制性内切酶 Hae ll的识别位点 平整末端 5 GGCO 3 GG CC 3·CCGG 5 CC GG PstI的识别位点 5 CTGCAG3′ 3′-.性末端 CTGA 3′ ACGTO 5 G
Hae III的识别位点 Pst I的识别位点 G G C C 5’ 3’ C C G G 3’ 5’ C T G C A G 5’ 3’ G A C G T C 3’ 5’ G G C C C C G G 平整末端 C T G C A G 3’-粘性末端 限制性内切酶
制性内切酶 在已发现的限制性内切酶中,近百种酶的识别顺序 已被确定。有很多来源不同的酶有相同的碱基识别顺序, 这种酶称为“异源同功酶”( isoschizomer)。应该注意的是 ,这些酶虽然有相同的识别顺序,但它们的切点并不完全 样。例如XmaI和SmaI都识别六核苷酸 CCCGGG,但 XmaI的切点在 cCCGGG,而EmaI的切点则在 CCCGgGG,前者切割DNA分子,形成带有CCGG粘性 末端的DNA片段,而后者并不形成粘性末端。 当然,也有识别顺序和切点都相同的酶,如HapI Hpa Ily、MnoI,都在识别顺序CCGG内有一相同的切 点,HaI和 BUR I同样在识别顺序GGCC内有一相同的 切点
在已发现的限制性内切酶中，近百种酶的识别顺序 已被确定。有很多来源不同的酶有相同的碱基识别顺序， 这种酶称为“异源同功酶”(isochizomer)。应该注意的是 ，这些酶虽然有相同的识别顺序，但它们的切点并不完全 一样。例如Xma I和Sma I都识别六核苷酸CCCGGG，但 Xma I的切点在cCCGGG，而Ema I的切点则在 CCCGgGG，前者切割DNA分子，形成带有CCGG粘性 末端的DNA片段，而后者并不形成粘性末端。 当然，也有识别顺序和切点都相同的酶，如Hap II 、Hpa II、Mno I，都在识别顺序CCGG内有一相同的切 点，Hal III和BsuR I同样在识别顺序GGCC内有一相同的 切点。 限制性内切酶
核酸的一级结构 (二)DNA的限制酶图谱 用限制性内切酶把DNA切割成一定大小 的片断,这些酶解片断的排列顺序就叫DNA 的限制酶图谱。 图谱制作简单,将纯化的DNA用不同的 限制性内切酶切割,进行凝胶电泳分析,确 立了DNA限制酶图谱后,就可以测定每个 DNA片断的碱基顺序,最后排列出完整的 DNA分子碱基顺序
用限制性内切酶把DNA切割成一定大小 的片断，这些酶解片断的排列顺序就叫DNA 的限制酶图谱。 图谱制作简单，将纯化的DNA用不同的 限制性内切酶切割，进行凝胶电泳分析，确 立了DNA限制酶图谱后，就可以测定每个 DNA片断的碱基顺序，最后排列出完整的 DNA分子碱基顺序。 (二）DNA的限制酶图谱 核酸的一级结构
核酸的一级结构 (三)DNA序列测定 DNA序列测定技术从60年 代最早提出设想至今,已 经日臻完善,测定序列的 技术也越来越简化,在各 项研究工作中的地位也日 趋重要
DNA序列测定技术从60年 代最早提出设想至今，已 经日臻完善，测定序列的 技术也越来越简化，在各 项研究工作中的地位也日 趋重要。 核酸的一级结构
DNA序列测定 DNA序列分析战略 ●对于较小片断(≤500bp)的DNA,可直接利用 质粒系统(如PUC18,PUCl9等)测序
DNA序列测定 l对于较小片断（≤500bp)的DNA,可直接利用 质粒系统（如PUC18， PUC19等）测序