实验指导 目录 实验一硫喷妥钠的兔体药代动力学研究. 实验二罗红霉素犬体药代动力学及相对生物利用度研究 (7) 实验三厄贝沙坦胶囊的人体生物利用度实验设计 ∴(10) 实验四个例药物不良反应的判断 实验五药物临床研究的盲法设计 (28)
实 验 指 导 目 录 实验一 硫喷妥钠的兔体药代动力学研究……………………………………………………（1） 实验二 罗红霉素犬体药代动力学及相对生物利用度研究…………………………………（7） 实验三 厄贝沙坦胶囊的人体生物利用度实验设计…………………………………………（10） 实验四 个例药物不良反应的判断……………………………………………………………（22） 实验五 药物临床研究的盲法设计……………………………………………………………（28）
实验一硫喷妥钠的兔体药代动力学研究 、实验目的 本实验以药代动力学原理为指导,分析测定静脉麻醉时硫喷妥钠在血液中的浓度,研究 体内血药浓度随时间变化的规律,为制定临床用药方案提供依据。 实验材料 1动物 健康家兔12只,♀♂各半,体重(2.5±0.5)kg。安徽医科大学实验动物中心提供 2药物 硫喷妥钠,上海新亚药业有限公司,批号9910501,9902102 3试剂 二氯甲烷,广州新港化工厂产品,批号950503。 045mol·l氢氧化钠溶液,临用前配制 4仪器 S53/54紫外可见分光光度计,上海棱光技术有限公司产品: W-80A旋涡混合器,上海精科实业有限公司产品 TDZ5多管架自动平衡离心机,长沙湘仪离心机有限公司产品: DL-5M低速冷冻离心机 三、实验方法 1动物实验部分 1.12.5%硫喷妥钠溶液的配制 取硫喷妥钠1支(0.5g),用2m生理盐水充分溶解,取lml至另一试管,加入生理盐 水至10ml,混匀 12取家兔,称体重,置于兔架中。平底试管13只编号0-12,加入肝素数滴备用 1.3家兔注射部位去毛、热敷和消毒,待血管扩张后,以左手拇指与食指压住静脉耳根端, 使静脉充盈,给药前用12号针头自耳静脉取血1-1.5ml,置于0管中。 14将5号或7号针头平行刺入静脉,抽动针管,见有回血即可推注。静脉注射25%硫喷 妥钠溶液20mg·kgl。采用小量、缓慢注射法,以每30s注入lml为宜。注射完毕后,拔出 针头,用手或药棉压迫针眼片刻。(一般耳内缘静脉深不易固定,故不用或少用,外缘静脉 浅易固定,常用。)
实验一 硫喷妥钠的兔体药代动力学研究 一、实验目的 本实验以药代动力学原理为指导，分析测定静脉麻醉时硫喷妥钠在血液中的浓度，研究 体内血药浓度随时间变化的规律，为制定临床用药方案提供依据。 二、实验材料 1 动物 健康家兔 12 只，♀♂各半，体重（2.5+0.5）kg。安徽医科大学实验动物中心提供。 2 药物 硫喷妥钠，上海新亚药业有限公司，批号 9910501，9902102。 3 试剂 二氯甲烷，广州新港化工厂产品，批号 950503。 0.45mol•l -1 氢氧化钠溶液，临用前配制。 4 仪器 S53/54 紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司产品； XW-80A 旋涡混合器，上海精科实业有限公司产品； TDZ5 多管架自动平衡离心机，长沙湘仪离心机有限公司产品； DL-5M 低速冷冻离心机。 三、实验方法 1 动物实验部分 1.1 2.5%硫喷妥钠溶液的配制 取硫喷妥钠 1 支（0.5g），用 2ml 生理盐水充分溶解，取 1ml 至另一试管，加入生理盐 水至 10ml，混匀。 1.2 取家兔，称体重，置于兔架中。平底试管 13 只编号 0-12，加入肝素数滴备用。 1.3 家兔注射部位去毛、热敷和消毒，待血管扩张后，以左手拇指与食指压住静脉耳根端， 使静脉充盈，给药前用 12 号针头自耳静脉取血 1-1.5ml，置于 0 管中。 1.4 将 5 号或 7 号针头平行刺入静脉，抽动针管，见有回血即可推注。静脉注射 2.5%硫喷 妥钠溶液 20mg·kg-1。采用小量、缓慢注射法，以每 30s 注入 1ml 为宜。注射完毕后，拔出 针头，用手或药棉压迫针眼片刻。（一般耳内缘静脉深不易固定，故不用或少用，外缘静脉 浅易固定，常用。）
