《生化大实验》
《生化大实验》
实验课程简介 生化大实验是一门综合性的实验课程, 教学的目的在于通过对生命物质的分离制 备,纯化,分析等综合性实验,在已掌握 的基础生物化学理论知识和生化实验常用 方法的基本原理、基本操作技术(如滴定 比色、层析、电泳等)的基础上,训练学 生的综合实践动手能力,掌握蛋白质、酶 核酸等重要物质的分离、纯化等的测定技 术
实验课程简介 生化大实验是一门综合性的实验课程， 教学的目的在于通过对生命物质的分离制 备，纯化，分析等综合性实验，在已掌握 的基础生物化学理论知识和生化实验常用 方法的基本原理、基本操作技术（如滴定、 比色、层析、电泳等）的基础上，训练学 生的综合实践动手能力，掌握蛋白质、酶、 核酸等重要物质的分离、纯化等的测定技 术
目录 实验一蛋白质含量的测定 实验二离子交换法血清纯化IgG 实验三离子交换层析法分离血清白蛋白 实验四SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量 实验五等电聚焦法测定样品的等电点 实验六质粒的分离与纯化 实验七PCR扩增目的基因片段 实验八酶联免疫吸附实验
目 录 实验一 蛋白质含量的测定 实验二 离子交换法血清纯化IgG 实验三 离子交换层析法分离血清白蛋白 实验四 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量 实验五 等电聚焦法测定样品的等电点 实验六 质粒的分离与纯化 实验七 PCR扩增目的基因片段 实验八 酶联免疫吸附实验
实验一蛋白质含量的测定 (一)考马斯亮蓝法 【实验目的】 学习考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理和方 法。 【实验原理】 考马斯亮蓝测定蛋白质含量是利用蛋白质一染 料结合法的原理,定量测定微量蛋白质浓度快速、 灵敏的方法
实验一 蛋白质含量的测定 （一）考马斯亮蓝法 【实验目的】 学习考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的原理和方 法。 【实验原理】 考马斯亮蓝测定蛋白质含量是利用蛋白质--染 料结合法的原理，定量测定微量蛋白质浓度快速、 灵敏的方法
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同样色 形式,红色棕黑色和蓝色。染料与蛋白质结 合后有红色-棕黑色和蓝色形式,最大光吸收 由465m变成595mm,测定595mm吸光的 增加量,可以测定与其结合的蛋白质的量 蛋白质与染料结合速度很快,2min就可 以反应完全,并可以稳定仙h,蛋白质染料复 合物有很大的消光系数,使得测定蛋白质浓 度是灵敏度很高。测定范围为10-100yg蛋白 质,微量测定时达到110μg蛋白质。此反应 反复性好精度高,线性关系好
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同样色 形式，红色-棕黑色和蓝色。染料与蛋白质结 合后有红色-棕黑色和蓝色形式，最大光吸收 由465nm变成595nm，测定595 nm吸光的 增加量，可以测定与其结合的蛋白质的量。 蛋白质与染料结合速度很快，2min就可 以反应完全，并可以稳定1h，蛋白质-染料复 合物有很大的消光系数，使得测定蛋白质浓 度是灵敏度很高。测定范围为10-100μg蛋白 质，微量测定时达到1-10μg蛋白质。此反应 反复性好精度高，线性关系好