第四章 食用菌菌种生产 俗话说：“母壮儿肥”，好种是保证丰产、丰收的基础。 第一节食用菌菌种概述 一、菌种的概念 指人工培养进行扩大繁殖和用于生产的纯菌丝体。 二、菌种重要性 菌种：食用菌生产中的“种子”，菌种质量的好坏直接影响栽培的成败和 产量的高低，只有优良的菌种才能获得高产和优质的产品，因此生产优良的菌种 是食用菌栽培的一个极其重要的环节。 二、菌种的类型 根据菌种的来源、繁殖代数及生产目的，把菌种分为母钟、原种和栽培种 1、母种：从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。生产上用的母种 实际上是再生母种，又称一级菌种。 母种既可繁殖原种，又适于菌种保藏。 2、原种：将线种在无菌的条件下移接到粪草、木屑、棉籽壳或谷粒等固体培 养基一培养的菌种。又称二级菌种或瓶装菌种。 原种主要用于菌种的扩大培养，有时也可以直接出菇 3、栽培种：将二级种转接到相同或相似的培养基上进行扩大培育，用于生产 上的菌种。又称三级菌种或袋装菌种。 栽培种一般不用于再扩大繁殖菌种。 5 ※<标题二> 第二节 食用菌制种的条件 一、食用菌制种程序 食用菌生产就是指在严格的无菌条件下大量培养繁殖菌种的过程，一般食用 菌制种都需要经过母种、原种和栽培种三个培养步骤。 菌种生产流程 菌种 母种 原种 栽培种 又称 一级种、试管种、 斜面种 二级种、瓶装 种 三级种、袋装 种、生产种 培养容 器 试管 菌种瓶 塑料袋、菌种瓶 培养基 斜面 固体 固体 数量 少 不多 多 转接 1 支30 支（再生 母种） 1 支再生母 种8 瓶 1 瓶20 袋（瓶） 二、制种设备和条件 （一）机械设备
第四章 食用菌菌种生产 俗话说：“母壮儿肥”，好种是保证丰产、丰收的基础。 第一节食用菌菌种概述 一、菌种的概念 指人工培养进行扩大繁殖和用于生产的纯菌丝体。 二、菌种重要性 菌种：食用菌生产中的“种子”，菌种质量的好坏直接影响栽培的成败和 产量的高低，只有优良的菌种才能获得高产和优质的产品，因此生产优良的菌种 是食用菌栽培的一个极其重要的环节。 二、菌种的类型 根据菌种的来源、繁殖代数及生产目的，把菌种分为母钟、原种和栽培种 1、母种：从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。生产上用的母种 实际上是再生母种，又称一级菌种。 母种既可繁殖原种，又适于菌种保藏。 2、原种：将线种在无菌的条件下移接到粪草、木屑、棉籽壳或谷粒等固体培 养基一培养的菌种。又称二级菌种或瓶装菌种。 原种主要用于菌种的扩大培养，有时也可以直接出菇 3、栽培种：将二级种转接到相同或相似的培养基上进行扩大培育，用于生产 上的菌种。又称三级菌种或袋装菌种。 栽培种一般不用于再扩大繁殖菌种。 5 ※<标题二> 第二节 食用菌制种的条件 一、食用菌制种程序 食用菌生产就是指在严格的无菌条件下大量培养繁殖菌种的过程，一般食用 菌制种都需要经过母种、原种和栽培种三个培养步骤。 菌种生产流程 菌种 母种 原种 栽培种 又称 一级种、试管种、 斜面种 二级种、瓶装 种 三级种、袋装 种、生产种 培养容 器 试管 菌种瓶 塑料袋、菌种瓶 培养基 斜面 固体 固体 数量 少 不多 多 转接 1 支30 支（再生 母种） 1 支再生母 种8 瓶 1 瓶20 袋（瓶） 二、制种设备和条件 （一）机械设备
1、原料加工设备 枝材切片机、木片粉碎机 2、拌料分装设备 搅拌机、装瓶机 or 装袋机 （二）灭菌设备 1、灭菌设备 高压灭菌锅、常压灭菌灶 2、消毒条件 药剂、紫外灯、电子灭菌器等 （三）接种设备 1、接种条件 接种室——无菌室，4-8m2，缓冲间，紫外灯 2、接种设备 超净工作台 or 接种箱、接种工具、酒精灯 （四）培养设备 1、培养条件 菌种培养室 2、培养设备 恒温培养箱 （五）保藏设备 1、冰箱冷藏室 2、冷藏恒温库 5 ※<标题三> 第三节 食用菌菌种培养基 一、培养基 就是采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质以供给食用菌生长繁 殖的基质。 培养基必须具备三个条件： 第一：含有该菌生长发育所需的营养物质。 第二：具有一定的生长环境。 第三：必须经过严格的灭菌，保持无菌状态。 （一）物理状态 1、液体培养基：是指把食用菌生长发育所需的营养物质按一定比例加水配 制而成的液体培养基。营养成分分布均匀，有利于食用菌充分接触和吸收养料， 因而菌丝体生长迅速而粗壮，同时这种液体菌种便于接种工作的机械化、自动化， 有利于提高生产效率。 缺点：是要发酵设备，成本较高，也较复杂。液体培养基常用来观察菌种的
