生物化学重点 第一章绪论 生物化学的的概念 生物化学( biochem stry)是利用化学的原理与方法去探讨生命的一门科学,它是介于化学、生物学及物理学之 间的一门边缘学科 、生物化学的发展 1.叙述生物化学阶段:是生物化学发展的萌芽阶段,其主要的工作是分析和研究生物体的组成成分以及生物体 的分泌物和排泄物 2.动态生物化学阶段:是生物化学蓬勃发展的时期。就在这一时期,人们基本上弄清了生物体内各种主要化学 物质的代谢途径 3.分子生物学阶段:这一阶段的主要研究工作就是探讨各种生物大分子的结构与其功能之间的关系。 三、生物化学研究的主要方面: 1.生物体的物质组成:高等生物体主要由蛋白质、核酸、糖类、脂类以及水、无机盐等组成,此外还含有一些 低分子物质 2.物质代谢:物质代谢的基本过程主要包括三大步骤:消化、吸收→中间代谢→排泄。其中,中间代谢过程是 在细胞内进行的,最为复杂的化学变化过程,它包括合成代谢,分解代谢,物质互变,代谢调控,能量代谢几方 面的内容。 3.细胞信号转导:细胞内存在多条信号转导途径,而这些途径之间通过一定的方式方式相互交织在一起,从而 构成了非常复杂的信号转导网络,调控细胞的代谢、生理活动及生长分化。 4.生物分子的结构与功能:通过对生物大分子结构的理解,揭示结构与功能之间的关系。 5.遗传与繁殖:对生物体遗传与繁殖的分子机制的研究,也是现代生物化学与分子生物学研究的一个重要内容 第二章蛋白质的结构与功能 氨基酸 1.结构特点:氨基酸( am ino acid)是蛋白质分子的基本组成单位。构成天然蛋白质分子的氨基酸约有20种 除脯氨酸为α-亚氨基酸、甘氨酸不含手性碳原子外,其余氨基酸均为L-α-氨基酸 2.分类:根据氨基酸的R基团的极性大小可将氨基酸分为四类:①非极性中性氨基酸(8种):②极性中性氨 基酸(7种):③酸性氨基酸(Gu和Asp):④碱性氨基酸(Lys、Arg和His) 二、肽键与肽链 肽键( peptide bond)是指由一分子氨基酸的a-羧基与另一分子氨基酸的a-氨基经脱水而形成的共价键 (-CO-NH-)。氨基酸分子在参与形成肽键之后,由于脱水而结构不完整,称为氨基酸残基。每条多肽链都有两端: 即自由氨基端(N端)与自由羧基端(C端),肽链的方向是N端→C端 三、肽键平面(肽单位) 肽键具有部分双键的性质,不能自由旋转:组成肽键的四个原子及其相邻的两个a碳原子处在同一个平面上,为 刚性平面结构,称为肽键平面 四、蛋白质的分子结构: 蛋白质的分子结构可人为分为一级、二级、三级和四级结构等层次。一级结构为线状结构,二、三、四级结构为 空间结构
1 生物化学重点 第一章 绪论 一、生物化学的的概念： 生物化学（biochemistry)是利用化学的原理与方法去探讨生命的一门科学，它是介于化学、生物学及物理学之 间的一门边缘学科。 二、生物化学的发展： 1．叙述生物化学阶段：是生物化学发展的萌芽阶段，其主要的工作是分析和研究生物体的组成成分以及生物体 的分泌物和排泄物。 2．动态生物化学阶段：是生物化学蓬勃发展的时期。就在这一时期，人们基本上弄清了生物体内各种主要化学 物质的代谢途径。 3．分子生物学阶段：这一阶段的主要研究工作就是探讨各种生物大分子的结构与其功能之间的关系。 三、生物化学研究的主要方面： 1．生物体的物质组成：高等生物体主要由蛋白质、核酸、糖类、脂类以及水、无机盐等组成，此外还含有一些 低分子物质。 2．物质代谢：物质代谢的基本过程主要包括三大步骤：消化、吸收→中间代谢→排泄。其中，中间代谢过程是 在细胞内进行的，最为复杂的化学变化过程，它包括合成代谢，分解代谢，物质互变，代谢调控，能量代谢几方 面的内容。 3．细胞信号转导：细胞内存在多条信号转导途径，而这些途径之间通过一定的方式方式相互交织在一起，从而 构成了非常复杂的信号转导网络，调控细胞的代谢、生理活动及生长分化。 4．生物分子的结构与功能：通过对生物大分子结构的理解，揭示结构与功能之间的关系。 5．遗传与繁殖：对生物体遗传与繁殖的分子机制的研究，也是现代生物化学与分子生物学研究的一个重要内容。 第二章 蛋白质的结构与功能 一、氨基酸： 1．结构特点：氨基酸(amino acid)是蛋白质分子的基本组成单位。构成天然蛋白质分子的氨基酸约有 20 种， 除脯氨酸为 α-亚氨基酸、甘氨酸不含手性碳原子外，其余氨基酸均为 L-α-氨基酸。 2．