DNA序列测定 DNA序列分析战略 对于大片段DNA,可采用: ●限制性片断亚克隆法 对DNA进行酶切分析,确定酶谱后,以合适的限制性内切酶 降解以制备各种长度的限制酶片断,并亚克隆到测序载体上建 立亚克隆库,然后测亚克隆DNA序列,通过排列分析,确定 DNA片断的全序列 ●随机法(鸟枪测序法) 利用一定的方法将目的DNA随机打断成大小不同的片断 并获得亚克隆,收集这些亚克隆的DNA资料,通过计算机处理 而获得目的DNA的全部序列
DNA序列测定 对于大片段DNA，可采用： l限制性片断亚克隆法 对DNA进行酶切分析，确定酶谱后，以合适的限制性内切酶 降解以制备各种长度的限制酶片断，并亚克隆到测序载体上建 立亚克隆库，然后测亚克隆DNA序列，通过排列分析，确定 DNA片断的全序列 l随机法（鸟枪测序法） 利用一定的方法将目的DNA随机打断成大小不同的片断 并获得亚克隆，收集这些亚克隆的DNA资料，通过计算机处理 而获得目的DNA的全部序列
DNA序列测定 DNA序列测定方法 ●传统的序列测定技术有两种, Sanger等 (1977提出的酶法及Maxm和 Gibert(1977提 出的化学降解法
DNA序列测定 l传统的序列测定技术有两种，Sanger 等 (1977)提出的酶法及Maxam和Gibert(1977)提 出的化学降解法
DNA序列测定 双脱氧链终止法 Sanger.双脱氧链终止法使用特异引物在DNA 聚合酶作用下进行延伸反应,在DNA合成反应 混合物的4种普通dNTP中,加入少量的一种双 脱氧核苷三磷酸( ddntp)作为链终止剂,由于 ddntP在脱氧核糖的3位置缺少一个羟基,不 能与后续的dNTP形成磷酸二酯键,从而使 DNA链中断
双脱氧链终止法 lSanger双脱氧链终止法使用特异引物 在DNA 聚合酶作用下进行延伸反应，在DNA合成反应 混合物的4种普通dNTP中，加入少量的一种双 脱氧核苷三磷酸(ddNTP)作为链终止剂，由于 ddNTP在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基，不 能与后续的dNTP形成磷酸二酯键，从而使 DNA链中断。 DNA序列测定
双脱氧链终止法 deoxyribonucleoside triphosphate dideoxyribonucleoside triphosphate base base 5 0-0 -0-cb0 allows strand extension at 3 end prevents strand extension at 3'end
双脱氧链终止法
双脱氧链终止法 反应产物是一系列的核苷酸链,它们将分别 终止模板链的每一个A,每一个C,每一个G 或每一个T的位置上
双脱氧链终止法 l反应产物是一系列的核苷酸链，它们将分别 终止模板链的每一个A，每一个C，每一个G 或每一个T的位置上