1、原料加工设备 枝材切片机、木片粉碎机 2、拌料分装设备 搅拌机、装瓶机 or 装袋机 （二）灭菌设备 1、灭菌设备 高压灭菌锅、常压灭菌灶 2、消毒条件 药剂、紫外灯、电子灭菌器等 （三）接种设备 1、接种条件 接种室——无菌室，4-8m2，缓冲间，紫外灯 2、接种设备 超净工作台 or 接种箱、接种工具、酒精灯 （四）培养设备 1、培养条件 菌种培养室 2、培养设备 恒温培养箱 （五）保藏设备 1、冰箱冷藏室 2、冷藏恒温库 5 ※<标题三> 第三节 食用菌菌种培养基 一、培养基 就是采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质以供给食用菌生长繁 殖的基质。 培养基必须具备三个条件： 第一：含有该菌生长发育所需的营养物质。 第二：具有一定的生长环境。 第三：必须经过严格的灭菌，保持无菌状态。 （一）物理状态 1、液体培养基：是指把食用菌生长发育所需的营养物质按一定比例加水配 制而成的液体培养基。营养成分分布均匀，有利于食用菌充分接触和吸收养料， 因而菌丝体生长迅速而粗壮，同时这种液体菌种便于接种工作的机械化、自动化， 有利于提高生产效率。 缺点：是要发酵设备，成本较高，也较复杂。液体培养基常用来观察菌种的
培养特征以及检查菌种的污染情况。 用途：实验室，用于生理生化方面的研究；生产上，用于培养液体菌种或生 产菌丝体及其代谢产物。 2、固体培养基：是以含有纤维素、木质素、淀粉等各种碳源物质为主， 添加适量有机氮源、无机盐等，含有一定水分呈现固体状态的培养基。 优点：原料来源广泛，价格低廉，配制容易，营养丰富。 缺点：菌丝体生长较慢。 用途：是食用菌原种和栽培种的主要培养基。 3、固化培养基：是指将各种营养物质按比例配制成营养液后，再加入适量的 凝固剂，如 2%左右的琼脂，加热至 60℃以上是液体，冷却到 40℃以下时则为固 体。 用途：主要用于母种的分离和保藏。 （二）营养来源 （1）天然培养基（利用天然来源的有机物配制而成。） （2）合成培养基（由各种纯化学物质按一定比例配制而成。） （3）半合成培养基（由部分纯化学物质和部分天然物质配制而成。） （三）表面形式 （1）斜面培养基 （2）平面培养基 （3）高层培养基 （四）用途 （1）母种培养基 （2）原种培养基 （3）栽培种培养基 二、母种常用培养基 （一）母种培养基常用物质 马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂、维生素 B1等。 马铃薯 葡萄糖 磷酸二氢钾 硫酸镁 琼脂 （二）常见的母种培养基 1、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、琼脂 18-20g、 水 1000ml。 2、马铃薯综合培养基：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、磷酸二氢钾 3g、硫酸镁 1.5g、琼脂 18-20g、维生素 B110mg、水 1000ml。 3、木屑浸出汁培养基 4、棉籽壳煮汁培养基 5、豆芽汁培养基等等 （三）母种斜面培养基的制作
培养特征以及检查菌种的污染情况。 用途：实验室，用于生理生化方面的研究；生产上，用于培养液体菌种或生 产菌丝体及其代谢产物。 2、固体培养基：是以含有纤维素、木质素、淀粉等各种碳源物质为主， 添加适量有机氮源、无机盐等，含有一定水分呈现固体状态的培养基。 优点：原料来源广泛，价格低廉，配制容易，营养丰富。 缺点：菌丝体生长较慢。 用途：是食用菌原种和栽培种的主要培养基。 3、固化培养基：是指将各种营养物质按比例配制成营养液后，再加入适量的 凝固剂，如 2%左右的琼脂，加热至 60℃以上是液体，冷却到 40℃以下时则为固 体。 用途：主要用于母种的分离和保藏。 （二）营养来源 （1）天然培养基（利用天然来源的有机物配制而成。） （2）合成培养基（由各种纯化学物质按一定比例配制而成。） （3）半合成培养基（由部分纯化学物质和部分天然物质配制而成。） （三）表面形式 （1）斜面培养基 （2）平面培养基 （3）高层培养基 （四）用途 （1）母种培养基 （2）原种培养基 （3）栽培种培养基 二、母种常用培养基 （一）母种培养基常用物质 马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂、维生素 B1等。 马铃薯 葡萄糖 磷酸二氢钾 硫酸镁 琼脂 （二）常见的母种培养基 1、马铃薯葡萄糖培养基（PDA 培养基）：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、琼脂 18-20g、 水 1000ml。 2、马铃薯综合培养基：马铃薯 200g、葡萄糖 20g、磷酸二氢钾 3g、硫酸镁 1.5g、琼脂 18-20g、维生素 B110mg、水 1000ml。 3、木屑浸出汁培养基 4、棉籽壳煮汁培养基 5、豆芽汁培养基等等 （三）母种斜面培养基的制作