分类：根据氨基酸的 R 基团的极性大小可将氨基酸分为四类：① 非极性中性氨基酸(8 种)；② 极性中性氨 基酸(7 种)；③ 酸性氨基酸(Glu 和 Asp)；④ 碱性氨基酸(Lys、Arg 和 His)。 二、 肽键与肽链： 肽键(peptide bond)是指由一分子氨基酸的 α-羧基与另一分子氨基酸的 α-氨基经脱水而形成的共价键 (-CO-NH-)。氨基酸分子在参与形成肽键之后，由于脱水而结构不完整，称为氨基酸残基。每条多肽链都有两端： 即自由氨基端(N 端)与自由羧基端(C 端)，肽链的方向是 N 端→C 端。 三、肽键平面(肽单位)： 肽键具有部分双键的性质，不能自由旋转；组成肽键的四个原子及其相邻的两个 α 碳原子处在同一个平面上，为 刚性平面结构，称为肽键平面。 四、蛋白质的分子结构： 蛋白质的分子结构可人为分为一级、二级、三级和四级结构等层次。一级结构为线状结构，二、三、四级结构为 空间结构
1.一级结构:指多肽链中氨基酸的排列顺序,其维系键是肽键。蛋白质的一级结构决定其空间结构。 2.二级结构:指多肽链主链骨架盘绕折叠而形成的构象,借氢键维系。主要有以下几种类型: 1]a-螺旋:其结构特征为:①主链骨架围绕中心轴盘绕形成右手螺旋;②螺旋每上升一圈是3.6个氨基酸残基, 螺距为0.54nm:③相邻螺旋圈之间形成许多氢键:④侧链基团位于螺旋的外侧 影响α-螺旋形成的因素主要是:①存在侧链基团较大的氨基酸残基:②连续存在带相同电荷的氨基酸残基 ③存在脯氨酸残基 折叠:其结构特征为:①若干条肽链或肽段平行或反平行排列成片:②所有肽键的C=O和N一H形成链 间氢键:③侧链基团分别交替位于片层的上、下方 3)β-转角:多肽链180°回折部分,通常由四个氨基酸残基构成,借1、4残基之间形成氢键维系 4)无规卷曲:主链骨架无规律盘绕的部分 3.三级结构:指多肽链所有原子的空间排布。其维系键主要是非共价键(次级键):氢键、疏水键、范德华力 离子键等,也可涉及二硫键。 4.四级结构:指亚基之间的立体排布、接触部位的布局等,其维系键为非共价键。亚基是指参与构成蛋白质四 级结构的而又具有独立三级结构的多肽链。 五、蛋白质的理化性质: 1.两性解离与等电点:蛋白质分子中仍然存在游离的氨基和游离的羧基,因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解 离的性质。蛋白质分子所带正、负电荷相等时溶液的pH值称为蛋白质的等电点 2.蛋白质的胶体性质:蛋白质具有亲水溶胶的性质。蛋白质分子表面的水化膜和表面电荷是稳定蛋白质亲水溶 胶的两个重要因素。 3.蛋白质的紫外吸收:蛋白质分子中的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基对紫外光有吸收,以色氨酸吸收最强, 最大吸收峰为280nm。 4.蛋白质的变性:蛋白质在某些理化因素的作用下,其特定的空间结构被破坏而导致其理化性质改变及生物活 性丧失,这种现象称为蛋白质的变性。引起蛋白质变性的因素有:高温、高压、电离辐射、超声波、紫外线及有 机溶剂、重金属盐、强酸强碱等。绝大多数蛋白质分子的变性是不可逆的 六、蛋白质的分离与纯化 1.盐析与有机溶剂沉淀:在蛋白质溶液中加入大量中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质从溶液中沉淀 析出,称为盐析。常用的中性盐有:硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。盐析时,溶液的pH在蛋白质的等电点处效果 最好。凡能与水以任意比例混合的有机溶剂,如乙醇、甲醇、丙酮等,均可引起蛋白质沉淀。 2.电泳:蛋白质分子在高于或低于其pI的溶液中带净的负或正电荷,因此在电场中可以移动。电泳迁移率的大 小主要取决于蛋白质分子所带电荷量以及分子大小。 3.透析:利用透析袋膜的超滤性质,可将大分子物质与小分子物质分离开。 4.层析:利用混合物中各组分理化性质的差异,在相互接触的两相(固定相与流动相)之间的分布不同而进行 分离。主要有离子交换层析,凝胶层析,吸附层析及亲和层析等,其中凝胶层析可用于测定蛋白质的分子量 5.超速离心:利用物质密度的不同,经超速离心后,分布于不同的液层而分离。超速离心也可用来测定蛋白质 的分子量,蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比 七、氨基酸顺序分析: 蛋白质多肽链的氨基酸顺序分析,即蛋白质一级结构的测定,主要有以下几个步骤 1.分离纯化蛋白质,得到一定量的蛋白质纯品: 2.取一定量的样品进行完全水解,再测定蛋白质的氨基酸组成 3.分析蛋白质的N-端和C-端氨基酸 4.采用特异性的酶(如胰凝乳蛋白酶)或化学试剂(如溴化氰)将蛋白质处理为若干条肽段
