4．消毒 先以长柄钳夹取 75%的酒精棉球擦拭内胎和集精杯，再以 95%的酒精棉球充 分擦拭。采精前，最好用稀释液冲洗 1~2 次。 5．集精杯（管）的的安装 牛、羊、猪的集精杯（管）可借助特制的保定套或橡皮漏斗 与假阴道连接。 6．注水 通过注水孔向假阴道内、外壁之间注入 50~55℃温水，使其能在采精时保持 38~42℃，注水总量约为内、外壁间容积的 1/3~1/2。 7．涂润滑剂 用消毒好的玻璃棒，取灭菌凡士林少许，均匀的涂于内胎的表面，涂抹深 度为假阴道长度的 1/2 左右，润滑剂不宜过多、过厚，以免混入精液中，降低精液品质。当 用手握法给公猪采精时不须使用润滑剂。 8．调节假阴道内腔的压力 从注气孔吹入或打入（猪）空气，根据不同家畜和个体的要 求调整内腔压力。 9．假阴道内腔温度的测量 把消毒的温度计插入假阴道内腔，待温度不变时再读数，一 般 40℃左右为宜，马可稍高，也要根据不同个体的要求作适当调整。 10．用一块褶成四折的消毒纱布盖住假阴道入口，以防灰尘落入，即可准备采精。 （三）输精器材的准备 金属和玻璃制成的输精管、输精枪，最好用高压蒸汽消毒，在输精前最好将输精管用稀 释液冲洗 1~2 次。 细管冷冻精液的输精器一般由金属外壳和里面的推杆组成。使用前金属外套应进行消毒， 前端的金属套不能连续使用。使用时将细管的一端剪去，棉栓一端插在输精枪的推杆上，借 助推杆推动细管中的棉栓即可将精液推出。 若采用开张器法输精，需对开张器先进行严格消毒方可使用。 四、实验报告 试述公羊假阴道的组成及安装时的注意事项。 实验四 精液品质的肉眼检查及精子活率评定 一、目的和要求 熟悉肉眼检查精液品质的方法；掌握评定精子活力的方法及评价指标；验证外界因素对 精子运动及生存能力的影响；掌握死活精子染色和制作抹片的方法
4．消毒 先以长柄钳夹取 75%的酒精棉球擦拭内胎和集精杯，再以 95%的酒精棉球充 分擦拭。采精前，最好用稀释液冲洗 1~2 次。 5．集精杯（管）的的安装 牛、羊、猪的集精杯（管）可借助特制的保定套或橡皮漏斗 与假阴道连接。 6．注水 通过注水孔向假阴道内、外壁之间注入 50~55℃温水，使其能在采精时保持 38~42℃，注水总量约为内、外壁间容积的 1/3~1/2。 7．涂润滑剂 用消毒好的玻璃棒，取灭菌凡士林少许，均匀的涂于内胎的表面，涂抹深 度为假阴道长度的 1/2 左右，润滑剂不宜过多、过厚，以免混入精液中，降低精液品质。当 用手握法给公猪采精时不须使用润滑剂。 8．调节假阴道内腔的压力 从注气孔吹入或打入（猪）空气，根据不同家畜和个体的要 求调整内腔压力。 9．假阴道内腔温度的测量 把消毒的温度计插入假阴道内腔，待温度不变时再读数，一 般 40℃左右为宜，马可稍高，也要根据不同个体的要求作适当调整。 10．用一块褶成四折的消毒纱布盖住假阴道入口，以防灰尘落入，即可准备采精。 （三）输精器材的准备 金属和玻璃制成的输精管、输精枪，最好用高压蒸汽消毒，在输精前最好将输精管用稀 释液冲洗 1~2 次。 细管冷冻精液的输精器一般由金属外壳和里面的推杆组成。使用前金属外套应进行消毒， 前端的金属套不能连续使用。使用时将细管的一端剪去，棉栓一端插在输精枪的推杆上，借 助推杆推动细管中的棉栓即可将精液推出。 若采用开张器法输精，需对开张器先进行严格消毒方可使用。 四、实验报告 试述公羊假阴道的组成及安装时的注意事项。 实验四 精液品质的肉眼检查及精子活率评定 一、目的和要求 熟悉肉眼检查精液品质的方法；掌握评定精子活力的方法及评价指标；验证外界因素对 精子运动及生存能力的影响；掌握死活精子染色和制作抹片的方法