1、称取 用天平称取培养基各种成分的用量。2、配制溶液 为避免发生沉淀，加入的顺序一般是先加缓冲化合物，溶解后加入主要元素， 然后是微量元素，再加入维生素等。最好是每种成分溶解后，再加入第二种营养 成分。若各种成分均不发生沉淀，也可以一起加入。 若用马铃薯、玉米粉、苹果、米粉、木屑等原料时，应先制取这些原料的煮 汁，然后再把煮汁与其它成分混合。 例如：PDA 培养基的配制 把选好的马铃薯洗净，去皮挖去芽眼，切成薄片或 1 厘米大小的方块，称取 200 克放在容器中，加水 1000 毫升，加热煮沸 20～30 分钟，至软而不烂的程度， 用四层纱布过滤；取其滤液。在滤液中加入琼脂，小火加热，用玻璃棒不断搅拌， 以防溢出或焦底，至琼脂全部溶化，再加入葡萄糖使其溶化，最后加水至 1000 毫升即成。3、调 pH 一般用 10％HCl 或 10％NaOH 调 pH，用 pH 试纸（或 pH 计）进行测试。 4、分装 培养基配制好后，趁热倒入大的玻璃漏斗中，打开弹簧夹，按需要分装于试管或三角瓶 内。 注意事项： （1）将漏斗导管插入试管中下部，以防培养基沾在管口或瓶口。 （2）分装体积：以试管总长的 1/4～1/5 为宜，三角瓶容量 1/3 为宜。 5、塞棉塞 这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发。制棉塞的方法多种， 形状各异，总原则如下： （1）用普通棉花制作。 （2）松紧适合。 （3）塞头不要太大，一般为球状。 （1）制作斜面培养基。一般斜面长度达试管长度的 1/2～2/3 为宜，待冷却后即成斜面 培养基。 （2）制作平板培养基。灭菌的三角瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中（每皿倒入 15～ 20 毫升），凝固后即成平板培养基。 8、无菌检查 取数支斜面培养基放人 28℃左右的恒温箱中培养 2～3 天，若无杂菌生长便 可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃冰箱保存。 6、灭菌 将包扎好的试管直立放人手提高压灭菌锅内，盖上牛皮纸，在 1.05kg/cm2 压力下，灭菌 30 分钟。 7、摆斜面 灭菌后冷却到 60℃左右，从锅内取出，趁热摆成斜面。（1）制作斜面培养基。 一般斜面长度达试管长度的 1/2～2/3 为宜，待冷却后即成斜面培养基。 （2）制作平板培养基。灭菌的三角瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中（每皿倒入 15～ 20 毫升），凝固后即成平板培养基
1、称取 用天平称取培养基各种成分的用量。2、配制溶液 为避免发生沉淀，加入的顺序一般是先加缓冲化合物，溶解后加入主要元素， 然后是微量元素，再加入维生素等。最好是每种成分溶解后，再加入第二种营养 成分。若各种成分均不发生沉淀，也可以一起加入。 若用马铃薯、玉米粉、苹果、米粉、木屑等原料时，应先制取这些原料的煮 汁，然后再把煮汁与其它成分混合。 例如：PDA 培养基的配制 把选好的马铃薯洗净，去皮挖去芽眼，切成薄片或 1 厘米大小的方块，称取 200 克放在容器中，加水 1000 毫升，加热煮沸 20～30 分钟，至软而不烂的程度， 用四层纱布过滤；取其滤液。在滤液中加入琼脂，小火加热，用玻璃棒不断搅拌， 以防溢出或焦底，至琼脂全部溶化，再加入葡萄糖使其溶化，最后加水至 1000 毫升即成。3、调 pH 一般用 10％HCl 或 10％NaOH 调 pH，用 pH 试纸（或 pH 计）进行测试。 4、分装 培养基配制好后，趁热倒入大的玻璃漏斗中，打开弹簧夹，按需要分装于试管或三角瓶 内。 注意事项： （1）将漏斗导管插入试管中下部，以防培养基沾在管口或瓶口。 （2）分装体积：以试管总长的 1/4～1/5 为宜，三角瓶容量 1/3 为宜。 5、塞棉塞 这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发。