2 1．一级结构：指多肽链中氨基酸的排列顺序，其维系键是肽键。蛋白质的一级结构决定其空间结构。 2．二级结构：指多肽链主链骨架盘绕折叠而形成的构象，借氢键维系。主要有以下几种类型： ⑴α-螺旋：其结构特征为：①主链骨架围绕中心轴盘绕形成右手螺旋；②螺旋每上升一圈是 3.6 个氨基酸残基， 螺距为 0.54nm；③ 相邻螺旋圈之间形成许多氢键；④ 侧链基团位于螺旋的外侧。 影响 α-螺旋形成的因素主要是：① 存在侧链基团较大的氨基酸残基；② 连续存在带相同电荷的氨基酸残基； ③ 存在脯氨酸残基。 ⑵β-折叠：其结构特征为：① 若干条肽链或肽段平行或反平行排列成片；② 所有肽键的 C=O 和 N—H 形成链 间氢键；③侧链基团分别交替位于片层的上、下方。 ⑶β-转角：多肽链 180°回折部分，通常由四个氨基酸残基构成，借 1、4 残基之间形成氢键维系。 ⑷无规卷曲：主链骨架无规律盘绕的部分。 3．三级结构：指多肽链所有原子的空间排布。其维系键主要是非共价键（次级键）：氢键、疏水键、范德华力、 离子键等，也可涉及二硫键。 4．四级结构：指亚基之间的立体排布、接触部位的布局等，其维系键为非共价键。亚基是指参与构成蛋白质四 级结构的而又具有独立三级结构的多肽链。 五、 蛋白质的理化性质： 1．两性解离与等电点：蛋白质分子中仍然存在游离的氨基和游离的羧基，因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解 离的性质。蛋白质分子所带正、负电荷相等时溶液的 pH 值称为蛋白质的等电点。 2．蛋白质的胶体性质：蛋白质具有亲水溶胶的性质。蛋白质分子表面的水化膜和表面电荷是稳定蛋白质亲水溶 胶的两个重要因素。 3．蛋白质的紫外吸收：蛋白质分子中的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基对紫外光有吸收，以色氨酸吸收最强， 最大吸收峰为 280nm。 4．蛋白质的变性：蛋白质在某些理化因素的作用下，其特定的空间结构被破坏而导致其理化性质改变及生物活 性丧失，这种现象称为蛋白质的变性。引起蛋白质变性的因素有：高温、高压、电离辐射、超声波、紫外线及有 机溶剂、重金属盐、强酸强碱等。绝大多数蛋白质分子的变性是不可逆的。 六、蛋白质的分离与纯化： 1．盐析与有机溶剂沉淀：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀 析出，称为盐析。常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。盐析时，溶液的 pH 在蛋白质的等电点处效果 最好。凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可引起蛋白质沉淀。 2．电泳：蛋白质分子在高于或低于其 pI 的溶液中带净的负或正电荷，因此在电场中可以移动。电泳迁移率的大 小主要取决于蛋白质分子所带电荷量以及分子大小。 3．透析：利用透析袋膜的超滤性质，可将大分子物质与小分子物质分离开。 4．层析：利用混合物中各组分理化性质的差异，在相互接触的两相（固定相与流动相）之间的分布不同而进行 分离。主要有离子交换层析，凝胶层析，吸附层析及亲和层析等，其中凝胶层析可用于测定蛋白质的分子量。 5．超速离心：利用物质密度的不同，经超速离心后，分布于不同的液层而分离。超速离心也可用来测定蛋白质 的分子量，蛋白质的分子量与其沉降系数 S 成正比。 七、氨基酸顺序分析： 蛋白质多肽链的氨基酸顺序分析，即蛋白质一级结构的测定，主要有以下几个步骤： 1. 分离纯化蛋白质，得到一定量的蛋白质纯品； 2. 取一定量的样品进行完全水解，再测定蛋白质的氨基酸组成； 3. 分析蛋白质的 N-端和 C-端氨基酸； 4. 采用特异性的酶（如胰凝乳蛋白酶）或化学试剂（如溴化氰）将蛋白质处理为若干条肽段；
