实验一：果蝇性状观察与雌雄鉴别 一、实验目的： 学习区别雌雄蝇和观察果蝇主要性状，掌握制备果蝇饲料和进行果一般方法。 二、实验原理： 果蝇为双翅目昆虫，用作实验材料的优点是：生长迅速，生活周期短，没12天左右即可完 成一个世代：繁殖力较强，每只受精的雌蝇均可产卵400-500个：因此在短期内即可获得多数子 代，有利于遗传学分析：培养条件简易可行：其突变形状多属形态变异，便宜观察，因此， 果蝇在遗传学研究中得到广泛应用。 三、实验材料、用具和试剂： 饲养的野生型和几种常见的突变型果蝇。 双筒解剖镜，放大镜，饲养瓶或饲养管，麻醉瓶，白瓷板，棉塞，玻璃棒，镊子，大烧 杯，酒精灯。三脚架，石棉网，标签，新毛笔，酒精棉球，吸水纸，玉米粉，琼脂，葡萄糖， 酵母（原液或干粉），乙醚，丙酸或乳酸，死蝇盛留器，胶水 四、实验内容和步骤： 一)、制备饲料： 1、准备作为饲养瓶的广口瓶或玻璃管（消毒、干燥）并按饲养器口部大小制备棉塞（消毒） 2、果蝇的幼虫和成虫的主要食物，都是饲料内繁殖的酵母菌。 按照下表成分和下述方法制备饲料。 常用的果蝇饲料及成分 玉米粉饲料 米粉饲料 并 100ML 100ML 琼脂 1.1G 1-1.5G 糖 10G 10G 玉米粉 11G 酵母菌夜（或粉） 数滴 数滴 杀霉剂（丙酸或乳酸） 1-2滴 1-2滴 米粉 10G
1 实验一：果蝇性状观察与雌雄鉴别 一、实验目的： 学习区别雌雄蝇和观察果蝇主要性状，掌握制备果蝇饲料和进行果一般方法。 二、实验原理： 果蝇为双翅目昆虫，用作实验材料的优点是:生长迅速,生活周期短,没 12 天左右即可完 成一个世代;繁殖力较强,每只受精的雌蝇均可产卵 400-500 个;因此在短期内即可获得多数子 代，有利于遗传学分析；培养条件简易可行；其突变形状多属形态变异，便宜观察，因此， 果蝇在遗传学研究中得到广泛应用。 三、实验材料、用具和试剂： 饲养的野生型和几种常见的突变型果蝇。 双筒解剖镜，放大镜，饲养瓶或饲养管，麻醉瓶，白瓷板，棉塞，玻璃棒，镊子，大烧 杯，酒精灯。三脚架，石棉网，标签，新毛笔，酒精棉球，吸水纸，玉米粉，琼脂，葡萄糖， 酵母（原液或干粉），乙醚，丙酸或乳酸，死蝇盛留器，胶水 四、实验内容和步骤： 一）、制备饲料： 1、准备作为饲养瓶的广口瓶或玻璃管（消毒、干燥）并按饲养器口部大小制备棉塞（消毒） 2、果蝇的幼虫和成虫的主要食物，都是饲料内繁殖的酵母菌。 按照下表成分和下述方法制备饲料。 常用的果蝇饲料及成分 玉米粉饲料 米粉饲料 水 100ML 100ML 琼脂 1．1G 1—1．5G 糖 10G 10G 玉米粉 11G 酵母菌夜（或粉） 数滴 数滴 杀霉剂（丙酸或乳酸） 1---2 滴 1—2 滴 米粉 10G
按配方之比例称量所需物品。先用定量中2/3的水将琼脂煮化，再加糖，溶化：再 将玉米粉混合于1/3水内，搅匀后倾入琼脂糖夜中，一同煮沸，并随时用玻璃棒搅动，待 煮沸数分钟，饲料成为可流动的浆糊状时，即倾入饲养器内。每一饲养器内的饲料厚度约 为2CM即可。倾入饲料时，应注意勿使饲料倾在饲养瓶内的侧壁上，以免粘着果蝇。每 一饲养器内装好饲料后，立即塞好棉塞，直立在一旁。 (两天后)待凝后，用镊子夹酒精棉球（拧干）将器内侧壁上的水珠和饲料擦干净， 滴入1一2滴杀霉剂，并转动饲养瓶，使杀霉剂均匀分布于饲料表面，然后滴入或撒入酵 母液或干粉，使其均匀分布于饲料表面。然后再在饲料内插上消毒的吸水纸（作用是吸取 水分和供给幼虫化蛹的场所)，塞好棉塞，放置于258℃左右的恒温箱内待用。 