引物(primers) 靶序列的两端，分别与 DNA链碱基序列完全互补， 位置 产物一般为200-500bp。 一般为15~30个核苷酸 长度 过长导致延伸温度过高， 两条引物自身或之间不 过短容易引起错配。 应存在互补序列，避免 二级 形成二级结构。 结构 碱基 G+C含量40-60%之间， 分 3端避免重复的CG序列。 Tm值一般为55-65℃， 两条引物的Tm值差别 Tm值 不能太大
位置 靶序列的两端，分别与 DNA链碱基序列完全互补， 产物一般为200~500bp。 二级 结构 两条引物自身或之间不 应存在互补序列，避免 形成二级结构。 Tm值 Tm值一般为55-65℃， 两条引物的Tm值差别 不能太大。 长度 一般为15~30个核苷酸 过长导致延伸温度过高， 过短容易引起错配。 碱基 分布 G+C含量40-60%之间， 3'端避免重复的CG序列。 引物（primers)
引物Tm值 Tm值(Melting Temperature),是DNA熔解温 度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。G-C 含量与Tm值成正比关系。 01 Tm值计算公式：Tm=4(G+C)+2(A+T)。 02 退火温度较引物Tm值低5℃
01 Tm值计算公式：Tm=4(G+C)+2(A+T)。 02 退火温度较引物Tm值低5℃。 引物Tm值 Tm值（Melting Temperature），是DNA熔解温 度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。G-C 含量与Tm值成正比关系