5.分离纯化单一肽段: 6.测定各条肽段的氨基酸顺序。一般采用 Edm an降解法,用异硫氰酸苯酯进行反应,将氨基酸降解后,逐一 进行测定: 7.至少用两种不同的方法处理蛋白质,分别得到其肽段的氨基酸顺序: 8.将两套不同肽段的氨基酸顺序进行比较,以获得完整的蛋白质分子的氨基酸顺序。 第三章核酸的结构与功能 核酸的化学组成 1.含氮碱:参与核酸和核苷酸构成的含氮碱主要分为嘌呤碱和嘧啶碱两大类。组成核苷酸的嘧啶碱主要有三种 尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T),它们都是嘧啶的衍生物。组成核苷酸的嘌呤碱主要有两种· 腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G),它们都是嘌呤的衍生物。 2.戊糖:核苷酸中的戊糖主要有两种,即β-D-核糖与β-D-2-脱氧核糖,由此构成的核苷酸也分为核糖核苷酸 与脱氧核糖核酸两大类 3.核苷:核苷是由戊糖与含氮碱基经脱水缩合而生成的化合物。通常是由核糖或脱氧核糖的C1′β-羟基与嘧啶 碱N或嘌呤碱N9进行缩合,故生成的化学键称为β,N糖苷键。其中由D-核糖生成者称为核糖核苷,而由脱 氧核糖生成者则称为脱氧核糖核苷。由”稀有碱基”所生成的核苷称为稀有核苷”。假尿苷()就是由D-核糖的 C1′与尿嘧啶的C5相连而生成的核苷。 、核苷酸的结构与命名 核苷酸是由核苷与磷酸经脱水缩合后生成的磷酸酯类化合物,包括核糖核苷酸和脱氧核糖核酸两大类。最常 见的核苷酸为5′-核苷酸(5′常被省略)。5′核苷酸又可按其在5'位缩合的磷酸基的多少,分为一磷酸核苷(核 苷酸)、二磷酸核苷和三磷酸核苷。 此外,生物体内还存在一些特殊的环核苷酸,常见的为环一磷酸腺苷(CAMP)和环一磷酸鸟苷(cGMP), 它们通常是作为激素作用的第二信使。 核苷酸通常使用缩写符号进行命名。第一位符号用小写字母d代表脱氧,第二位用大写字母代表碱基,第三 位用大写字母代表磷酸基的数目,第四位用大写字母P代表磷酸。 核酸的一级结构 核苷酸通过3′5′-磷酸二酯键连接起来形成的不含侧链的多核苷酸长链化合物就称为核酸。核酸具有方向性 5′-位上具有自由磷酸基的末端称为5′-端,3′-位上具有自由羟基的末端称为3-端 DNA由dAMP、dGMP、dCMP和dTMP四种脱氧核糖核苷酸所组成。DNA的一级结构就是指DNA分子 中脱氧核糖核苷酸的种类、数目、排列顺序及连接方式。RNA由AMP,GMP,CMP,UMP四种核糖核苷酸组 成。RNA的一级结构就是指RNA分子中核糖核苷酸的种类、数目、排列顺序及连接方式 四、DNA的二级结构 DNA双螺旋结构是DNA二级结构的一种重要形式,它是 Watson和 Crick两位科学家于1953年提出来 的一种结构模型,其主要实验依据是 Chargaff研究小组对DNA的化学组成进行的分析研究,即DNA分子中四 种碱基的摩尔百分比为A=T、G=C、A+G=T+C( Chargaff原则),以及由 Wilkins研究小组完成的DNA晶 体Ⅹ线衍射图谱分析 天然DNA的二级结构以B型为主,其结构特征为:①为右手双螺旋,两条链以反平行方式排列:②主链 位于螺旋外侧,碱基位于内侧:③两条链间存在碱基互补,通过氢键连系,且AT、G-C(碱基互补原则):④ 螺旋的稳定因素为氢键和碱基堆砌力:⑤螺旋的螺距为3.4ηm,直径为2nm 五、DNA的超螺旋结构
3 5. 分离纯化单一肽段； 6. 测定各条肽段的氨基酸顺序。一般采用 Edman 降解法，用异硫氰酸苯酯进行反应，将氨基酸降解后，逐一 进行测定； 7. 至少用两种不同的方法处理蛋白质，分别得到其肽段的氨基酸顺序； 8. 将两套不同肽段的氨基酸顺序进行比较，以获得完整的蛋白质分子的氨基酸顺序。 第三章 核酸的结构与功能 一、核酸的化学组成： 1．含氮碱：参与核酸和核苷酸构成的含氮碱主要分为嘌呤碱和嘧啶碱两大类。组成核苷酸的嘧啶碱主要有三种 ——尿嘧啶（U）、胞嘧啶（C）和胸腺嘧啶（T），它们都是嘧啶的衍生物。组成核苷酸的嘌呤碱主要有两种—— 腺嘌呤（A）和鸟嘌呤（G），它们都是嘌呤的衍生物。 2．戊糖：核苷酸中的戊糖主要有两种，即 β-D-核糖与 β-D-2-脱氧核糖，由此构成的核苷酸也分为核糖核苷酸 与脱氧核糖核酸两大类。 3．核苷：核苷是由戊糖与含氮碱基经脱水缩合而生成的化合物。通常是由核糖或脱氧核糖的 C1’ β-羟基与嘧啶 碱 N1 或嘌呤碱 N9 进行缩合，故生成的化学键称为 β，N 糖苷键。其中由 D-核糖生成者称为核糖核苷，而由脱 氧核糖生成者则称为脱氧核糖核苷。由“稀有碱基”所生成的核苷称为“稀有核苷”。