15于给药后5min、15min、25min、35min、45min、1h、2h、3h、4h、5h、6h用12号针 头自另一侧耳缘静脉采血1-1.5m,血标本均用肝素抗凝。 16分离血浆(3000r·minl,l0min)至另一试管,于-20℃保存,直至测定。 2血药浓度测定(紫外分光光度法) 2.1硫喷妥钠标准溶液的配制 精密称取硫喷妥钠对照品100mg,用蒸馏水适量溶解,移入100ml容量瓶中,加水至 刻度,摇匀,得1mg·ml浓度的标准储备液,取储备液配制成3.125、625、12.5、25.0 500、1000、2000μg·mll的硫喷妥钠标准溶液 22标准曲线的制备 精密称取3.125、625、12.5、250、50.0、1000、2000μg·m1的硫喷妥钠标准溶液 0.lml,分置lom具塞试管中,加入0.45 molr-氢氧化钠溶液4ml,混匀。用045moll氢 氧化钠溶液为参比,以lcm吸收池,于大约304nm波长处测定各管的吸光度,以硫喷妥钠 C为横坐标,吸光度A为纵坐标,求得线性回归方程。 23血浆标准曲线的制备 取空白血浆7份分置10ml具塞试管中,分别加入浓度为3.125、6,25、125、250、50.0 1000、2000μg·m的硫喷妥钠标准溶液0.lm,每份用二氯甲烷4m和3ml萃取两次 (旋涡混合提取2min),离心(3000r·minl,10min),合并萃取液6ml。向萃取液中加入 045moll-氢氧化钠溶液4ml,混匀(旋涡混合30s),离心(3000r·min1,10min),抽取 氢氧化钠层供测定。余同标准曲线制备项下。以硫喷妥钠C为横坐标,吸光度A为纵坐标, 求得线性回归方程 24回收率和精密度实验 分别取空白血浆0.5m,精密加入不同浓度的硫喷妥钠标准溶液,使其血浆浓度分别为 625、25.0、1000ug·m1。余同标准曲线制备项下。于1日内5次和连续5日内分别考察 其回收率和日内、日间变异结果。 2.5血浆样品测定 取血浆o.lml,每份用二氯甲烷4ml和3ml萃取两次(旋涡混合提取2min),离心 (3000r·min2, 10min),合并萃取液6ml。向萃取液中加入045mol氢氧化钠溶液4ml, 混匀(旋涡混合30s),离心(3000r·min,l0min),抽取氢氧化钠层供测定。用omin管 为参比,以lcm吸收池,于大约304nm波长处测定各管的吸光度
1.5 于给药后 5min、15 min、25 min、35min、45 min、1h、2h、3h、4h、5h、6h 用 12 号针 头自另一侧耳缘静脉采血 1-1.5ml，血标本均用肝素抗凝。 1.6 分离血浆（3000r·min-1，10min）至另一试管，于-20℃保存，直至测定。 2 血药浓度测定（紫外分光光度法） 2.1 硫喷妥钠标准溶液的配制 精密称取硫喷妥钠对照品 100mg，用蒸馏水适量溶解，移入 100ml 容量瓶中，加水至 刻度，摇匀，得 1 mg·ml-1 浓度的标准储备液，取储备液配制成 3.125、6.25、12.5、25.0、 50.0、100.0、200.0 μg·ml- 1 的硫喷妥钠标准溶液。 2.2 标准曲线的制备 精密称取 3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·ml- 1 的硫喷妥钠标准溶液 0.1ml，分置 10ml 具塞试管中，加入 0.45mol•l -1 氢氧化钠溶液 4ml，混匀。