保健食品中褪黑素的测定 -一一一高效液相色谱法 脑白金
一、实验目的 ·1、掌握高效液相色谱法测定褪黑素的原理、超声 提取样品中褪黑素的方法及定性定量的方法。 ·2、熟悉谱析L6000高效液相色谱仪的使用方法。 ·3、了解保健食品中褪黑素测定的意义及注意事项
二、实验原理 ·样品中的褪黑素经甲醇溶解，稀释过滤后， 上清液注入高效液相色谱仪分离分析，紫外 检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性， 外标法定量。 ·方法适用于保健食品中褪黑素的测定
三、仪器与试剂 3.1仪器 北京谱析L6000高效液相色谱仪（配紫外检测器，C18反相色 谱柱；滤膜过滤器，0.45μm有机滤膜，超声波提取仪，离 心机 3.2试剂 ·3.2.1褪黑素（对照品) ■3.2.2甲醇（色谱纯) ■3.2.3冰乙酸溶液(0.2%)吸取1.00mL冰乙酸，稀释至 500mL纯水中 ·3.2.4褪黑素标准应用液（1mgmL)
四、实验步骤 4.1样品处理 (1)用研钵将片剂或胶囊研成粉末并混合均匀。准确称取 0.2g于10mL刻度试管中，加乙醇溶解，用超声波提取仪 提取20min,离心5分钟(3500 r/min),上清液转入25mL 的容量瓶中；残渣加10mL甲醇，超声提取20min,离 心5分钟(3500 r/min),上清液并入25mL的容量瓶中；以 流动相定容，过滤备用(0.45μm的有机系滤膜)。 (2)参考色谱条件：C18色谱柱(25cm×0.46cm,5m; 流动相：甲醇10.2%冰乙酸溶液(50/50)；流速： 1.0 mL/min,检测波长222nm;进样量：20μL