【实验仪器及用品】 1.标准蛋白液(01mgm)029结晶牛 血清白蛋白用09%NaC|稀释到2000ml 2.09%Nac 3.考马斯亮蓝试剂:100mg考马斯亮蓝 G250溶于50m5%乙醇中,加100m85%磷 酸,蒸馏水稀释1000m,滤纸过滤。 4.待测蛋白:人血清,用前用0.9%NaC 稀释200倍 5.漩涡混合器
【实验仪器及用品】 1. 标准蛋白液（0.1mg/ml）0.2g结晶牛 血清白蛋白用0.9%NaCl 稀释到2000ml。 2. 0.9%NaCl 3. 考马斯亮蓝试剂：100mg考马斯亮蓝 G250溶于50ml 5%乙醇中，加100ml85%磷 酸，蒸馏水稀释1000ml，滤纸过滤。 4. 待测蛋白：人血清，用前用0.9%NaCl 稀释200倍。 5. 漩涡混合器
6.移液管0.5m(Ⅹ2),10m(×2), 5m(×1) 7.分光光度计 8.试管15cm×15cm(×8 9.量筒100m(×1 10.电子分析天平 11.试管架(×1)
6. 移液管0.5ml（×2），1.0ml（×2）， 5ml（×1） 7. 分光光度计 8. 试管1.5cm×15cm (×8) 9. 量筒100ml(×1) 10. 电子分析天平 11. 试管架(×1)
实验内容及步骤】 标准曲线线的绘制 取7支干净试管,按下表进行编号并加入试剂。 以A595为纵坐标,标准蛋白质年浓度为横坐标,绘制 标准曲线。 试剂号1 3 5 6 试剂 1mgm标准蛋白液m001020.30406 0.15mol/l Nacl/ml 10.90.8070.604 考马斯亮蓝染液ml 4.04.04.04.04040 摇匀,1小时内以1号管为空白对照,在595m处比色 A595
【实验内容及步骤】 一、标准曲线线的绘制 取7支干净试管，按下表进行编号并加入试剂。 以A595为纵坐标，标准蛋白质年浓度为横坐标，绘制 标准曲线。 试剂号 试剂 1 2 3 4 5 6 1mg/ml标准蛋白液/ml 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.15mol/L NaCl/ml 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 考马斯亮蓝染液/ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 摇匀，1小时内以1号管为空白对照，在595nm处比色 A595
2.未知样液的测定 另取一干净试管,加入样品10m及考马斯亮蓝 染液40m,混匀,室温静置3min,于波长595nm处 比色,读取吸光度。在标准曲线上查找蛋白质浓度。 【注意事项】 1、如果测定的要求很严格,可以在试剂加入5 20min内测定吸光度,在这段时间内样色很稳定。 2、测定中,蛋白质染料复合物会吸附在比色皿 上,实验证明可以忽视。测定完后可以用乙醇洗干净
2. 未知样液的测定 另取一干净试管，加入样品1.0ml及考马斯亮蓝 染液4.0ml，混匀，室温静置3min，于波长595nm处 比色，读取吸光度。在标准曲线上查找蛋白质浓度。 【注意事项】 1、如果测定的要求很严格，可以在试剂加入5- 20min内测定吸光度，在这段时间内样色很稳定。 2、测定中，蛋白质-染料复合物会吸附在比色皿 上，实验证明可以忽视。测定完后可以用乙醇洗干净
【思考题】 1、根据一下要求选择一种或者几种蛋白质定量测 定蛋白质浓度。 (1)样品不容易溶解,但要求结果很准确 (2)要求在半天内测定60个样品。 (3)要求很迅速的测定一系列试管(30只)中溶液 的蛋白质浓度。 2、试着比较该法与其他几种方法的优缺点
【思考题】 1、根据一下要求选择一种或者几种蛋白质定量测 定蛋白质浓度。 （1）样品不容易溶解，但要求结果很准确。 （2）要求在半天内测定60个样品。 （3）要求很迅速的测定一系列试管（30只）中溶液 的蛋白质浓度。 2、试着比较该法与其他几种方法的优缺点