透析即用半透膜(透析袋)将大分子蛋白质分离 出来。在生物大分子制备过程中除去盐、少量有 机溶剂、生物小分子杂质和浓缩样品,透析法最 简便。 MWCO: molecular weight cut-off 透析时,小于 MWCO(截留分子量)的分子在 透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过 透析膜,其速度与浓度梯度、膜面积及温度成正 比。欲快速透析可采用直径较小的透析袋以增加 膜面积。常用温度:4℃,升温、更换袋外透析 液或用磁力搅拌器,均能是高透析速度
透析即用半透膜（透析袋）将大分子蛋白质分离 出来。在生物大分子制备过程中除去盐、少量有 机溶剂、生物小分子杂质和浓缩样品，透析法最 简便。 透析时，小于MWCO（截留分子量）的分子在 透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过 透析膜，其速度与浓度梯度、膜面积及温度成正 比。欲快速透析可采用直径较小的透析袋以增加 膜面积。常用温度：4℃，升温、更换袋外透析 液或用磁力搅拌器，均能提高透析速度。 MWCO: molecular weight cut-off
蛋白质分子上的电荷与疏水区 疏水区域 x
疏水区域 蛋白质分子上的电荷与疏水区
蛋白质大分子溶液在一定溶剂中超速离心时可发 生沉降。沉降速度与向心加速度之比值即为蛋白质的沉 降系数S s-V/O-r s是沉降系数( sedimentation coefficient),o是离心转 子的角速度(弧度秒),r是到旋转中心的距离,v是 沉降速度。沉降系数以每单位重力的沉降时间表示,蛋 白质、核酸、核糖体、病毒等的沉降系数通常为1-00 10-13秒范围,10-13这个因子叫做沉降单位S(斯维德 贝格单位, Svedberg unit),即1S-101秒,如血红蛋 白的S约为4×1013秒或4S。大多数蛋白质和核酸的沉降 系数在4S和40S之间,核糖体及其亚基在30S和80S之间, 多核糖体在100s以上
蛋白质大分子溶液在一定溶剂中超速离心时可发 生沉降。沉降速度与向心加速度之比值即为蛋白质的沉 降系数S。 s=v/ω2r s是沉降系数(sedimentation coefficient)，ω是离心转 子的角速度（弧度/秒），r是到旋转中心的距离，v是 沉降速度。沉降系数以每单位重力的沉降时间表示，蛋 白质、核酸、核糖体、病毒等的沉降系数通常为1-200 ×10-13秒范围，10-13这个因子叫做沉降单位S（斯维德 贝格单位，Svedberg unit），即1S=10-13秒，如血红蛋 白的S约为4×10-13秒或4S。大多数蛋白质和核酸的沉降 系数在4S和40S之间，核糖体及其亚基在30S和80S之间， 多核糖体在100S以上
白质的两性电离和等E点 蛋白质由氨基酸组成,分子中除两端的游离氨基 和羧基外,侧链中尚有一些解离基,如Gl、Asp残基 中的γ和β-羧基,Lys残基中的ε-氨基,Arg残基的胍基 和Hi的咪唑基。作为带电颗粒,可以在电场中移动, 移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷性质。蛋白质 颗粒在溶液中所带的电荷,既取决于其分子组成中碱」 性和酸性氨基酸的含量,又受所处溶液pH影晌。当处 于某一pH时,蛋白质兼性离子( zwitterion)的净电荷为0, 此时溶液的pH值为蛋白质的等电点( Isoelectric point, pD。处于等电点的蛋白质颗粒,在电场中并不移动。 蛋白质溶液的pH大于等电点,该蛋白质颗粒带负电荷, 反之则带正电荷
蛋白质的两性电离和等电点 蛋白质由氨基酸组成，分子中除两端的游离氨基 和羧基外，侧链中尚有一些解离基，如Glu、Asp残基 中的γ和β-羧基，Lys残基中的ε-氨基，Arg残基的胍基 和His的咪唑基。作为带电颗粒，可以在电场中移动， 移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷性质。蛋白质 颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱 性和酸性氨基酸的含量，又受所处溶液pH影响。当处 于某一pH时，蛋白质兼性离子(zwitterion)的净电荷为0， 此时溶液的pH值为蛋白质的等电点(isoelectric point， pI)。处于等电点的蛋白质颗粒，在电场中并不移动。 蛋白质溶液的pH大于等电点，该蛋白质颗粒带负电荷， 反之则带正电荷
溶液中的蛋白质颗 pH=p时,蛋白质分子所带净电荷为零,蛋白 质分子在电场中不移动。 pH>p时,蛋白质分子所带净电荷为负,蛋 白质分子在电场中向阳极移动。 pH<p时,蛋白质分子所带净电荷为正,蛋 白质分子在电场中向阴极移动。 在p时,蛋白质失去了胶体的稳定条件,即 没有相同电荷相互排斥的作用,所以不稳定,溶 解度最小,易沉淀
溶液中的蛋白质颗粒 • pH=pI时，蛋白质分子所带净电荷为零，蛋白 质分子在电场中不移动。 • pH＞pI时，蛋白质分子所带净电荷为负，蛋 白质分子在电场中向阳极移动。 • pH＜pI时，蛋白质分子所带净电荷为正，蛋 白质分子在电场中向阴极移动。 在pI时，蛋白质失去了胶体的稳定条件，即 没有相同电荷相互排斥的作用，所以不稳定，溶 解度最小，易沉淀