假尿苷（ψ）就是由 D-核糖的 C1’ 与尿嘧啶的 C5 相连而生成的核苷。 二、核苷酸的结构与命名： 核苷酸是由核苷与磷酸经脱水缩合后生成的磷酸酯类化合物，包括核糖核苷酸和脱氧核糖核酸两大类。最常 见的核苷酸为 5’-核苷酸（5’ 常被省略）。5’-核苷酸又可按其在 5’位缩合的磷酸基的多少，分为一磷酸核苷（核 苷酸）、二磷酸核苷和三磷酸核苷。 此外，生物体内还存在一些特殊的环核苷酸，常见的为环一磷酸腺苷（cAMP）和环一磷酸鸟苷（cGMP）， 它们通常是作为激素作用的第二信使。 核苷酸通常使用缩写符号进行命名。第一位符号用小写字母 d 代表脱氧，第二位用大写字母代表碱基，第三 位用大写字母代表磷酸基的数目，第四位用大写字母 P 代表磷酸。 三、核酸的一级结构： 核苷酸通过 3’,5’-磷酸二酯键连接起来形成的不含侧链的多核苷酸长链化合物就称为核酸。核酸具有方向性， 5’-位上具有自由磷酸基的末端称为 5’-端，3’-位上具有自由羟基的末端称为 3’-端。 DNA 由 dAMP、dGMP、dCMP 和 dTMP 四种脱氧核糖核苷酸所组成。DNA 的一级结构就是指 DNA 分子 中脱氧核糖核苷酸的种类、数目、排列顺序及连接方式。RNA 由 AMP，GMP，CMP，UMP 四种核糖核苷酸组 成。RNA 的一级结构就是指 RNA 分子中核糖核苷酸的种类、数目、排列顺序及连接方式。 四、DNA 的二级结构： DNA 双螺旋结构是 DNA 二级结构的一种重要形式，它是 Watson 和 Crick 两位科学家于 1953 年提出来 的一种结构模型，其主要实验依据是 Chargaff 研究小组对 DNA 的化学组成进行的分析研究，即 DNA 分子中四 种碱基的摩尔百分比为 A=T、G=C、A+G=T+C（Chargaff 原则），以及由 Wilkins 研究小组完成的 DNA 晶 体 X 线衍射图谱分析。 天然 DNA 的二级结构以 B 型为主，其结构特征为：①为右手双螺旋，两条链以反平行方式排列；②主链 位于螺旋外侧，碱基位于内侧；③两条链间存在碱基互补，通过氢键连系，且 A-T、G-C（碱基互补原则）； ④ 螺旋的稳定因素为氢键和碱基堆砌力；⑤螺旋的螺距为 3.4nm，直径为 2nm。 五、DNA 的超螺旋结构：
双螺旋的DNA分子进一步盘旋形成的超螺旋结构称为DNA的三级结构。 绝大多数原核生物的DNA都是共价封闭的环状双螺旋,其三级结构呈麻花状。 在真核生物中,双螺旋的DNA分子围绕一蛋白质八聚体进行盘绕,从而形成特殊的串珠状结构,称为核小体 核小体结构属于DNA的三级结构 六、DNA的功能 DNA的基本功能是作为遗传信息的载体,为生物遗传信息复制以及基因信息的转录提供模板。 DNA分子中具有特定生物学功能的片段称为基因(gene)。一个生物体的全部DNA序列称为基因组 ( genome)。基因组的大小与生物的复杂性有关 七、RNA的空间结构与功能 RNA分子的种类较多,分子大小变化较大,功能多样化。RNA通常以单链存在,但也可形成局部的双螺旋 结构 1.mRNA的结构与功能:mRNA是单链核酸,其在真核生物中的初级产物称为 HnRNA。大多数真核成熟的 mRNA分子具有典型的5′-端的7甲基鸟苷三磷酸(m7GTP)帽子结构和3′-端的多聚腺苷酸( polyA)尾巴结构 mRNA的功能是为蛋白质的合成提供模板,分子中带有遗传密码。mRNA分子中每三个相邻的核苷酸组成一组, 在蛋白质翻译合成时代表一个特定的氨基酸,这种核苷酸三联体称为遗传密码( coden)。 2.tRNA的结构与功能:tRNA是分子最小,但含有稀有碱基最多的RNA。tRNA的二级结构由于局部双螺旋 的形成而表现为”三叶草形,故称为”三叶草”结构,可分为五个部分:①氨基酸臂:由tRNA的5′-端和3-端构 成的局部双螺旋,3′-端都带有-CCA-OH顺序,可与氨基酸结合而携带氨基酸。②DHU臂:含有二氢尿嘧啶核 苷,与氨基酰tRNA合成酶的结合有关。③反密码臂:其反密码环中部的三个核苷酸组成三联体,在蛋白质生物 合成中,可以用来识别mRNA上相应的密码,故称为反密码( anticodon)。④TC臂:含保守的TuC顺序, 可以识别核蛋白体上的rRNA,促使tRNA与核蛋白体结合。⑤可变臂:位于TψC臂和反密码臂之间,功能不 3.rRNA的结构与功能:rRNA是细胞中含量最多的RNA,可与蛋白质一起构成核蛋白体,作为蛋白质生物合 成的场所。原核生物中的rRNA有三种:55,165,235。