三、PCR反应体系 反应体系 44 模板 1引物 dNTPs DNA聚合酶|缓冲液 要复制的 化学合成的两 dATP、dCTP、 耐热DNA 氯化钾、硫酸 核酸片段 条寡核苷酸 dGTP、dTTP 聚合酶 铵、镁离子
三、PCR反应体系 化学合成的两 条寡核苷酸 引物 dATP、dCTP、 dGTP、dTTP dNTPs 耐热DNA 聚合酶 DNA聚合酶 氯化钾、硫酸 铵、镁离子 缓冲液 反应体系 要复制的 核酸片段 模板
引物(primers)(难点) 靶序列 引物是人工合成的两段 3 Primer 2 Primer 1 寡核苷酸序列，分别与模板 的两条DNA链碱基序列互补， 决定PCR的特异性
引物是人工合成的两段 寡核苷酸序列，分别与模板 的两条DNA链碱基序列互补， 决定PCR的特异性。 引物（primers)（难点）
www..com 引物(primers) 靶序列的两端，分别与 DNA链碱基序列完全互补， 位置 产物一般为200~500bp。 一般为15一30个核苷酸 长度 过长导致延伸温度过高， 两条引物自身或之间不 过短容易引起错配。 应存在互补序列，避免 二级 形成二级结构。 结构
位置 靶序列的两端，分别与 DNA链碱基序列完全互补， 产物一般为200~500bp。 二级 结构 两条引物自身或之间不 应存在互补序列，避免 形成二级结构。 长度 一般为15~30个核苷酸 过长导致延伸温度过高， 过短容易引起错配。 引物（primers)
二级结构 反向重复顺序 100bp Marker 5'ATT:AAAGGCTCC TTTT GGAGCCTTT TITTT Input ↑ 转录 模板链 UU C·G C·G U·A C·G G·C 100 G·C A·U A·U A·U A A S'A U U VVVV T 3' Primer Dimers 图3-4某基因终止子的反向重复顺序 与发卡结构的形成图解
二级结构
www..com 引物(primers) 靶序列的两端，分别与 DNA链碱基序列完全互补， 位置 产物一般为200500bp。 一般为15一30个核苷酸 长度 过长导致延伸温度过高， 两条引物自身或之间不 过短容易引起错配。 应存在互补序列，避免 二级 形成二级结构。 结构 碱基 G+C含量40-60%之间， 分布 3端避免重复的CG序列。 ⅢX红
位置 靶序列的两端，分别与 DNA链碱基序列完全互补， 产物一般为200~500bp。 二级 结构 两条引物自身或之间不 应存在互补序列，避免 形成二级结构。 长度 一般为15~30个核苷酸 过长导致延伸温度过高， 过短容易引起错配。 碱基 分布 G+C含量40-60%之间， 3'端避免重复的CG序列。 引物（primers) 5’ 3’ 3’ → 5’ ← → ←