制性内切酶 2限制性核酸内切酶的命名和种类 限制性核酸内切酶的命名:一般是以微生物属名的第 个字母(大写)和种名的前两个字母组成,第四个字母 表示菌株(品系)。字母后面的罗马字则是简单地表明该种生 物中不同限制酶分离的先后顺序。例如,分离自产色链霉 菌( treptomyces achromogenes)的两种限制酶被分别命名为 Sac和 SacII比如限制酶HincⅡ和HindⅢ则是分别来自流 感嗜血菌( Haemophilus in/ fluenzae)的c和d血清型菌株。 迄今为止,已有上千种限制酶被分离纯化,从目前已 商品化的100多种限制酶的识别序列可以看出,限制酶所识 别的DNA序列大多数都富含胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)
限制性核酸内切酶的命名：一般是以微生物属名的第 一个字母（大写）和种名的前两个字母组成，第四个字母 表示菌株(品系)。字母后面的罗马字则是简单地表明该种生 物中不同限制酶分离的先后顺序。例如，分离自产色链霉 菌(Streptomyces achromogenes )的两种限制酶被分别命名为 SacI和 SacII。比如限制酶HincⅡ和HindⅢ则是分别来自流 感嗜血菌(Haemophilus influenzae)的c和d血清型菌株。 2 限制性核酸内切酶的命名和种类 迄今为止，已有上千种限制酶被分离纯化，从目前已 商品化的100多种限制酶的识别序列可以看出，限制酶所识 别的DNA序列大多数都富含胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)。 限制性内切酶
制性内切酶 限制性核酸内切酶的种类: 型限制性内切酶 I型限制性内切酶能识别DNA分子内非甲基化的 特定序列,但切割是随机的,且切割位点远离识别 位点,不能生成特定片段,因此,I类酶作为DNA 的分析工具价值不大。 ●最早从大肠杆菌中发现的EcoK、EcoB就属于I类酶。 其分子量较大;反应过程中除需Mg2+外,还需要S 腺苷L甲硫氨酸、ATP;在DNA分子上没有特异性 的酶解片断
I型限制性内切酶 限制性内切酶 限制性核酸内切酶的种类： l最早从大肠杆菌中发现的EcoK、EcoB就属于I类酶。 其分子量较大；反应过程中除需Mg 2+外，还需要S- 腺苷-L甲硫氨酸、ATP；在DNA分子上没有特异性 的酶解片断. lI型限制性内切酶能识别DNA分子内非甲基化的 特定序列，但切割是随机的，且切割位点远离识别 位点，不能生成特定片段，因此，I类酶作为DNA 的分析工具价值不大
制性内切酶 II型限制性内切酶 ●Ⅱ型限制性内切酶能识别DNA分子中的特定序 列,大部分具有回文结构。II型限制性内切酶 识别的DNA序列一般长度是4、5和6个碱基对。 ●I类酶有Fc0 RI BamhI、 Hind ly、indI等 其分子量小于105道尔顿;反应只需Mg2+;最重要 的是在所识别的特定碱基顺序上有特异性的切点, 因而DNA分子经过I类酶作用后,可产生特异性的 酶解片断,这些片断可用凝胶电泳法进行分离、鉴 别。酶切后可形成粘性末端或平整末端
II型限制性内切酶 限制性内切酶 lII类酶有EcoR I、BamH I、Hind II、Hind III等。 其分子量小于10 5道尔顿；反应只需Mg 2+；最重要 的是在所识别的特定碱基顺序上有特异性的切点， 因而DNA分子经过II类酶作用后，可产生特异性的 酶解片断，这些片断可用凝胶电泳法进行分离、鉴 别。酶切后可形成粘性末端或平整末端。 lII型限制性内切酶能识别DNA分子中的特定序 列，大部分具有回文结构。 II型限制性内切酶 识别的DNA序列一般长度是4、5和6个碱基对
制性内切酶 3限制性内切酶的识别序列与酶切特点 (1)限制酶识别的DNA特异序列具有回纹结构 的序列。 (2)限制酶识别序列46个碱基对。 现在已从各种微生物中发现上千种限制酶, 它们识别序列的长度最短的是4个核苷酸,最长 的为8个核苷酸。基因克隆过程中使用频率最高 的是识别6个碱基对的限制酶
3 限制性内切酶的识别序列与酶切特点 (1)限制酶识别的DNA特异序列具有回纹结构 的序列。 (2)限制酶识别序列4-6个碱基对。 现在已从各种微生物中发现上千种限制酶， 它们识别序列的长度最短的是4个核苷酸，最长 的为8个核苷酸。基因克隆过程中使用频率最高 的是识别6个碱基对的限制酶。 限制性内切酶
制性内切酶 ECoRI的识别位点 5 GAATT 3 5′-粘性末端 AATTC 3′ CTTAAG 5 G Hind li的识别位点 5 AAgCTT 3 5′-.性末端 3· TTCGAA AGCTT 5 A
EcoR I的识别位点 G AA T T C 5’ 3’ C T T AA G 3’ 5’ AA T T C G 5’-粘性末端 Hind III的识别位点 T T C G AA AA G C T T 5’ 3’ 3’ 5’ A G C T T A 5’-粘性末端 限制性内切酶