(2)考马斯亮蓝G-250溶液：称取100mg考马斯亮蓝G-250,溶于50mL95%乙醇 后，加入100mL85%(v~)磷酸溶液，最后蒸馏水定容至1000mL (3)50mmol/L酵酸缓冲液(pH7.0):取0.05mol/LNaH,P0439mL,与0.05molL Na.HPO461mL混合即可。（考马斯亮蓝溶液用之前要过滤） 五、材料 ()不同生理状态的小麦种子（未成熟的：受冻的：发过芽的） (2)不同生理状态的玉米种子（未成熟的：受冻的：发过芽的） 六、方法和步骤 1标准曲线的制作 取6支10mL具塞刻度试管，编号后，按下表加入试剂。 试管号 1 2 3 4 5 6 蛋白质含量(g 0 20 40 60 80 100 标准蛋白(mL) 0 0.2 04 0.6 08 1.0 pH7.0磷酸缓冲液(mL)1.00.8 0.6 0.4 0.2 0 G-250试剂(mL) 3 3 3 3 3 3 OD95值 盖上塞子，摇匀，放置2~3min后在595m下测定0D值（比色应在1h内完成》 以牛血清蛋白含量(g)为横坐标，以吸光度(OD值)为纵坐标，绘制标准曲线。 2样品中蛋白质含量的测定 (1)每个材料取10粒种子磨碎后，准确称取磨碎的样品03g~0.5g,放入研钵中， 加入10mLpH7.0磷酸缓冲液，充分匀浆后，转入10mL容量瓶，再用pH7.0硫酸缓冲 液反复冲洗研钵2~3次，将洗液合并于25mL容量瓶中，混匀、定溶至刻度。取2~3mL 匀浆于离心管中，5000×g离心10min,上清液即为蛋白质提取液。 (2)另取1支10mL具塞试管，准确加入1.0mL蛋白质提取液后，加入3mL考马 斯亮蓝G-250试剂，充分混匀后，放置2~3mi后，以标准曲线的1号试管溶液做参比， 在595nm波长下比色，记录吸光度。 13
七、结果计算 根据所测样品提取液的吸光度，在标准曲线上查得相应的蛋白质含量(g),按下式 计算： 查得的蛋白质含量(g)×提取液总体积(mL) 样品中蛋白质含量(gg鲜重)= 样品重(g)×测定时取用提取液的体积(mL) 参考文献 川鲁子贤。蛋白质化学。北京：科学出版社，1981 21文树基。基础生物化学实验指导。西安：陕西科学技术出版社，1984 B1张龙翔。生物化学实验技术。北京：人民教育出版社，1981 14
实验五种子含水量测定 一、原理 种子含水量就是指种子中含有的水分重量占种子重量的百分数。测定种子水分必须保 证使种子中的自由水和束缚水充分、全部除去，但要尽可能减少氧化、分解或其它挥发性 物质损失。在种子发育、成熟、发芽以及收获后的加工、贮藏等不同时期，种子的物理 性质和生化变化都与种子水分含量有密切关系。 由于自由水易受外界环境条件的影响，所以应采取一些措施尽量防止水分的丧失。如 送验样品必须装在防湿容器中，并尽可能排除其中的空气：样品接收后立即测定：测定过 程中的取样、蘑碎和称重须操作迅速：避免磨碎蒸发等。不磨碎种子这一过程所需的时间 不得超过2min。 二、目的要求 1了解恒温电烘箱的原理及使用方法。 2掌握低恒温烘干法和高温烘干法测定水分的方法及技术。 三、材料器具 1材料 各种含水量各异的作物种子，如玉米、小麦、大豆、棉花等种子。 2器具 (1)恒温烘箱（装有可移动多孔的铁丝网架和可测到05℃的温度计） (2)种子粉碎机（备有0,5、1.0和4.0mm的金属丝筛子） (3)天平（感量0.001g) (4)样品盒，干燥器，干燥剂。 四、方法和步骤 1低恒温烘干法 11适用种类 15
葱属(Allimn SFp.,花生(Arachis hypogaea),芸苔属(Brassica spp,辣椒属(psicum sp.,大豆((ycine max,)棉属(Gossy pium spp.),向日葵(Helianthus anms,亚麻(imum usitatissimm),萝卜(Raphamis sativus)等。该法必须在相对湿度70%以下的室内进行。 12取样磨碎 用下列一种方法进行充分混合，并从此送验样品取1525g,依表1中作物种类进行磨 碎或切片。 a.用匙在样品罐内搅拌 山.将原样品锥的罐口对准另一个同样大小的空罐口，把种子在两个容器间往返倾倒。 13称取样品 将处理好的样品充分混合，在感量0.001g天平上称取4.55g,放入预先烘至恒重 (130℃1h)和称重过的铝盒内（直径小于8cm),再称重（精确至0.001g)。样品在铝盒内 的分布为每平方厘米不超过0.3g。摊平盖严。二个重复。 14烘干样品 采用103壮2℃烘干法。使烘箱通电预热至110115℃将样品盒放入，打开盒盖放在距 温度计225cm处，关闭烘箱门。在510mim内温度回升至103±2℃时开始计算时间，烘 干8。到时后打开箱门，盖好盒盖，放入盛有变色硅胶的干燥器内冷却至室温（约需 3045min,冷却后称重 15结果计算 由烘后减少的重量计算水分，保留一位小数。计算公式如下： 种子水分(% (M-M) (M-M) ×100 式中：M一样品盒和盖的重量(g): M一样品盒和盖及样品的烘前重量(g): M一样品盒和盖及样品的烘后重量(g)。 一个样品的两次测定之间的差距不超过0.2%，其结果可用两次测定值的算术平均数表 示。否则重做。结果填报在检验结果报告的规定空格中，精确度为0.1%。 2高温烘干法 2.1适用种类 16
适用于下列种子种类：芹菜(Apium graveolens,燕麦属(Auenaspp),甜菜(Beta vulgaris), 西瓜(Citrullus lanatus),甜瓜属(Cucumis SFp),胡萝卜(Daeus caro1a,甜养(Fagopyru esculentum,苦荞(Fagopyrum tataricum),大麦(Hordeum vulgare),莴苣(Lachuca sativa), 番茄(Lycopersicon ycopersicum),水稻(Oryza sativa),菜豆属(Phaseols Ep.),小麦属 (Triticum spp.),玉米(Zea mays)等。 22程序 与低恒温烘干法相同。首先将烘箱预热至140~45℃，打开箱门5~10min后，烘箱 温度须保持13033℃，样品烘干时间为h。 3高水分预先烘干法 需要磨碎的种子，如果禾谷类种子水分超过18%，豆类和油料作物水分超过16%必 须采用预先烘干法。 称取两份样品各25.000.02g,置于直径大于cm的样品盒中，在103肚2℃烘箱中预烘 30min(油料种子在70℃预烘1h)。取出后放在室温冷却和称重。此后立即将这两个半干样 品分别磨碎，并将磨碎物各取一份样品按低恒温烘干法或高温烘干法所规定的方法进行测 定。 若用预先烘干法，可从第一次（预先烘干）和第二次按上述公式计算所得的水分结果换 算样品的原始水分，按下式计算。 SixS2 种子水分(%=S+S一 100 式中：S一第一次整粒种子烘后失去的水分(%)： S一第二次磨碎种子烘后失去的水分(%)。 17