二、材料和仪器 （一）精液 牛、羊、猪或兔等任一种动物的精液 （二）器械 显微镜，显微镜保温箱（或显微镜恒温台），载玻片，盖玻片，搪瓷盘， 温度计，滴管，擦镜纸，纱布，有刻度试管，计数器 （三）药品 5%伊红和 1%苯胺黑 三、内容和方法 （一）精液的肉眼检查 1.射精量 将采得的精液倒入有刻度试管或集精杯中，测其容量。各种家畜的射精量请 参考教材。如果精液量过多或过少时，分析其原因。 2.色泽和气味 家畜的精液通常乳白色或灰白色，因畜种的不同而又浓淡的区别。马、 猪的精液稀薄，呈灰白色；牛、羊的精液浓密，呈乳白色。家畜精液无味或略有腥味。 3.云雾状的观察 取原精液一滴于在载玻片上不加盖玻片，用低倍镜观察精液滴的边缘 部分。可见牛羊的敬业翻腾滚动的云雾状态；猪马的精液无此现象。 （二）评定精子的活率 采精后立刻在 25℃左右的实验室内进行评定精子的活率，最好在 37℃保温箱内或加热的 载物台上进行。在评定精子活率的同时也可以测定精子的密度。用玻璃棒蘸取一滴原精液或 经稀释的精液（马、猪精液的精子密度低，不须稀释；而牛、羊精液的密度大，须用 0.9%氯 化钠溶液稀释，其温度须与精液密度相近）滴在洁净的载玻片上，盖上洁净的盖玻片，其间 充满精液，不存留气泡。也可滴在盖玻片上翻放于凹玻片的凹窝上。置于显微镜下，放大 250~400 倍检查。注意显微镜的载物台须放平，最好是在暗视野中观察。 精子活动有三种类型：直线前进运动、旋转运动和原地摆动。评价精子活率是根据直线 前进运动精子数的多少而定。 目前评定精子活率等级的方法有两种： 十级制——在显微镜视野中估算直线前进运动精子所占全部精子的百分数。直线前进运 动的精子为 100%者评为 1.0 级，90%者为 0.9 级，以此类推。 五级制——全部精子都呈直线前进运动，属于“5”级；绝大多数呈直线前进运动（约 80%）为“4”级；前进运动精子略多于半数者（约 60%）为“3”级；不及半数者为“2”级； 呈直线前进运动的精子数目极少者属“1”级
二、材料和仪器 （一）精液 牛、羊、猪或兔等任一种动物的精液 （二）器械 显微镜，显微镜保温箱（或显微镜恒温台），载玻片，盖玻片，搪瓷盘， 温度计，滴管，擦镜纸，纱布，有刻度试管，计数器 （三）药品 5%伊红和 1%苯胺黑 三、内容和方法 （一）精液的肉眼检查 1.射精量 将采得的精液倒入有刻度试管或集精杯中，测其容量。各种家畜的射精量请 参考教材。如果精液量过多或过少时，分析其原因。 2.色泽和气味 家畜的精液通常乳白色或灰白色，因畜种的不同而又浓淡的区别。马、 猪的精液稀薄，呈灰白色；牛、羊的精液浓密，呈乳白色。家畜精液无味或略有腥味。 3.云雾状的观察 取原精液一滴于在载玻片上不加盖玻片，用低倍镜观察精液滴的边缘 部分。可见牛羊的敬业翻腾滚动的云雾状态；猪马的精液无此现象。 （二）评定精子的活率 采精后立刻在 25℃左右的实验室内进行评定精子的活率，最好在 37℃保温箱内或加热的 载物台上进行。在评定精子活率的同时也可以测定精子的密度。用玻璃棒蘸取一滴原精液或 经稀释的精液（马、猪精液的精子密度低，不须稀释；而牛、羊精液的密度大，须用 0.9%氯 化钠溶液稀释，其温度须与精液密度相近）滴在洁净的载玻片上，盖上洁净的盖玻片，其间 充满精液，不存留气泡。也可滴在盖玻片上翻放于凹玻片的凹窝上。置于显微镜下，放大 250~400 倍检查。注意显微镜的载物台须放平，最好是在暗视野中观察。 精子活动有三种类型：直线前进运动、旋转运动和原地摆动。评价精子活率是根据直线 前进运动精子数的多少而定。 目前评定精子活率等级的方法有两种： 十级制——在显微镜视野中估算直线前进运动精子所占全部精子的百分数。直线前进运 动的精子为 100%者评为 1.0 级，90%者为 0.9 级，以此类推。 五级制——全部精子都呈直线前进运动，属于“5”级；绝大多数呈直线前进运动（约 80%）为“4”级；前进运动精子略多于半数者（约 60%）为“3”级；不及半数者为“2”级； 呈直线前进运动的精子数目极少者属“1”级