真核生物中的rRNA有四种:5s,5.8s,18s,28s 具有自身催化作用的RNA称为核酶( ribozyme),核酶通常具有特殊的分子结构,如锤头结构 九、核酸的一般理化性质: 核酸具有酸性:粘度大:能吸收紫外光,最大吸收峰为260nm 十、DNA的变性 在理化因素作用下,DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链,从而导致DNA的理化性质及生物学性 质发生改变,这种现象称为DNA的变性 引起DNA变性的因素主要有:①高温,②强酸强碱,③有机溶剂等。DNA变性后的性质改变:①增色效应: 指DNA变性后对260nm紫外光的光吸收度增加的现象:②旋光性下降:③粘度降低:④生物功能丧失或改变。 加热DNA溶液,使其对260nm紫外光的吸收度突然增加,达到其最大值一半时的温度,就是D№A的变 性温度(融解温度,Tm)。Tm的高低与DNA分子中G+C的含量有关,G+C的含量越高,则Tm越高。 十一、DNA的复性与分子杂交 将变性DNA经退火处理,使其重新形成双螺旋结构的过程,称为DNA的复性 条来源不同的单链核酸(DNA或RNA),只要它们有大致相同的互补碱基顺序,以退火处理即可复性
4 双螺旋的 DNA 分子进一步盘旋形成的超螺旋结构称为 DNA 的三级结构。 绝大多数原核生物的 DNA 都是共价封闭的环状双螺旋，其三级结构呈麻花状。 在真核生物中，双螺旋的 DNA 分子围绕一蛋白质八聚体进行盘绕，从而形成特殊的串珠状结构，称为核小体。 核小体结构属于 DNA 的三级结构。 六、DNA 的功能： DNA 的基本功能是作为遗传信息的载体，为生物遗传信息复制以及基因信息的转录提供模板。 DNA 分子中具有特定生物学功能的片段称为基因（gene）。一个生物体的全部 DNA 序列称为基因组 （genome）。基因组的大小与生物的复杂性有关。 七、RNA 的空间结构与功能： RNA 分子的种类较多，分子大小变化较大，功能多样化。RNA 通常以单链存在，但也可形成局部的双螺旋 结构。 1．mRNA 的结构与功能：mRNA 是单链核酸，其在真核生物中的初级产物称为 HnRNA。大多数真核成熟的 mRNA 分子具有典型的 5’-端的 7-甲基鸟苷三磷酸（m7GTP）帽子结构和 3’-端的多聚腺苷酸(polyA)尾巴结构。 mRNA 的功能是为蛋白质的合成提供模板，分子中带有遗传密码。mRNA 分子中每三个相邻的核苷酸组成一组， 在蛋白质翻译合成时代表一个特定的氨基酸，这种核苷酸三联体称为遗传密码（coden）。 2．tRNA 的结构与功能：tRNA 是分子最小，但含有稀有碱基最多的 RNA。tRNA 的二级结构由于局部双螺旋 的形成而表现为“三叶草”形，故称为“三叶草”结构，可分为五个部分：①氨基酸臂：由 tRNA 的 5’-端和 3’-端构 成的局部双螺旋，3’-端都带有-CCA-OH 顺序，可与氨基酸结合而携带氨基酸。②DHU 臂：含有二氢尿嘧啶核 苷，与氨基酰 tRNA 合成酶的结合有关。③反密码臂：其反密码环中部的三个核苷酸组成三联体，在蛋白质生物 合成中，可以用来识别 mRNA 上相应的密码，故称为反密码（anticoden）。④ TψC 臂：含保守的 TψC 顺序， 可以识别核蛋白体上的 rRNA，促使 tRNA 与核蛋白体结合。⑤可变臂：位于 TψC 臂和反密码臂之间，功能不 详。 3．rRNA 的结构与功能：rRNA 是细胞中含量最多的 RNA，可与蛋白质一起构成核蛋白体，作为蛋白质生物合 成的场所。原核生物中的 rRNA 有三种：5S，16S，23S。真核生物中的 rRNA 有四种：5S，5.8S，18S，28S。 八、核酶： 具有自身催化作用的 RNA 称为核酶（ribozyme），核酶通常具有特殊的分子结构，如锤头结构。 九、核酸的一般理化性质： 核酸具有酸性；粘度大；能吸收紫外光，最大吸收峰为 260nm。 十、DNA 的变性： 在理化因素作用下，DNA 双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链，从而导致 DNA 的理化性质及生物学性 质发生改变，这种现象称为 DNA 的变性。 引起 DNA 变性的因素主要有：①高温，②强酸强碱，③有机溶剂等。DNA 变性后的性质改变：①增色效应： 指 DNA 变性后对 260nm 紫外光的光吸收度增加的现象；②旋光性下降；③粘度降低；④生物功能丧失或改变。 加热 DNA 溶液，使其对 260nm 紫外光的吸收度突然增加，达到其最大值一半时的温度，就是 DNA 的变 性温度（融解温度，Tm）。Tm 的高低与 DNA 分子中 G+C 的含量有关，G+C 的含量越高，则 Tm 越高。 十一、DNA 的复性与分子杂交： 将变性 DNA 经退火处理，使其重新形成双螺旋结构的过程，称为 DNA 的复性。 两条来源不同的单链核酸（DNA 或 RNA），只要它们有大致相同的互补碱基顺序，以退火处理即可复性
