二。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE) 1.聚丙烯酰胺凝胶潘化剂丙烯酰胺(Acr) 亚甲基双丙烯酰胺(Bis) 2.装置垂直板状 SDs处理的样品 圆盘状 Ss東内烯酰胶凝饺 夹在两玻璃片之间 水平板
6 二.聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) ( polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE) 丙烯酰胺(Acr) 催化剂 1. 聚丙烯酰胺凝胶 亚甲基双丙烯酰胺(Bis) 2. 装置 垂直板状 圆盘状 水平板
3.连续系统: 分离胶:电荷效应、分子筛效应 不连续系统: 浓缩胶:使样品浓缩成窄区带 分离胶:分离蛋白质 电荷效应、分子筛效应、浓缩效应
7 3. 连续系统: 分离胶:电荷效应、分子筛效应 不连续系统: 浓缩胶:使样品浓缩成窄区带 分离胶:分离蛋白质 电荷效应、分子筛效应、浓缩效应
4.PAGE电泳分类 SDS-PAGE 分子量不同 梯度凝胶电泳( PG-PAGE) 等电聚焦电泳( IEF-PAGE)←等电点不同 单向(1-D) 双向(2-D)
8 4. PAGE电泳分类 SDS-PAGE 梯度凝胶电泳(PG-PAGE) 分子量不同 等电聚焦电泳(IEF-PAGE) 等电点不同 单向(1-D) 双向(2-D)
蛋白质凝胶染色 染料名称 特点 氨基黑 一般染色,也适合于膜染色 考马斯亮蓝 一般染色,简单、快速、牢固。 改良后达到15ng/band 银染 高度灵敏,2~10ng/band 荧光染 多种染料、快速、高度灵敏,可自动化 0.5-10 ng/band,IEF凝胶的理想选择 同位素标记 高度灵敏,可自动化、常用于预标记蛋白 辐射污染
9 蛋白质凝胶染色 染料名称 特点 氨基黑 一般染色,也适合于膜染色 考马斯亮蓝 一般染色,简单、快速、牢固。 改良后达到15 ng/band 银染 高度灵敏,2~10 ng/band 荧光染 多种染料、快速、高度灵敏,可自动化 0.5-10 ng/band,IEF 凝胶的理想选择 同位素标记 高度灵敏,可自动化、常用于预标记蛋白 辐射污染
SDS-PAGE电泳结果 考马斯亮蓝染色 银染色
10 考马斯亮蓝染色 银染色 SDS-PAGE电泳结果