为了保证酵母菌和果蝇的良好生长和繁殖，必须注意防止霉菌和其他细菌在饲养瓶内 繁殖，使用的杀霉剂只有一些抑制霉菌生长的作用，而无绝对防止的作用，因此关键在于 各项操作中，严格消毒和灭菌。 二)、观察果蝇性状和雌雄鉴别 1、将准备观察的果蝇倾入用作麻醉瓶的干燥广口瓶内，麻醉瓶的口部大小与饲养瓶 口部大小一致，以便倾入果蝇时，果蝇不致飞出。倾倒果蝇时，可将麻醉瓶的底部朝向光 亮处，果蝇喜向光亮处飞集，能自然逐渐飞入麻醉瓶内。（或将麻醉瓶自立桌上，装有果 蝇的饲养瓶口对口倒置于麻醉瓶上，用手亲拍饲养瓶，果蝇即进入麻醉瓶内。) 2、在原先制好的麻醉棉塞上滴上几滴乙醚，立即将麻醉棉塞塞好已装有果蝇的麻醉 瓶，等待3-5分钟，果蝇都停止不动，即可取去麻醉棉塞，将果蝇倾出观察。如果用作 杂交亲本或继续饲养的果蝇不能麻醉过度，以免致死（果蝇被麻醉后，若双翅外展呈45° 角，即己致死)。如果麻醉不够，中途苏醒，可再麻醉。 3、将已麻醉的果蝇，倾于白瓷板上（或白纸上），置于双筒解剖镜或扩大镜下观察其主要 性状，注意认清每一果蝇的复眼颜色，身体颜色，翅的长短及雌雄鉴别。 成蝇的雌雄性别的主要区别： 雌果蝇： 1)体型较大 2)腹部末端稍尖 3)腹背面外观有5条黑色条纹 4)无性梳 5)外生殖器外观较简单 雄果蝇： 2
2 按配方之比例称量所需物品。先用定量中 2/3 的水将琼脂煮化，再加糖，溶化；再 将玉米粉混合于 1/3 水内，搅匀后倾入琼脂糖夜中，一同煮沸，并随时用玻璃棒搅动，待 煮沸数分钟，饲料成为可流动的浆糊状时，即倾入饲养器内。每一饲养器内的饲料厚度约 为 2CM 即可。倾入饲料时，应注意勿使饲料倾在饲养瓶内的侧壁上，以免粘着果蝇。每 一饲养器内装好饲料后，立即塞好棉塞，直立在一旁。 （两天后）待凝后，用镊子夹酒精棉球（拧干）将器内侧壁上的水珠和饲料擦干净， 滴入 1—2 滴杀霉剂，并转动饲养瓶，使杀霉剂均匀分布于饲料表面，然后滴入或撒入酵 母液或干粉，使其均匀分布于饲料表面。然后再在饲料内插上消毒的吸水纸（作用是吸取 水分和供给幼虫化蛹的场所），塞好棉塞，放置于 258℃左右的恒温箱内待用。 为了保证酵母菌和果蝇的良好生长和繁殖，必须注意防止霉菌和其他细菌在饲养瓶内 繁殖，使用的杀霉剂只有一些抑制霉菌生长的作用，而无绝对防止的作用，因此关键在于 各项操作中，严格消毒和灭菌。 二）、观察果蝇性状和雌雄鉴别 1、将准备观察的果蝇倾入用作麻醉瓶的干燥广口瓶内，麻醉瓶的口部大小与饲养瓶 口部大小一致，以便倾入果蝇时，果蝇不致飞出。倾倒果蝇时，可将麻醉瓶的底部朝向光 亮处，果蝇喜向光亮处飞集，能自然逐渐飞入麻醉瓶内。（或将麻醉瓶自立桌上，装有果 蝇的饲养瓶口对口倒置于麻醉瓶上，用手亲拍饲养瓶，果蝇即进入麻醉瓶内。） 2、在原先制好的麻醉棉塞上滴上几滴乙醚，立即将麻醉棉塞塞好已装有果蝇的麻醉 瓶，等待 3---5 分钟，果蝇都停止不动，即可取去麻醉棉塞，将果蝇倾出观察。如果用作 杂交亲本或继续饲养的果蝇不能麻醉过度，以免致死（果蝇被麻醉后，若双翅外展呈 45° 角，即已致死）。如果麻醉不够，中途苏醒，可再麻醉。 3、将已麻醉的果蝇，倾于白瓷板上（或白纸上），置于双筒解剖镜或扩大镜下观察其主要 性状,注意认清每一果蝇的复眼颜色，身体颜色，翅的长短及雌雄鉴别。 成蝇的雌雄性别的主要区别； 雌果蝇： 1） 体型较大 2） 腹部末端稍尖 3） 腹背面外观有 5 条黑色条纹 4） 无性梳 5） 外生殖器外观较简单 雄果蝇：