用 0.45mol•l -1 氢 氧化钠溶液为参比，以 1cm 吸收池，于大约 304nm 波长处测定各管的吸光度，以硫喷妥钠 C 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标，求得线性回归方程。 2.3 血浆标准曲线的制备 取空白血浆 7 份分置 10ml 具塞试管中，分别加入浓度为 3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、 100.0、200.0 μg·ml- 1 的硫喷妥钠标准溶液 0.1ml，每份用二氯甲烷 4ml 和 3ml 萃取两次 （旋涡混合提取 2min），离心（3000r·min-1，10min），合并萃取液 6ml。向萃取液中加入 0.45mol•l -1 氢氧化钠溶液 4ml，混匀（旋涡混合 30s），离心（3000r·min-1，10min），抽取 氢氧化钠层供测定。余同标准曲线制备项下。以硫喷妥钠 C 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标， 求得线性回归方程。 2.4 回收率和精密度实验 分别取空白血浆 0.5ml，精密加入不同浓度的硫喷妥钠标准溶液，使其血浆浓度分别为 6.25、25.0、100.0μg·ml- 1。余同标准曲线制备项下。于 1 日内 5 次和连续 5 日内分别考察 其回收率和日内、日间变异结果。 2.5 血浆样品测定 取血浆 0.1ml，每份用二氯甲烷 4ml 和 3ml 萃取两次（旋涡混合提取 2min），离心 （3000r·min-1，10min），合并萃取液 6ml。向萃取液中加入 0.45mol•l -1 氢氧化钠溶液 4ml， 混匀（旋涡混合 30s），离心（3000r·min-1，10min），抽取氢氧化钠层供测定。用 0min 管 为参比，以 1cm 吸收池，于大约 304nm 波长处测定各管的吸光度
S53/54紫外可见分光光度计的正常基本操作: 开机自检与自校开机后显示窗两侧8灯全亮,指示进入自检与自校状态,约需十 余分钟。当 TRANS灯亮即说明自校结束进入待机状态,可随时应用 2、重调100%基线(基线校正)在样品室通光位上置入参考样品;在λ START、λEND λINT三标尺下用▲或ⅴ确定起始波长、结束波长、波长间隔参数值(缺省参数为200nm、 1000nm、lnm)后,再按λPara至ANOW灯亮。先后按FUNC2、▲启动基线校正功能。 3、调零按“0%”键,即能自动调整零位。 4、调整100%T将用作背景的空白样品置入样品室光路中,盖下试样盖(同时打开光 门)按一下“100%T”键即能自动调整100%T(一次有误差时可加按)。 5、设定波长按λPara键到λNOW灯亮,按▲或至要求波长,再按λPara键确认 显示窗改变波长至设定值,即完成波长设定步骤 6、改变试样槽位置让不同样品进入光路。 7、改变标尺本仪器设有两类各四种标尺,第一类光度类有: TRANS.透射比、ABS.吸 光度、FACT浓度因子、CONC.浓度直读。各标尺间的转换用Mode键操作,并由“ TRANS.透 射比”,“ABS.吸光度”,“FACT.浓度因子”,“CONC.浓度直读”指示灯分别指示,开 机初始状态为 TRANS,每按一次顺序循环。第二类波长类有:ANOW当前波长、 A START 起始波长、λEND结束波长、λINT波长扫描间隔 测定透明溶液的吸光度的应用操作: 自检校正→设定波长→置入空白→调100%T、0%T→置吸光度标尺→样品置入光路→ 读出数据 3药动学参数的计算 血药浓度一时间数据采用实用药代动力学计算程序3P87( Practical Pharmacokinetic Program- Version87)进行处理。本程序可处理各种给药方法的线性和非线性药代动力学模 型,给出有关药代动力学参数,适用于新药开发研制、药代动力学分析及临床药代动力学计 算。3P87用全屏幕提示方式编辑和修改输入数据,并自动形成输入文件,可供随时调用或 修改。计算结果建立输出文件,随时可以输出各种图表齐备的详细计算结果供用户分析研究, 可对多剂量组数据进行批处理,给出统计结果,并备有简化系统,在输入数据后,即可得出 结果 3.13P87的调用
