第七章光学检测技术 ■利用物质所具有的各种光学性质,对物质 进行定性、定量及结构分析的技术 ■包括:旋光检测、析光检测、荧光检测 分光光度检测、散射光谱检测等。 生化领域常用:分光光度检测、旋光检测 荧光检测
第七章 光学检测技术 ◼ 利用物质所具有的各种光学性质，对物质 进行定性、定量及结构分析的技术。 ◼ 包括：旋光检测、析光检测、荧光检测、 分光光度检测、散射光谱检测等。 ◼ 生化领域常用：分光光度检测、旋光检测、 荧光检测
分光光度检测 ■又称分子吸收光谱检测,是利用物质分子 所特有的吸收光谱而对物质进行定性定量 测定的检测技术。 ■紫外分光光度检测(200~400mm ■可见光分光光度检测(400~760nm) ■红外光分光光度检测(760~10000nm)
一 分光光度检测 ◼ 又称分子吸收光谱检测，是利用物质分子 所特有的吸收光谱而对物质进行定性定量 测定的检测技术。 ◼ 紫外分光光度检测（200～400nm） ◼ 可见光分光光度检测（400～760nm） ◼ 红外光分光光度检测（760～10000nm）
,2, 1样品溶液的配备 ■(1)对各种光有选择性吸收特性的物质 (2)本身没有颜色的物质,转变为有色 的物质溶液 2样品的检测 ■选择好入射光的波长,空白液调零,测 定
◼ 1 样品溶液的配备 ◼ （1）对各种光有选择性吸收特性的物质 ◼ （2）本身没有颜色的物质，转变为有色 的物质溶液 ◼ 2 样品的检测 ◼ 选择好入射光的波长，空白液调零，测 定
■3待测物质的定性分析 (1)将样品溶液在一定条件下(pH、温度 缓冲液等)测得的吸收光谱与物质的标准吸收 光谱相对照,推断样品是什么。 2)根据样品吸收光谱中峰顶与峰谷吸光度 之比值,与相当条件下资料所载的比值比较, 推断样品是什么 ATP:OD280/OD260=0.85,OD250/OD26=0.90 AMP:OD250/0D260=0.85,OD280OD26=0.22 (3)将分光光度检测与层析或电泳分离技术相配 合,综合判断
◼ 3 待测物质的定性分析 ◼ （1）将样品溶液在一定条件下（pH、温度、 缓冲液等）测得的吸收光谱与物质的标准吸收 光谱相对照，推断样品是什么。 ◼ （2）根据样品吸收光谱中峰顶与峰谷吸光度 之比值，与相当条件下资料所载的比值比较， 推断样品是什么。 ◼ 如 ◼ ATP: OD280/OD260=0.85, OD250/ OD260=0.90 ◼ AMP: OD250/OD260=0.85, OD280/OD260=0.22 ◼ (3)将分光光度检测与层析或电泳分离技术相配 合，综合判断
■4待测物质的定量分析 (1)标准曲线法 注意:对于存在有干扰物质的样品要进 行校正 (2 Lambert-Beer E=KCL,K-消光系数
◼ 4 待测物质的定量分析 ◼ （1）标准曲线法 注意：对于存在有干扰物质的样品要进 行校正。 ◼ （2）Lambert-Beer E=KCL, K-消光系数