1)体型较小 2)腹部末端顿圆 3)腹背面外观有3条黑色条纹（两窄一宽） 4)有性梳 5)外生殖器外观较复杂 五、实验报告内容： 1、制备的饲料种类和饲养瓶（管）数个 2、观察到的果蝇体色，翅形，复眼颜色及雌雄成蝇的外形特征（记看要点并简单图示） (附：果蝇的生活史) 果蝇的生活史包括卵，爬幼虫，蛹和成虫四个阶段。 卵：羽化后的雌蝇一般在12小时后开始交配，两天后才能产卵，卵长约0.5毫米，椭 圆形，腹面稍扁平，在背面的前端伸出一对触丝，它能使卵附着在食物或瓶壁上，不致深陷 到食物中。 幼虫：幼虫从卵中孵化出来后，经过两次蜕皮到第三龄，此时体长科达到4~5毫米， 肉眼观察下可见一端稍尖为头部，并且有一黑点即口器，稍后有一对半透明的唾腺，每条唾 腺前有一个唾腺管向前延伸，然后汇合成一条导管通向消化道，神经节位于消化道前端的上 方。通过体壁，还可以看到一对生殖腺位于身体后半部的上方两侧，精巢较大，外观为一明 显的黑色斑点，卵巢则较小，熟悉观察后可借以鉴别雌雄。幼虫的生活力强而贪食，在培养 基上前进时便留下一道沟沟，沟多而宽时，表明幼虫生长良好。 蛹：幼虫生活7~8天后即化蛹，化蛹前从培养基上初附在瓶壁上，渐次形成蛹，起初 颜色淡黄，柔软，以后逐渐硬化，变为深褐色，这就将要明显羽化了。 成虫：刚从蛹壳里羽化出的果蝇，虫体较长大，翅膀还没展开，体表也没有完全角质 化，所以呈半透明的乳白色，透过腹部体壁还可看到消化腺和性腺，不久，蝇体变为粗短椭 圆形，双翅展开，体色加深，如野生型果蝇起初为浅灰色，而后成为灰褐色。 果蝇全部生活史所需的时间，常因饲养温度和饲养条件等而有所不同。当营养条件适 宜时，在20℃下饲养，卵一幼虫期平均约为8天，蛹一成虫期约为6.3天，若在25℃ 下饲养，卵—幼虫期平均约为5天，蛹—成虫期仅需4.2天。因此当营养条件适合 而在25℃下饲养，只需10天就可完成一代生活史。普通果蝇的最适宜温度为20一25℃， 当温度低于10℃时，生活周期将延长至57天以上，而且生活力明显降低，如果高于30℃时 则将引起不育和死亡
3 1） 体型较小 2） 腹部末端顿圆 3)腹背面外观有 3 条黑色条纹(两窄一宽) 4） 有性梳 5） 外生殖器外观较复杂 五、实验报告内容： 1、制备的饲料种类和饲养瓶（管）数个 2、观察到的果蝇体色，翅形，复眼颜色及雌雄成蝇的外形特征（记看要点并简单图示） （附：果蝇的生活史） 果蝇的生活史包括卵，爬幼虫，蛹和成虫四个阶段。 卵：羽化后的雌蝇一般在 12 小时后开始交配，两天后才能产卵，卵长约 0.5 毫米，椭 圆形，腹面稍扁平，在背面的前端伸出一对触丝，它能使卵附着在食物或瓶壁上，不致深陷 到食物中。 幼虫：幼虫从卵中孵化出来后，经过两次蜕皮到第三龄，此时体长科达到 4~~~5 毫米， 肉眼观察下可见一端稍尖为头部，并且有一黑点即口器，稍后有一对半透明的唾腺，每条唾 腺前有一个唾腺管向前延伸，然后汇合成一条导管通向消化道，神经节位于消化道前端的上 方。通过体壁，还可以看到一对生殖腺位于身体后半部的上方两侧，精巢较大，外观为一明 显的黑色斑点，卵巢则较小，熟悉观察后可借以鉴别雌雄。幼虫的生活力强而贪食，在培养 基上前进时便留下一道沟沟，沟多而宽时，表明幼虫生长良好。 蛹：幼虫生活 7~8 天后即化蛹，化蛹前从培养基上初附在瓶壁上，渐次形成蛹，起初 颜色淡黄，柔软，以后逐渐硬化，变为深褐色，这就将要明显羽化了。 成虫：刚从蛹壳里羽化出的果蝇，虫体较长大，翅膀还没展开，体表也没有完全角质 化，所以呈半透明的乳白色，透过腹部体壁还可看到消化腺和性腺，不久，蝇体变为粗短椭 圆形，双翅展开，体色加深，如野生型果蝇起初为浅灰色，而后成为灰褐色。 