精子活率是精液品质评定的重要指标。受精能力与直线前进运动精子数的多少密切相关。 新鲜精液的活率大于 70%、冷冻精液解冻后的活率大于 30%时，方可用于人工授精。 （三）外界因素对精子活率的影响 1．温度 （1）将采得的原精液在载玻片上滴一滴，先放在 37℃ 显微镜下观察其活率，然后放在 高温 45~50℃下 2 分钟观察精子活率的变化。 （2）将新采得的精液立即检查其活率后随即移入 0~5℃温度下放 2~3 分钟，然后把温度 回升至 37~38℃后再检查精子活率，注意降温前后精子活率变化情况。 2．渗透压 观察原精液的活率后，分别在三滴原精液内分别加入 1％氯化钠溶液、3％ 氯化钠溶液和蒸馏水，观察其活率及形态有何变化。 3．振荡 取 1~2 ml 稀释过的精液放入小试管中，检查其活率后，用手上下剧烈振动 2~3 分钟，再观察其活率有何变化。 4. 光照 取 1~2 ml 稀释过的精液放入小试管中，检查其活率后，经阳光直射 10 分钟后 观察精子活率的变化。 5．化学药品 取 3 滴精液于载玻片上，用滴管分别滴入 2％煤酚皂液、1/1000 新洁尔灭 液和 75％酒精，观察其精子活率及形态有何变化。 （四）死活精子百分率测定 活精子头部是不易着色的，镜检时，精子头部是透明、无色的。而死精子则因伊红渗入 细胞质，使整个精子头部呈红色。苯胺黑为背景染色，使着色的精子头部可见。 1.将 5%的伊红和 1%的苯胺黑按 1:1 混匀，分装于 1~2ml 容量的试管中（加入试管容量 的 1/2），并在 37℃水浴中加温，随后加入原精液 1~3 滴，摇匀后再放回水浴中，3 分钟后立 即取出待用。也可将染液预热后，将伊红、精液及苯胺黑按照 1：1：1~2 的比例及顺序滴入 预热的凹玻片中混匀染色。 2.从以上混合液中用火柴棍沾上一小滴于载玻片的一端，用另一载玻片进行推动制成抹 片，待干燥后，高倍镜镜检（400 倍）。抹片时，最好在 35~40℃的条件下制作，而且制作过 程要快。也可将制好的抹片放在 37~38℃保温箱内干燥 30~60 秒。 3.在高倍镜下数 200 或 500 个精子，其中分别数出死、活精子各占的百分率。活精子百 分率总是要比精子活率高
精子活率是精液品质评定的重要指标。受精能力与直线前进运动精子数的多少密切相关。 新鲜精液的活率大于 70%、冷冻精液解冻后的活率大于 30%时，方可用于人工授精。 （三）外界因素对精子活率的影响 1．温度 （1）将采得的原精液在载玻片上滴一滴，先放在 37℃ 显微镜下观察其活率，然后放在 高温 45~50℃下 2 分钟观察精子活率的变化。 （2）将新采得的精液立即检查其活率后随即移入 0~5℃温度下放 2~3 分钟，然后把温度 回升至 37~38℃后再检查精子活率，注意降温前后精子活率变化情况。 2．渗透压 观察原精液的活率后，分别在三滴原精液内分别加入 1％氯化钠溶液、3％ 氯化钠溶液和蒸馏水，观察其活率及形态有何变化。 3．振荡 取 1~2 ml 稀释过的精液放入小试管中，检查其活率后，用手上下剧烈振动 2~3 分钟，再观察其活率有何变化。 4. 光照 取 1~2 ml 稀释过的精液放入小试管中，检查其活率后，经阳光直射 10 分钟后 观察精子活率的变化。 