形成新的杂种双螺旋,这一现象称为核酸的分子杂交。核酸杂交可以是 DNA-DNA,也可以是DNA-RNA杂交 不同来源的,具有大致相同互补碱基顺序的核酸片段称为同源顺序。 常用的核酸分子杂交技术有:原位杂交、斑点杂交、 Southern杂交及 Northern杂交 在核酸杂交分析过程中,常将已知顺序的核酸片段用放射性同位素或生物素进行标记,这种带有一定标记 的己知顺序的核酸片段称为探针 十二、核酸酶 凡是能水解核酸的酶都称为核酸酶。凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶,凡能从多核 苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶。能识别特定的核苷酸顺序,并从特定位点水解核酸的内切酶称为 限制性核酸内切酶(限制酶) 第四章藤 酶的概念 酶( enzyme)是由活细胞产生的生物催化剂,这种催化剂具有极高的催化效率和高度的底物特异性,其化学本 质是蛋白质。酶按照其分子结构可分为单体酶、寡聚酶和多酶体系(多酶复合体和多功能酶)三大类 、酶的分子组成: 酶分子可根据其化学组成的不同,可分为单纯酶和结合酶(全酶)两类。结合酶则是由酶蛋白和辅助因子 部分构成,酶蛋白部分主要与酶的底物特异性有关,辅助因子则与酶的催化活性有关 与酶蛋白疏松结合并与酶的催化活性有关的耐热低分子有机化合物称为辅酶。与酶蛋白牢固结合并与酶的催 化活性有关的耐热低分子有机化合物称为辅基 三、辅酶与辅基的来源及其生理功用 辅酶与辅基的生理功用主要是:(1)运载氢原子或电子,参与氧化还原反应。(2)运载反应基团,如酰基、氨 基、烷基、羧基及一碳单位等,参与基团转移。大部分的辅酶与辅基衍生于维生素 维生素( vitam in)是指一类维持细胞正常功能所必需的,但在许多生物体内不能自身合成而必须由食物供给 的小分子有机化合物 维生素可按其溶解性的不同分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类。脂溶性维生素有VitA、VtD、Vit 和vtK四种:水溶性维生素有VtB1,VtB2, VitPP,VitB6,VtB12,VtC,泛酸,生物素,叶酸等。 1.TPP:即焦磷酸硫胺素,由硫胺素(tB1)焦磷酸化而生成,是脱羧酶的辅酶,在体内参与糖代谢过程中α 酮酸的氧化脱羧反应。 2.FMN和FAD:即黄素单核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD),是核黄素(VitB2)的衍生物。FMN 或FAD通常作为脱氢酶的辅基,在酶促反应中作为递氢体(双递氢体)。 3.NAD+和NADP+:即尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+,辅酶1)和尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+, 辅酶Ⅱ1),是VtPP的衍生物。NAD+和NADP+主要作为脱氢酶的辅酶,在酶促反应中起递氢体的作用,为单 递氢体。 4.磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺:是νtB6的衍生物。磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺可作为氨基转移酶,氨基酸脱羧酶 半胱氨酸脱硫酶等的辅酶 5.CoA:泛酸(遍多酸)在体内参与构成辅酶A(CoA)。CoA中的巯基可与羧基以高能硫酯键结合,在糖、脂 蛋白质代谢中起传递酰基的作用,是酰化酶的辅酶。 6.生物素:是羧化酶的辅基,在体内参与CO2的固定和羧化反应。 7.FH4:由叶酸衍生而来。四氢叶酸是体内一碳单位基团转移酶系统中的辅酶 8.VtB12衍生物:VtB12分子中含金属元素钴,故又称为钴胺素。VtB12在体内有多种活性形式,如5- 脱氧腺苷钻胺素、甲基钻胺素等。其中,5′-脱氧腺苷钻胺素参与构成变位酶的辅酶,甲基钻胺素则是甲基转移
