教学内容及目标 1、要求学生掌握细菌标本片的制备基染色方法。 2、快速找到细菌形态。 3、增强职业道德的教育。 设备材料： 病料 细菌培养物 接种环 玻片 酒精灯 染色缸 染色架 染色液 实验内容： （一）、细菌涂片的制备 1、液体培养物及液体病料：
教学内容及目标 1、要求学生掌握细菌标本片的制备基染色方法。 2、快速找到细菌形态。 3、增强职业道德的教育。 设备材料： 病料 细菌培养物 接种环 玻片 酒精灯 染色缸 染色架 染色液 实验内容： （一）、细菌涂片的制备 1、液体培养物及液体病料：
（1）涂片 用接种环取一滴培养液或液体病料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层 （2）干燥 一般采用自然干燥，天气较冷时也可于酒精灯火焰上方 30－40cm 处适当加热干燥。 （3）固定 分为火焰固定和化学固定两种。火焰固定时，将干燥好的玻片涂面朝上，以其背面 在酒精灯火焰上来回通过数次，略作加热，以不烫手背 为度；化学固定时，可将干燥好的玻片 浸入甲醇中 2－3min 后取出晾干，或在涂片上滴加数滴甲醇使其作用 2－3min 后自然挥发干 燥。此外，丙酮和酒精也可用作化学固定剂；作瑞特氏染色的涂片不需固定，因染色液中含有 甲醇，有固定作用。 （4）染色 根据不同的材料和菌种选择不同的染色法。 2、固体培养物：用接种环取一滴生理盐水于玻片的中央, 用接种环挑取一个菌落于生理盐水中 混合,均匀地涂布成适当大小的薄层,干燥,固定,染色。 （二）、细菌触片的制备： 将固体病料（病变组织）作无菌切开,用切面在玻片中央接触一下或 稍用力印压成一薄层,干燥,固定,染色。 （三）、细菌的染色法： 1、单染色法：又称简单染色法，即只应用一种染料进行染色的方法。 美蓝染色法：在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加适量的美蓝染色液，染色 1－2min 后， 水洗，干燥（吸水纸吸干或自然干燥），镜检。 2、复染色法：应用两种或两种以上的染料或再加媒染剂进行染色的方法。 革兰氏染色法：在已干燥、固定好的涂片上滴加适量的草酸铵结晶紫染色液，染色 1－2min 后，水洗， 再加革兰氏碘液，作用 1－2min 后，水洗，加 95％酒精脱色 0.5－1min 后，水洗， 稀释石炭酸复红（或沙黄、番红）染色液复染 0.5min 后， 水洗，干燥，镜检。 注意事项： 1、做细菌涂片时，不宜涂得过厚，以免影响制片效果
（1）涂片 用接种环取一滴培养液或液体病料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层 （2）干燥 一般采用自然干燥，天气较冷时也可于酒精灯火焰上方 30－40cm 处适当加热干燥。 （3）固定 分为火焰固定和化学固定两种。火焰固定时，将干燥好的玻片涂面朝上，以其背面 在酒精灯火焰上来回通过数次，略作加热，以不烫手背 为度；化学固定时，可将干燥好的玻片 浸入甲醇中 2－3min 后取出晾干，或在涂片上滴加数滴甲醇使其作用 2－3min 后自然挥发干 燥。此外，丙酮和酒精也可用作化学固定剂；作瑞特氏染色的涂片不需固定，因染色液中含有 甲醇，有固定作用。 （4）染色 根据不同的材料和菌种选择不同的染色法。 2、固体培养物：用接种环取一滴生理盐水于玻片的中央, 用接种环挑取一个菌落于生理盐水中 混合,均匀地涂布成适当大小的薄层,干燥,固定,染色。 （二）、细菌触片的制备： 将固体病料（病变组织）作无菌切开,用切面在玻片中央接触一下或 稍用力印压成一薄层,干燥,固定,染色。 （三）、细菌的染色法： 1、单染色法：又称简单染色法，即只应用一种染料进行染色的方法。 美蓝染色法：在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加适量的美蓝染色液，染色 1－2min 后， 水洗，干燥（吸水纸吸干或自然干燥），镜检。 2、复染色法：应用两种或两种以上的染料或再加媒染剂进行染色的方法。 革兰氏染色法：在已干燥、固定好的涂片上滴加适量的草酸铵结晶紫染色液，染色 1－2min 后，水洗， 再加革兰氏碘液，作用 1－2min 后，水洗，加 95％酒精脱色 0.5－1min 后，水洗， 稀释石炭酸复红（或沙黄、番红）染色液复染 0.5min 后， 水洗，干燥，镜检。 注意事项： 1、做细菌涂片时，不宜涂得过厚，以免影响制片效果
2、固定必须确实，火焰固定时不宜温度过高，以免破坏菌体结构。 3、每种染液染色的过程中应保持染色液不干，尤其加热染色的染液，在染色过程中应随时添加， 以免蒸发干，影响染色效果。 4、每种染液染色后，应用水将染液一起冲掉，不可先将染液倾去后再用水冲洗。 【考核】 1、要求学生认真写实验报告、实验结果及体会，为实验报告成绩。 2、学生要求操作准确、规范，有强的自我责任感。纳入平时成绩。 【实践小结】 【作业及思考】写出实验报告单，画出细菌的各种观察图片，标明形状、颜色并写体会 思考题：1、细菌标本片的制备方法？2、细菌形态观察的实际意义？3、如何无菌取病料？ 【指定学生阅读材料】细菌的标本片的制备与染色相关内容 课后分析： 教研室主任 审核 签 名 累计 学时 4
2、固定必须确实，火焰固定时不宜温度过高，以免破坏菌体结构。 3、每种染液染色的过程中应保持染色液不干，尤其加热染色的染液，在染色过程中应随时添加， 以免蒸发干，影响染色效果。 4、每种染液染色后，应用水将染液一起冲掉，不可先将染液倾去后再用水冲洗。 【考核】 1、要求学生认真写实验报告、实验结果及体会，为实验报告成绩。 2、学生要求操作准确、规范，有强的自我责任感。纳入平时成绩。 【实践小结】 【作业及思考】写出实验报告单，画出细菌的各种观察图片，标明形状、颜色并写体会 思考题：1、细菌标本片的制备方法？2、细菌形态观察的实际意义？3、如何无菌取病料？ 【指定学生阅读材料】细菌的标本片的制备与染色相关内容 课后分析： 教研室主任 审核 签 名 累计 学时 4