食品中总抗坏血酸 的测定 一分子荧光法
一、 实验目的 ·1、掌握分子荧光法测定食品中抗坏血酸的基 本原理和方法。 ·2、熟悉样品中总抗坏血酸的提取操作步骤 ·3、了解食品中抗坏血酸测定的意义
二、实验原理 ·样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢型抗坏血酸 后，与邻苯二胺反应生成有荧光的喹喔啉衍生物，其荧 光强度与脱氢型抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比， 以此测定食品中抗坏血酸和脱氢型抗坏血酸的总量。 活性炭氧化作用： 将活性炭置于(1：9)的盐酸中加热回流1~2小时，过滤，用水洗至滤液 中无铁离子为止，置于110~120℃烘箱中干燥。这样，活性炭形成多孔 微晶结构，具有大的比表面积。大的比表面积吸附氧，遇还原型抗坏血 酸时，在活性炭表面发生氧化-还原反应，使抗坏血酸转换为脱氢型抗坏 血酸。 ·方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗血酸的测定
三、仪器与试剂 3.1仪器 安捷伦荧光分光光度计；组织捣碎机 3.2试剂 偏磷酸-乙酸溶液；硫酸溶液；偏磷酸-乙酸硫酸溶液；乙酸 钠溶液；硼酸乙酸钠溶液；邻苯二胺溶液，抗坏血酸标液， 百里酚蓝指示剂(pH<1.2为红色：pH=2.8为黄色；pH>4 为蓝色)
四、实验步骤 4.1样品处理 (1)样品提取 称取100g新鲜样品，加100g偏磷酸-乙酸溶液打成匀浆。 称取20g匀浆于100ml容量瓶中。 加1滴百里酚蓝指示剂。若成红色，用偏磷酸-乙酸溶液 稀释至刻度，若成黄色或蓝色，用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液 稀释至刻度(pH=1.2)。 混匀，过滤，滤液备用。 (2)氧化处理 取样品滤液、标准应用液各50mL于两只100mL具塞三 角瓶中，分别加入1g活化后活性炭，用力振摇1min,过 滤，收集滤液，得样品氧化液和标准氧化液