5．化学药品 取 3 滴精液于载玻片上，用滴管分别滴入 2％煤酚皂液、1/1000 新洁尔灭 液和 75％酒精，观察其精子活率及形态有何变化。 （四）死活精子百分率测定 活精子头部是不易着色的，镜检时，精子头部是透明、无色的。而死精子则因伊红渗入 细胞质，使整个精子头部呈红色。苯胺黑为背景染色，使着色的精子头部可见。 1.将 5%的伊红和 1%的苯胺黑按 1:1 混匀，分装于 1~2ml 容量的试管中（加入试管容量 的 1/2），并在 37℃水浴中加温，随后加入原精液 1~3 滴，摇匀后再放回水浴中，3 分钟后立 即取出待用。也可将染液预热后，将伊红、精液及苯胺黑按照 1：1：1~2 的比例及顺序滴入 预热的凹玻片中混匀染色。 2.从以上混合液中用火柴棍沾上一小滴于载玻片的一端，用另一载玻片进行推动制成抹 片，待干燥后，高倍镜镜检（400 倍）。抹片时，最好在 35~40℃的条件下制作，而且制作过 程要快。也可将制好的抹片放在 37~38℃保温箱内干燥 30~60 秒。 3.在高倍镜下数 200 或 500 个精子，其中分别数出死、活精子各占的百分率。活精子百 分率总是要比精子活率高
四、实验报告 将实验结果填入下表内。 实验五 精子密度测定 一、目的和要求 掌握检查精子密度的几种方法。要求学生熟练掌握血细胞计数方法，它是目前许多简单 而实用方法的基础。 二、材料和仪器 （一）材料 牛、羊、猪或兔等任何一种家畜的新鲜精液 （二）器材 显微镜，血吸管，红细胞和白细胞吸管，血细胞计数室，载玻片，盖玻片， 200 µl 枪头，细乳胶管，5 ml 试管，1 ml 移液枪及枪头 （三）药品 3%氯化钠，乙醚，95%乙醇，去离子水 三、内容和步骤 精子密度也称为精子浓度，指每毫升精液中所含的精子数。精子密度的大小直接关系到 精液稀释倍数和输精量的有效精子数，也是评定精液品质的重要指标之一。评定方法一般有 目测法和计数法。 （一）目测法 与检查活率的方法相同，往往与观察活率同时进行，只是精液不作稀释。 处理前 活率评分 处理后 活率评分 37~38℃ 40~45℃ 降温前 降温后 加入溶液前 加入 1％NaCl 溶液后 加入 3％NaCl 溶液后 加入蒸馏水后 振荡前 经剧烈振动 阳光照射前 阳光照射后 加入药液前 加 2％煤酚皂液 加入 1／1000 新洁尔灭溶液 加入 75％酒精后
四、实验报告 将实验结果填入下表内。 实验五 精子密度测定 一、目的和要求 掌握检查精子密度的几种方法。要求学生熟练掌握血细胞计数方法，它是目前许多简单 而实用方法的基础。 二、材料和仪器 （一）材料 牛、羊、猪或兔等任何一种家畜的新鲜精液 （二）器材 显微镜，血吸管，红细胞和白细胞吸管，血细胞计数室，载玻片，盖玻片， 200 µl 枪头，细乳胶管，5 ml 试管，1 ml 移液枪及枪头 （三）药品 3%氯化钠，乙醚，95%乙醇，去离子水 三、内容和步骤 精子密度也称为精子浓度，指每毫升精液中所含的精子数。精子密度的大小直接关系到 精液稀释倍数和输精量的有效精子数，也是评定精液品质的重要指标之一。评定方法一般有 目测法和计数法。 （一）目测法 与检查活率的方法相同，往往与观察活率同时进行，只是精液不作稀释。 处理前 活率评分 处理后 活率评分 37~38℃ 40~45℃ 降温前 降温后 加入溶液前 加入 1％NaCl 溶液后 加入 3％NaCl 溶液后 加入蒸馏水后 振荡前 经剧烈振动 阳光照射前 阳光照射后 加入药液前 加 2％煤酚皂液 加入 1／1000 新洁尔灭溶液 加入 75％酒精后