果蝇全部生活史所需的时间，常因饲养温度和饲养条件等而有所不同。当营养条件适 宜时，在 20℃下饲养，卵——幼虫期平均约为 8 天，蛹———成虫期约为 6..3 天，若在 25℃ 下饲养，卵———幼虫期平均约为 5 天，蛹———成虫期仅需 4.2 天。因此当营养条件适合 而在 25℃下饲养，只需 10 天就可完成一代生活史。普通果蝇的最适宜温度为 20——25℃， 当温度低于 10℃时，生活周期将延长至 57 天以上，而且生活力明显降低，如果高于 30℃时 则将引起不育和死亡
实验二：果蝇一对相对性状的遗传分析 分离规律的验证 一、实验目的： 学习和掌握果蝇杂交技术，验证分离定律 二、实验原理： 一对相对性状的遗传方式是F代表现亲本之一的显性性状：F代在形成配子时由于成对 因子的分离而造成F1代性状的分离。F代配子与分离比是1：1，F1代性状分离比为3：1. 三、实验材料，用具及试剂： 纯系的野生型及不同的突变型处女蝇：灰身、黑身，檀黑身，黄身，长翅，残翅等。 双筒解剖镜（放大镜）、培养瓶，麻醉瓶，乙醚，白瓷板，毛笔，标签，胶水，死蝇盛 留器。 四、实验内容和步骤： 实验杂交的雌蝇应为处女蝇：雌蝇孵出后一般在12小时内不进行交配，因此获得处女 蝇的方法是：将已孵化出的果蝇从培养瓶中全部移走（注意一个也不能留下），以后12小时 内孵出的雌蝇均为处女蝇，即可分别收集杂交亲本用。（如能在八小时内收集更为可靠）一 般于前一天晚上八点以后将所有果蝇从培养瓶中移走，第二一天八点收集到的雌蝇均为处女 蝇。 1、选取残翅 (VgVg)处女蝇和野生型(++)处女蝇作为杂交亲本（或其他具相对性状的类型）， 正反交，各培养一瓶，每一瓶4一5对，记作P,进行杂交组合饲养。 具体方法：按上次实验的麻醉方法，将选取的处女蝇麻醉（注意不能麻醉过度，以免致 死)，再将已麻醉的处女蝇倒在白瓷板上（或白纸上）置于解剖镜下观察鉴别，（不能稍有错 误)。按预定的杂交组合，选取请本果蝇放入一个干净干燥的空管内，用棉塞塞好，并在试 管外面贴上标签，写明杂交组合形式（如残翅雌性*+/+雄性），并注明母体及父体个数，等 这些杂交亲本已由麻醉状态苏醒，并能活跃飞动时，在再将这些果蝇倾入事先准备好的培养
4 实验二：果蝇一对相对性状的遗传分析 ————分离规律的验证 一、实验目的: 学习和掌握果蝇杂交技术，验证分离定律 二、实验原理： 一对相对性状的遗传方式是 F 代表现亲本之一的显性性状；F 代在形成配子时由于成对 因子的分离而造成 F1 代性状的分离。F 代配子与分离比是 1：1，F1 代性状分离比为 3：1. 三、实验材料，用具及试剂： 纯系的野生型及不同的突变型处女蝇：灰身、黑身，檀黑身，黄身，长翅，残翅等。 双筒解剖镜（放大镜）、培养瓶，麻醉瓶，乙醚，白瓷板，毛笔，标签，胶水，死蝇盛 留器。 四、实验内容和步骤： 实验杂交的雌蝇应为处女蝇：雌蝇孵出后一般在 12 小时内不进行交配，因此获得处女 蝇的方法是：将已孵化出的果蝇从培养瓶中全部移走（注意一个也不能留下），以后 12 小时 内孵出的雌蝇均为处女蝇，即可分别收集杂交亲本用。（如能在八小时内收集更为可靠）一 般于前一天晚上八点以后将所有果蝇从培养瓶中移走，第二一天八点收集到的雌蝇均为处女 蝇。 1、选取残翅 （Vg/Vg）处女蝇和野生型（+/+）处女蝇作为杂交亲本（或其他具相对性状的类型） ， 正反交，各培养一瓶，每一瓶 4—5 对，记作 P，进行杂交组合饲养。 具体方法：按上次实验的麻醉方法，将选取的处女蝇麻醉（注意不能麻醉过度，以免致 死），再将已麻醉的处女蝇倒在白瓷板上（或白纸上）置于解剖镜下观察鉴别，（不能稍有错 误）。按预定的杂交组合，选取请本果蝇放入一个干净干燥的空管内，用棉塞塞好，并在试 管外面贴上标签，写明杂交组合形式（如残翅雌性*+/+雄性），并注明母体及父体个数，等 这些杂交亲本已由麻醉状态苏醒，并能活跃飞动时，在再将这些果蝇倾入事先准备好的培养
