b.荧光探针的斯托克斯位移〉50nm c.荧光探针的摩尔吸光系数要大 荧光产率应尽可能高 d.荧光探针要稳定,且联结于抗体或抗原 时不应损害它们的活性 e.荧光探针的激发波长应位于可见光区, 因为较长波长处荧光杂质较少 A。应位于vs区
b. 荧光探针的斯托克斯位移 〉 50 nm c. 荧光探针的摩尔吸光系数要大 荧光产率应尽可能高 d. 荧光探针要稳定，且联结于抗体或抗原 时不应损害它们的活性 e. 荧光探针的激发波长应位于可见光区， 因为较长波长处荧光杂质较少 λex 应位于vis区
(2)有机探针 荧光黄常用的探针 荧光产率高,有较好的光稳定性和低的温度系 数。其缺点是斯托克斯位移较小 在碱性的条件下,荧光黄与免疫球蛋白lgG的 自由氨基起反应 罗丹明类化合物广泛用来标记抗体 和荧光黄相比,其荧光产率不如荧光黄,可是 其发射波长较长,样品背景干扰较少。此外, 罗丹明类亦常作为能量转移的接受体
(2) 有机探针 荧光黄 常用的探针 荧光产率高，有较好的光稳定性和低的温度系 数。其缺点是斯托克斯位移较小。 在碱性的条件下，荧光黄与免疫球蛋白IgG的 自由氨基起反应. 罗丹明类化合物 广泛用来标记抗体 和荧光黄相比，其荧光产率不如荧光黄，可是 其发射波长较长，样品背景干扰较少。此外， 罗丹明类亦常作为能量转移的接受体
(3)金属螯合物 某些稀土金属离子会与某些配位体生成会发强荧光的配 物 如:Eu(Ⅲ),Tb(Ⅲ,Nd(I)与 β-二酮衍生物 对氨基甲酰三氟丙酮 聚氨羧酯盐 邻菲罗啉 稀士金属离子配合物 life time50~1000 荧光背景103~106倍
(3) 金属螯合物 某些稀土金属离子会与某些配位体生成会发强荧光的配 合物。 如：Eu(Ⅲ), Tb(Ⅲ), Nd(Ⅲ)与 β-二酮衍生物 对-氨基甲酰三氟丙酮 聚氨羧酯盐 邻菲罗啉 稀土金属离子配合物 life time 50~1000 s 荧光背景103~106倍
2.荧光免疫检测法的类型 (1)均质检测法 均质检测法不需要分离步骤、方法简便快速, 但它常受到来自背景(血清)的干扰,该法系 根据已标记抗原联接于抗体时发生已标记抗原 荧光性质的改变。通常将均质检验法分为 荧光增强法 荧光猝灭法 间接猝灭法 荧光激发转移 水解法 荧光偏振法
2．荧光免疫检测法的类型 （1） 均质检测法 均质检测法不需要分离步骤，方法简便快速， 但它常受到来自背景（血清）的干扰，该法系 根据已标记抗原联接于抗体时发生已标记抗原 荧光性质的改变。通常将均质检验法分为： 荧光增强法 荧光猝灭法 间接猝灭法 荧光激发转移 水解法 荧光偏振法
a.荧光增强法 本法基于当标记物的抗原联接于抗体时原标记 的抗原荧光强度增强。 b./荧光猝灭法 当被标记的抗原联接到抗体时荧光的量子产率 下降,例如庆大霉素的测定,将限量的抗体加 入一已被标记和未标记的庆大霉素混合物中 荧光猝灭程度与庆大霉素量相关。 C.间接猝灭法
a．荧光增强法 本法基于当标记物的抗原联接于抗体时原标记 的抗原荧光强度增强。 b．荧光猝灭法 当被标记的抗原联接到抗体时荧光的量子产率 下降，例如庆大霉素的测定，将限量的抗体加 入一已被标记和未标记的庆大霉素混合物中， 荧光猝灭程度与庆大霉素量相关。 c. 间接猝灭法