具体操作是取 1 小滴原精液在清洁载玻片上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，无气 泡存留，精液也不外流或不溢于盖玻片上，置于 400~600 倍显微镜下观察。根据精子密度的 大小粗略分为密、中、稀三个等级。 “密”指整个视野内充满精子，几乎看不到精子间的空隙和单个精子的运动。 “中”指视野内精子之间相当于一个精子长度的明显空隙，可见到单个精子的活动。 “稀”指视野内精子之间的空隙很大，能容纳 2 个或 2 个以上精子。 这种评定方法带有一定的主观性，误差较大。另外，由于各种家畜精子密度相异较大， 很难统一制定一个标准。此法只在基层人工授精站常用。 表 1 各种公畜精子密度三级标准 密（亿/ml） 中（亿/ml） 稀（亿/ml） 牛 10~20 8~10 8 以下 羊 25 以上 20~25 20 以下 猪、马 2 以上 1~2 1 以下 （二）计数法 1.血吸管计算 （1）清洗器械 吸 管：自来水 蒸馏水 95％酒精 乙醚 计数室：自来水 蒸馏水 白稠布擦干净备用 （2）精液稀释 ①用 l ml 移液枪吸 3％ NaCl 0.2 ml 或 2 ml，放入小试管中，用血吸管吸出 10 µl 或 20 µl NaCl(根据稀释倍数确定)抛掉。 ②用血吸管将精液吸至刻度 10 µl 或 20 µl 处。 ③用纱布擦去吸管尖端所附的精液。 ④用姆指按住试管口，振荡 2~3 分钟使其均匀混合。 （3）精子的计数 ①将擦洗干净的血细胞计数室放于显微镜的载物台上，盖上盖玻片。 ②将试管中稀释好的精液滴一滴于计数室上面的盖玻片的边缘，使精液自动渗进计数室 内。注意不要使精液溢出于盖玻片之外，并不可使精液不够而计数室内有现气泡或干燥之处， 如有这些现象应重做
具体操作是取 1 小滴原精液在清洁载玻片上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，无气 泡存留，精液也不外流或不溢于盖玻片上，置于 400~600 倍显微镜下观察。根据精子密度的 大小粗略分为密、中、稀三个等级。 “密”指整个视野内充满精子，几乎看不到精子间的空隙和单个精子的运动。 “中”指视野内精子之间相当于一个精子长度的明显空隙，可见到单个精子的活动。 “稀”指视野内精子之间的空隙很大，能容纳 2 个或 2 个以上精子。 这种评定方法带有一定的主观性，误差较大。另外，由于各种家畜精子密度相异较大， 很难统一制定一个标准。此法只在基层人工授精站常用。 表 1 各种公畜精子密度三级标准 密（亿/ml） 中（亿/ml） 稀（亿/ml） 牛 10~20 8~10 8 以下 羊 25 以上 20~25 20 以下 猪、马 2 以上 1~2 1 以下 （二）计数法 1.血吸管计算 （1）清洗器械 吸 管：自来水 蒸馏水 95％酒精 乙醚 计数室：自来水 蒸馏水 白稠布擦干净备用 （2）精液稀释 ①用 l ml 移液枪吸 3％ NaCl 0.2 ml 或 2 ml，放入小试管中，用血吸管吸出 10 µl 或 20 µl NaCl(根据稀释倍数确定)抛掉。 ②用血吸管将精液吸至刻度 10 µl 或 20 µl 处。 ③用纱布擦去吸管尖端所附的精液。 ④用姆指按住试管口，振荡 2~3 分钟使其均匀混合。 （3）精子的计数 ①将擦洗干净的血细胞计数室放于显微镜的载物台上，盖上盖玻片。 ②将试管中稀释好的精液滴一滴于计数室上面的盖玻片的边缘，使精液自动渗进计数室 内。注意不要使精液溢出于盖玻片之外，并不可使精液不够而计数室内有现气泡或干燥之处， 如有这些现象应重做