制棉塞的方法多种， 形状各异，总原则如下： （1）用普通棉花制作。 （2）松紧适合。 （3）塞头不要太大，一般为球状。 （1）制作斜面培养基。一般斜面长度达试管长度的 1/2～2/3 为宜，待冷却后即成斜面 培养基。 （2）制作平板培养基。灭菌的三角瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中（每皿倒入 15～ 20 毫升），凝固后即成平板培养基。 8、无菌检查 取数支斜面培养基放人 28℃左右的恒温箱中培养 2～3 天，若无杂菌生长便 可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃冰箱保存。 6、灭菌 将包扎好的试管直立放人手提高压灭菌锅内，盖上牛皮纸，在 1.05kg/cm2 压力下，灭菌 30 分钟。 7、摆斜面 灭菌后冷却到 60℃左右，从锅内取出，趁热摆成斜面。（1）制作斜面培养基。 一般斜面长度达试管长度的 1/2～2/3 为宜，待冷却后即成斜面培养基。 （2）制作平板培养基。灭菌的三角瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中（每皿倒入 15～ 20 毫升），凝固后即成平板培养基
8、无菌检查 取数支斜面培养基放人 28℃左右的恒温箱中培养 2～3 天，若无杂菌生长便 可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃冰箱保存。 三、原种和栽培种常用的培养基 （一）常用的培养基 P42 1、棉籽壳培养基 棉籽壳 98%、蔗糖 1%、石膏粉 1%、加水调至 65%左右。 2、木屑培养基 木屑 78%、米糠或麸皮 20%、蔗糖 1%、石膏粉 1%、加水调至 50%～60%左右。 3、棉籽壳麦麸培养基 4、棉籽壳木屑培养基 （二）培养基的制作 1、称料 先称主料，再称辅料 2、拌料 3、调 pH 4、分装培养料 5、清洁瓶、袋外壁。 6、封口 7、灭菌 5 ※<标题四> 第四节 食用菌菌种分离 一、菌种分离方法 组织分离法（最常用的方法） 孢子分离法（不常用的方法） 基质分离法（没办法的办法） （一）组织分离法 1、概念 将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。 部分组织：子实体或菌核、菌索的任何一部分组织 2、特点： 属于无性繁殖，能保持原有菌株的优良种性。 方法简单易行，适用于所有伞菌及猴头菌。 若种菇感染病毒，不易脱毒。 （1）子实体组织分离法：他是采用子实体的任何一部分如菌盖、菌柄、菌褶、 菌肉进行组织培养，而形成菌丝体的方法。尽管子实体的任何一部分都能分离培 养出菌种，但是多年的实践经验表明，选用菌柄和菌褶交接处的菌肉最好。 子实体组织分离的方法和步骤：种菇的选择-→种菇的消毒-→切块接种-→ 培养纯化-→出菇试验→母种
8、无菌检查 取数支斜面培养基放人 28℃左右的恒温箱中培养 2～3 天，若无杂菌生长便 可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃冰箱保存。 三、原种和栽培种常用的培养基 （一）常用的培养基 P42 1、棉籽壳培养基 棉籽壳 98%、蔗糖 1%、石膏粉 1%、加水调至 65%左右。 2、木屑培养基 木屑 78%、米糠或麸皮 20%、蔗糖 1%、石膏粉 1%、加水调至 50%～60%左右。 3、棉籽壳麦麸培养基 4、棉籽壳木屑培养基 （二）培养基的制作 1、称料 先称主料，再称辅料 2、拌料 3、调 pH 4、分装培养料 5、清洁瓶、袋外壁。 6、封口 7、灭菌 5 ※<标题四> 第四节 食用菌菌种分离 一、菌种分离方法 组织分离法（最常用的方法） 孢子分离法（不常用的方法） 基质分离法（没办法的办法） （一）组织分离法 1、概念 将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。 部分组织：子实体或菌核、菌索的任何一部分组织 2、特点： 属于无性繁殖，能保持原有菌株的优良种性。 方法简单易行，适用于所有伞菌及猴头菌。 若种菇感染病毒，不易脱毒。 （1）子实体组织分离法：他是采用子实体的任何一部分如菌盖、菌柄、菌褶、 菌肉进行组织培养，而形成菌丝体的方法。尽管子实体的任何一部分都能分离培 养出菌种，但是多年的实践经验表明，选用菌柄和菌褶交接处的菌肉最好。 子实体组织分离的方法和步骤：种菇的选择-→种菇的消毒-→切块接种-→ 培养纯化-→出菇试验→母种