S53/54 紫外可见分光光度计的正常基本操作： 1、开机自检与自校 开机后显示窗两侧 8 灯全亮，指示进入自检与自校状态，约需十 余分钟。当 TRANS 灯亮即说明自校结束进入待机状态，可随时应用。 2、重调 100%基线（基线校正） 在样品室通光位上置入参考样品；在λSTART、λEND、 λINT 三标尺下用▲或▼确定起始波长、结束波长、波长间隔参数值（缺省参数为 200nm、 1000nm、1nm）后，再按λPara 至λNOW 灯亮。先后按 FUNC2、▲启动基线校正功能。 3、调零 按“0%”键，即能自动调整零位。 4、调整 100%T 将用作背景的空白样品置入样品室光路中，盖下试样盖（同时打开光 门）按一下“100%T”键即能自动调整 100%T（一次有误差时可加按）。 5、设定波长 按λPara 键到λNOW 灯亮，按▲或▼至要求波长，再按λPara 键确认， 显示窗改变波长至设定值，即完成波长设定步骤。 6、改变试样槽位置让不同样品进入光路。 7、改变标尺 本仪器设有两类各四种标尺，第一类光度类有：TRANS．透射比、ABS．吸 光度、FACT．浓度因子、CONC．浓度直读。各标尺间的转换用 Mode 键操作，并由“TRANS．透 射比”，“ABS．吸光度”，“FACT．浓度因子”，“CONC．浓度直读”指示灯分别指示，开 机初始状态为 TRANS，每按一次顺序循环。第二类波长类有：λNOW 当前波长、λSTART 起始波长、λEND 结束波长、λINT 波长扫描间隔。 测定透明溶液的吸光度的应用操作： 自检校正→设定波长→置入空白→调 100%T、0% T→置吸光度标尺→样品置入光路→ 读出数据 3 药动学参数的计算 血药浓度-时间数据采用实用药代动力学计算程序 3P87（Practical Pharmacokinetic Program-Version 87）进行处理。本程序可处理各种给药方法的线性和非线性药代动力学模 型，给出有关药代动力学参数，适用于新药开发研制、药代动力学分析及临床药代动力学计 算。3P87 用全屏幕提示方式编辑和修改输入数据，并自动形成输入文件，可供随时调用或 修改。计算结果建立输出文件，随时可以输出各种图表齐备的详细计算结果供用户分析研究， 可对多剂量组数据进行批处理，给出统计结果，并备有简化系统，在输入数据后，即可得出 结果。 3.1 3P87 的调用
使用硬盘及一个软盘驱动器时,将3P87程序盘放入A驱动器,键入[A3P87并按 ENTER]键,即可显示3P87程序的首页,再任意按一键即显示主菜单( MAIN MENU):1 输入或修改数据:2、用主数据计算药代动力学参数,选择模型;3、对多组数据的批处理 4、用户指定算法和条件计算药代动力学参数;5、计算结果输出:6、药代动力学参数计算 的简化系统;7、药代动力学模型的说明;8、退出3P87程序。 32在屏幕出现程序主菜单后,由键盘键功能数码[]时,屏幕左上角显示 Please Execute a: inpl,键入ainp并回车后,屏幕显示输入菜单( INPUT MENU),供输入功能的选择。其 内容为:1、输入数据:2、修改标题文件:;3、修改浓度-时间数据:4、增添浓度-时间数据 5、删除浓度时间数据:6、显示输入数据;7、打印输入数据;8、返回主菜单。 