5 形成新的杂种双螺旋，这一现象称为核酸的分子杂交。核酸杂交可以是 DNA-DNA，也可以是 DNA-RNA 杂交。 不同来源的，具有大致相同互补碱基顺序的核酸片段称为同源顺序。 常用的核酸分子杂交技术有：原位杂交、斑点杂交、Southern 杂交及 Northern 杂交等。 在核酸杂交分析过程中，常将已知顺序的核酸片段用放射性同位素或生物素进行标记，这种带有一定标记 的已知顺序的核酸片段称为探针。 十二、核酸酶： 凡是能水解核酸的酶都称为核酸酶。凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶，凡能从多核 苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶。能识别特定的核苷酸顺序，并从特定位点水解核酸的内切酶称为 限制性核酸内切酶（限制酶） 第四章 酶 一、酶的概念： 酶（enzyme）是由活细胞产生的生物催化剂，这种催化剂具有极高的催化效率和高度的底物特异性，其化学本 质是蛋白质。酶按照其分子结构可分为单体酶、寡聚酶和多酶体系（多酶复合体和多功能酶）三大类。 二、酶的分子组成： 酶分子可根据其化学组成的不同，可分为单纯酶和结合酶（全酶）两类。结合酶则是由酶蛋白和辅助因子两 部分构成，酶蛋白部分主要与酶的底物特异性有关，辅助因子则与酶的催化活性有关。 与酶蛋白疏松结合并与酶的催化活性有关的耐热低分子有机化合物称为辅酶。与酶蛋白牢固结合并与酶的催 化活性有关的耐热低分子有机化合物称为辅基。 三、辅酶与辅基的来源及其生理功用： 辅酶与辅基的生理功用主要是：⑴ 运载氢原子或电子，参与氧化还原反应。⑵ 运载反应基团，如酰基、氨 基、烷基、羧基及一碳单位等，参与基团转移。大部分的辅酶与辅基衍生于维生素。 维生素（vitamin)是指一类维持细胞正常功能所必需的，但在许多生物体内不能自身合成而必须由食物供给 的小分子有机化合物。 维生素可按其溶解性的不同分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类。脂溶性维生素有 VitA、VitD、VitE 和 VitK 四种；水溶性维生素有 VitB1，VitB2，VitPP，VitB6，VitB12，VitC，泛酸，生物素，叶酸等。 1.TPP：即焦磷酸硫胺素，由硫胺素（Vit B1）焦磷酸化而生成，是脱羧酶的辅酶，在体内参与糖代谢过程中 α- 酮酸的氧化脱羧反应。 2.FMN 和 FAD：即黄素单核苷酸（FMN）和黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD），是核黄素（VitB2）的衍生物。FMN 或 FAD 通常作为脱氢酶的辅基，在酶促反应中作为递氢体（双递氢体）。 3.NAD+和 NADP+：即尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+，辅酶Ⅰ）和尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+， 辅酶Ⅱ），是 Vit PP 的衍生物。NAD+和 NADP+主要作为脱氢酶的辅酶，在酶促反应中起递氢体的作用，为单 递氢体。 4.磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺：是 Vit B6 的衍生物。磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺可作为氨基转移酶，氨基酸脱羧酶， 半胱氨酸脱硫酶等的辅酶。 5.CoA：泛酸（遍多酸）在体内参与构成辅酶 A（CoA）。CoA 中的巯基可与羧基以高能硫酯键结合，在糖、脂、 蛋白质代谢中起传递酰基的作用，是酰化酶的辅酶。 6.生物素：是羧化酶的辅基，在体内参与 CO2 的固定和羧化反应。 7. FH4：由叶酸衍生而来。四氢叶酸是体内一碳单位基团转移酶系统中的辅酶。 8. Vit B12 衍生物：Vit B12 分子中含金属元素钴，故又称为钴胺素。Vit B12 在体内有多种活性形式，如 5'- 脱氧腺苷钴胺素、甲基钴胺素等。其中，5'-脱氧腺苷钴胺素参与构成变位酶的辅酶，甲基钴胺素则是甲基转移