机溶剂。化学性质较 稳定。苯甲酸钠为白色颗粒或结晶性粉末，无臭或微有安息香气味，在空气中稳定，易溶于水和乙醇，难 溶于有机溶剂，其水溶液呈弱碱性（pH 值约为 8），在酸性条件下（pH2．5~4）能转化为苯甲酸。 在酸性条件下苯甲酸及苯甲酸钠防腐效果较好，适宜用于偏酸的食品（pH 4．5~5）。苯甲酸进入人体 后，大部分与甘氨酸结合形成无害的马尿酸。其余部分与葡萄糖醛酸结合生成苯甲酸葡萄糖醛酸甙从尿中 排出，不在人体内积累。苯甲酸的毒性较小，1996 年 FAO/WHO 限定苯甲酸及盐的 ADI 值以苯甲酸计为 0~5mg/kg 体重。我国《食品添加剂使用卫生标准》GB 2760~1996 规定碳酸饮料的最大使用量为 0．2g/kg； 低盐酱菜、酱类、蜜饯、食醋、果酱（不包括罐头）、果汁饮料、塑料桶装浓缩果疏汁最大限量以苯甲酸 计为 2g/kg。 山梨酸又名花揪酸，为无色、无嗅的针状结晶，熔点 134℃，沸点 228℃。山梨酸难溶于水，易溶于 乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂，在酸性条件下可随水蒸汽蒸馏，化学性质稳定。山梨酸钾易溶于水，难溶 于有机溶剂，与酸作用生成山梨酸。山梨酸及其钾盐也是用于酸性食品的防腐剂，适合于在 pH5～6 以下 使用。它是通过与霉菌、酵母菌酶系统中的巯基结合而达到抑菌作用。但对厌氧芽孢杆菌、乳酸菌无效。 山梨酸是一种直链不饱和脂肪酸，可参与体内正常代谢，并被同化而产生 CO2 和水，几乎对人体没有毒性
是一种比苯甲酸更安全的防腐剂。FAO/WHO联合食品添加剂专家委员会1996年提出的山梨酸和山梨酸钾 的AD1值以山梨酸计为0-25mgg体重。我国《食品添加剂使用卫生标准》GB2760-1996规定，山梨酸 和山梨酸钾可用 ,最大限量为 0. 075g kg。水果、蔬菜保鲜及碳酸饮料为0. 2g/kg 胶原蛋白肠衣、低盐果酱、酱类、蜜饯、果汁饮料、果冻为0.5gkg:果酒为0.6gkg:塑料桶装浓缩果 疏汁、软糖、鱼干制品、即食豆制食品、糕点、面包、即食海蛰、乳酸菌饮料等为1.0gkg。 (一)气相色谱法 1.原理 样品酸化后，用了联提取装甲移、裂酸，用带火格离子化拾的气相色兽仪进行分离测定 标准系列比较定 量。测出苯甲酸、山梨酸最后 再分别乘以适当的相对分子质最比，求出苯甲酸钠，山梨 酸钾量。按下式计算 m.×1000 苯甲酸含量(g/kg或g/L)= 式中：x 一样品中苯甲酸或山梨酸的含最，kg: i一 测定用样品液中苯甲酸或山梨酸的质量，g: -样品的质量，g -加入丙酮的体积，mL: 测定时进样的体积，mL 2.色谱条件 检测器：氢火焰离子化检测器： 色谱柱：内径3mm,长2m玻璃柱，内装涂以5%(mm)DEGS +1%(m/m)HPO4固定液的60-80目Chromosorb WAW。 流速：载气为氨气，50 mL/mir 温度：进样口230℃，检测器230℃，柱温170℃ 图12-2苯甲酸、山梨酸 3说明与讨论 气相色谱图 (1)本法为国家标准方法，可同时测定食品中苯甲酸和山梨酸的含量，山梨酸保留时间为173秒， 苯甲酸保留时间为368秒。如图12-2所示。适用于酱油、果汁、果酱。最低检出限为1g,用于色谱分析 的样品为1g时， 最低检出浓度为lmgs (2)样品溶液的制备：称取一定景事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸( :1)酸化，用15mL、10mL乙燧提取2次，每次振摇1min,将上层乙魅提收液吸入另一个25mL带塞量 筒中。合并乙醚提取液。用3mL氯化钠酸性溶液(40gL)洗涤2次，静止15min,用滴管将乙醚层通过 无水硫酸钠滤入25L容量瓶中。加乙涨至刻度，混匀。准确吸取5mL乙醚提取液于10mL带塞刻度试管 中，置40℃水浴上挥干，加入2mL丙酮溶解残渣，备用。 (3)通过无水硫酸钠层过滤后的乙 应达到去除水分的目的，否则乙酰提取液在40℃挥去乙 醚后如仍残留水分会影响测定结果。这时必须将残留水分挥干，但会吸出极少量白色氯化钠，当出现此情 况时，应搅动残留的无机盐后加入石油醚乙醚(3：1)振摇，取上清液进样，否则氯化钠覆盖苯甲酸和山 梨酸，时 (二)高效液相色谱法 1.原理 样品加温除去二氧化碳和乙醇，调节pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后， 根据保留时间和峰面积进行定性和定量。按下式计算： 苯甲酸含量(g1kg或g1L)=m×1000 xx10