在屏幕显示输入菜单后,由键盘键功能数码[时,即显示标题文件内容,用户按光标 提示项目逐项输入标题文件内容,包括有:1、药名或文件名:2、实验对象:3、研制单位 4、日期:5、实验者;6、计算者:7、测定灵敏度;8、浓度单位:9、测定精密度(CV%) 10、时间单位:11、给药剂量单位。其中1、8、10和11项与实验记录及计算有密切关系 必须输入。 3.3输入给药途径 屏幕显示三种给药途径:1、静脉推注:2、静脉滴注:3、非静脉给药。 34输入剂量组数 3.5输入各剂量组的个体数目、剂量和静脉滴注时的滴注时间 3.6输入浓度-时间数据:1、输入主数据;2、数据记录序号:3、输入浓度-时间数据:4、 建立输入文件:5、显示或打印输入文件。 3.7药代动力学计算:1、用主数据进行计算:2、批处理的计算:3、指定算法和条件的计 算 3.8计算结果的输出 屏幕显示主菜单后,由键盘键功能数码[5]时,即进入输出程序,屏幕显示[ File name, 要求键入文件名,并予确认,然后显示输出菜单( OUTPUT MENU),输出菜单包括5项: 1、常规打印输出:2、个别计算结果显示;3、相关图及散点图:4、输出文件的清单打印 5、返回主菜单。在屏幕显示输出菜单时,键[则显示常规打印输出菜单( ROUTINE PRINT oUT),其内容有7项:1、标题文件:2、供选择模型用的计算结果:3、批处理的结果;4、 用户指定计算的结果:5、个别数据的计算结果:6、统计矩结果:7、返回输出菜单
使用硬盘及一个软盘驱动器时，将 3P87 程序盘放入 A 驱动器，键入[A:3P87]并按 [ENTER]键，即可显示 3P87 程序的首页，再任意按一键即显示主菜单（MAIN MENU）：1、 输入或修改数据；2、用主数据计算药代动力学参数，选择模型；3、对多组数据的批处理； 4、用户指定算法和条件计算药代动力学参数；5、计算结果输出；6、药代动力学参数计算 的简化系统；7、药代动力学模型的说明；8、退出 3P87 程序。 3.2 在屏幕出现程序主菜单后，由键盘键功能数码[1]时，屏幕左上角显示 Please Execute [a:inp]，键入 a:inp 并回车后，屏幕显示输入菜单（INPUT MENU），供输入功能的选择。其 内容为：1、输入数据；2、修改标题文件；3、修改浓度-时间数据；4、增添浓度-时间数据； 5、删除浓度-时间数据；6、显示输入数据；7、打印输入数据；8、返回主菜单。 在屏幕显示输入菜单后，由键盘键功能数码[1]时，即显示标题文件内容，用户按光标 提示项目逐项输入标题文件内容，包括有：1、药名或文件名；2、实验对象；3、研制单位； 4、日期；5、实验者；6、计算者；7、测定灵敏度；8、浓度单位；9、测定精密度（CV%）； 10、时间单位；11、给药剂量单位。其中 1、8、10 和 11 项与实验记录及计算有密切关系， 必须输入。 3.3 输入给药途径 屏幕显示三种给药途径：1、静脉推注；2、静脉滴注；3、非静脉给药。 3.4 输入剂量组数 3.5 输入各剂量组的个体数目、剂量和静脉滴注时的滴注时间 3.6 输入浓度-时间数据：1、输入主数据；2、数据记录序号；3、输入浓度-时间数据；4、 建立输入文件；5、显示或打印输入文件。 3.7 药代动力学计算：1、用主数据进行计算；2、批处理的计算；3、指定算法和条件的计 算 3.8 计算结果的输出 屏幕显示主菜单后，由键盘键功能数码[5]时，即进入输出程序，屏幕显示[File name]， 要求键入文件名，并予确认，然后显示输出菜单（OUTPUT MENU），输出菜单包括 5 项： 1、常规打印输出；2、个别计算结果显示；3、相关图及散点图；4、输出文件的清单打印； 5、返回主菜单。在屏幕显示输出菜单时，键[1]则显示常规打印输出菜单（ROUTINE PRINT OUT），其内容有 7 项：1、标题文件；2、供选择模型用的计算结果；3、批处理的结果；4、 用户指定计算的结果；5、个别数据的计算结果；6、统计矩结果；7、返回输出菜单