管内，管上贴好标签，注明杂交组合形式，母体及父体个体数目，日期及试验者姓名，进行 杂交饲养。 也可在杂交亲本还处于麻醉状态时，放入预先准备好的培养管内，但须避免果蝇接触管 内饲料或湿润处，以免果蝇粘在这些地方致死。因此可采取以下作法：1)、将饲料管放在 桌上，然后用纸条将亲本果蝇放在培养管内侧壁上方，塞上棉塞，等果蝇活跃飞行时，再将 培养管直立起来。2)、将仍处于麻醉状态的国营（用作杂交亲本）放在干净的白纸上，再将 培养瓶倒立，使培养瓶的口部严密罩着亲本果蝇，等这些果蝇活跃飞行时，就自然飞入管内， 再将棉塞塞好。（注意千万别写错或贴错标签） 2、将盛有杂交亲本果蝇的培养管，放在适宜温度处(20℃~25℃)，棉塞要塞好，切不 要无故打开，以免杂菌倾入，若有生霉现象应立即将果蝇换入新培养管内。记录第一个化蛹 时间和第一个出蛹时间。 3、7~8天后移出全部亲本果蝇，记录移出时间。 4、待F1代成蝇孵出后，观察其性状并计数，每隔2~3天观察一次并作记录，期间检 查3~5次，检出的果蝇移去处理 5、选取F1代果蝇5对移入新培养瓶内互交繁殖（此时不一定用处女蝇，为什么？） 每人作两瓶，记录第一个化蛹时间和出蛹时间。 6、7~8天后移出全部F2果蝇，记录移出时间。 7、待F2代成蝇孵出后，观察期性状并记数，其检查3~5次，检出的果蝇移去处理。 8、按下列格式记录所得结果： (注意计数的准确和观察时的细致) A杂交组合 日期 试验者 统计日期 F1,成蝇表现型及数目 备注 竅 个人 小组 全班 J
5 管内，管上贴好标签，注明杂交组合形式，母体及父体个体数目，日期及试验者姓名，进行 杂交饲养。 也可在杂交亲本还处于麻醉状态时，放入预先准备好的培养管内，但须避免果蝇接触管 内饲料或湿润处，以免果蝇粘在这些地方致死。因此可采取以下作法： 1）、将饲料管放在 桌上，然后用纸条将亲本果蝇放在培养管内侧壁上方，塞上棉塞，等果蝇活跃飞行时，再将 培养管直立起来。2）、将仍处于麻醉状态的国营（用作杂交亲本）放在干净的白纸上，再将 培养瓶倒立，使培养瓶的口部严密罩着亲本果蝇，等这些果蝇活跃飞行时，就自然飞入管内， 再将棉塞塞好。（注意千万别写错或贴错标签） 2、将盛有杂交亲本果蝇的培养管，放在适宜温度处（20℃~25℃），棉塞要塞好，切不 要无故打开，以免杂菌倾入，若有生霉现象应立即将果蝇换入新培养管内。记录第一个化蛹 时间和第一个出蛹时间。 3、7~8 天后移出全部亲本果蝇，记录移出时间。 4、待 F1 代成蝇孵出后，观察其性状并计数，每隔 2~3 天观察一次并作记录，期间检 查 3~5 次，检出的果蝇移去处理 5、选取 F1 代果蝇 5 对移入新培养瓶内互交繁殖（此时不一定用处女蝇，为什么？） 每人作两瓶，记录第一个化蛹时间和出蛹时间。 6、7~8 天后移出全部 F2 果蝇，记录移出时间。 7、待 F2 代成蝇孵出后，观察期性状并记数，其检查 3~5 次，检出的果蝇移去处理。 8、按下列格式记录所得结果： （注意计数的准确和观察时的细致） A 杂交组合 日期 试验者 统计日期 F1，成蝇表现型及数目 备注 总 数 个人 小组 全班