是一种比苯甲酸更安全的防腐剂。FAO/WHO 联合食品添加剂专家委员会 1996 年提出的山梨酸和山梨酸钾 的 ADI 值以山梨酸计为 0~25mg/kg 体重。我国《食品添加剂使用卫生标准》GB 2760~1996 规定，山梨酸 和山梨酸钾可用于肉、鱼、禽类制品，最大限量为 0．075g/kg。水果、蔬菜保鲜及碳酸饮料为 0．2g/kg； 胶原蛋白肠衣、低盐果酱、酱类、蜜饯、果汁饮料、果冻为 0．5g/kg；果酒为 0．6g/kg；塑料桶装浓缩果 疏汁、软糖、鱼干制品、即食豆制食品、糕点、面包、即食海蛰、乳酸菌饮料等为 1．0g/kg。 （一）气相色谱法 1．原理 样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸，用带氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与 标准系列比较定量。测出苯甲酸、山梨酸量后，再分别乘以适当的相对分子质量比，求出苯甲酸钠，山梨 酸钾量。按下式计算： 式中： x──样品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg； m1──测定用样品液中苯甲酸或山梨酸的质量，µg； m2──样品的质量，g； V1──加入丙酮的体积，mL； V2──测定时进样的体积，mL。 2.色谱条件 检测器：氢火焰离子化检测器； 色谱柱：内径 3mm，长 2m 玻璃柱，内装涂以 5%（m/m）DEGS +1%（m/m）H3PO4 固定液的 60～80 目 Chromosorb WAW。 流速：载气为氮气，50mL/min 温度：进样口 230℃，检测器 230℃，柱温 170℃。 图 12-2 苯甲酸、山梨酸 3 说明与讨论 气相色谱图 （1）本法为国家标准方法，可同时测定食品中苯甲酸和山梨酸的含量，山梨酸保留时间为 173 秒， 苯甲酸保留时间为 368 秒。如图 12-2 所示。适用于酱油、果汁、果酱。最低检出限为 1ug，用于色谱分析 的样品为 1g 时，最低检出浓度为 1mg/kg。 （2）样品溶液的制备：称取一定量事先混合均匀的样品，置于 25mL 带塞量筒中，加 0．5mL 盐酸（1 ︰1）酸化，用 15mL、10mL 乙醚提取 2 次，每次振摇 1min，将上层乙醚提取液吸入另一个 25mL 带塞量 筒中。合并乙醚提取液。用 3mL 氯化钠酸性溶液（40g/L）洗涤 2 次，静止 15min，用滴管将乙醚层通过 无水硫酸钠滤入 25mL 容量瓶中。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取 5mL 乙醚提取液于 10mL 带塞刻度试管 中，置 40℃水浴上挥干，加入 2mL 丙酮溶解残渣，备用。 （3）通过无水硫酸钠层过滤后的乙醚提取液应达到去除水分的目的，否则乙醚提取液在 40℃挥去乙 醚后如仍残留水分会影响测定结果。这时必须将残留水分挥干，但会吸出极少量白色氯化钠，当出现此情 况时，应搅动残留的无机盐后加入石油醚-乙醚（3︰1）振摇，取上清液进样，否则氯化钠覆盖苯甲酸和山 梨酸，时 （二）高效液相色谱法 1.原理 样品加温除去二氧化碳和乙醇，调节 pH 至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后， 根据保留时间和峰面积进行定性和定量。按下式计算： 1000 25 5 1000 / / 1 2 2 1 × × × × = V V m m 苯甲酸含量（g kg或g L） 1000 1000 / / 1 2 2 1 × × × = V V m m 苯甲酸含量（g kg或g L）