试验三大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 (一)概述 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中,用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来,大黄在植物性泻下药中占有重要位置,是一位很早就被各国药典所 收载的世界性生药。大黄的种类繁多,优质大黄是蓼科植物掌叶大黄( Rheum palmately L),大黄(R. officinale bail)及唐古特大黄(R. tangutium Maxim et rell 的根茎及根,大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷 已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种 RI 名称 晶形 熔点 H -COOH大黄酸( Rhein) 黄色针晶318~320℃ CH3OH大黄素( Emodin) 橙色针晶256-257℃ H-CH2OH芦荟大黄素橙色细针晶206~208℃ (Aloe-emod in) 大黄素甲醚( Physcion)砖红色针晶207℃ CH3大黄酚( Chyrsophanol)金色片状结196℃ 大黄中蒽醌苷元,其结构不同,因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH,酸 性最强:大黄素连有βOH,酸性第二;芦荟大黄素连有苄醇-OH,酸性第三;大 黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基,前者连有-OCH3和-CH,后者只连有-CH3y, 因而后者酸性排在第四位。 (二)实验目的和要求 1.学习缓冲纸色谱的基本操作技术,并能根据色谱结果,设计液液萃取法分离混 合物的实验方案。 2.掌握PH梯度法的原理及操作技术 3.通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验,进一步熟悉柱色谱操作 技术。 4.学习蒽醌类化合物鉴定方法。 (三)实验方法
试验三 大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 （一）概述 大黄记载于《神农本草经》等许多文献中，用于泄下、健胃、清热、解毒等。 自古以来，大黄在植物性泻下药中占有重要位置，是一位很早就被各国药典所 收载的世界性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatclm L），大黄（R. officinale Baill）及唐古特大黄（R. tangutium Maxim.et Regll） 的根茎及根，大黄中含有多种游离的羟基蒽醌类化合物以及它们与糖所形成的苷。 已经知道的羟基蒽醌主要有下列五种： O O OH R2 OH R1 R1 R2 名 称 晶 形 熔 点 -H -COOH 大黄酸(Rhein) 黄色针晶 318~320℃ -CH3 -OH 大黄素(Emodin) 橙色针晶 256~257℃ -H -CH2OH 芦 荟 大 黄 素 (Aloe-emodin) 橙色细针晶 206~208℃ -CH3 - 大黄素甲醚(Physcion) 砖红色针晶 207℃ -H -CH3 大黄酚(Chyrsophanol) 金色片状结 晶 196℃ 大黄中蒽醌苷元，其结构不同，因而酸性强弱也不同。大黄酸连有-COOH，酸 性最强；大黄素连有β-OH，酸性第二；芦荟大黄素连有苄醇-OH，酸性第三；大 黄素甲醚和大黄酚均具有1,8-二酚羟基，前者连有-OCH3和-CH3，后者只连有-CH3， 因而后者酸性排在第四位。 （二）实验目的和要求 1．学习缓冲纸色谱的基本操作技术，并能根据色谱结果，设计液液萃取法分离混 合物的实验方案。 2．掌握PH梯度法的原理及操作技术。 3．通过磷酸氢钙柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚的试验，进一步熟悉柱色谱操作 技术。 4．学习蒽醌类化合物鉴定方法。 （三）实验方法
1.大黄总蒽醌苷元的提取 大黄粗粉(100g) 加20%H2SO4水溶液200ml,氯仿500ml, 水浴回流4hr,过滤,测量滤液体积 残渣 氯仿提取液(约450ml) 注意:①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合,以蒽醌的形式存在于植物组织 中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂, 用苯时应注意苯蒸气的挥发,严防中毒;②所得的氯仿液中如带有酸水液,应该用 分液漏斗分出弃去,并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液 放置中如有沉淀析出,可滤取之,该沉淀多为大黄素,余液进行下一步分离试验用。 2.总蒽醌苷元分离方案的设计 ①大黄总蒽醌苷元的纸色谱 ②蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验 ③最佳萃取剂及其用量的确定 各种萃取剂用量的确定 新分离方法的设计 蒽醌类成分的分离与精制 大黄酸的分离与精制 将含有总游离蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中,加PH8缓冲液 275ml振摇萃取,静置至彻底分层,放出氯仿液后,到出碱水液至置250ml烧杯中, 加HC酸化至PH=3,待黄色沉淀析岀完全后,过滤、干燥,干燥后的样品加冰醋酸 loml加热使溶,趁热过滤,滤液静置,析出黄色针晶为大黄酸,过滤即得纯品。 大黄素的分离与精制 将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中,用PH9.9缓冲液275m振摇萃取, 彻底分层后,分出碱水层,并用HCl酸化至PH=3,析出棕黄色沉淀,过滤,沉淀经 干燥后,用10ml冰醋酸加热使溶,趁热过滤,析出橙色大针晶,过滤后,即得大黄 素纯品 芦荟大黄素的分离和精制 余下氯仿液移至分液漏斗后,加5%NaCO3:5%NaOH(9:1)碱水液540ml或用 0.5%KOH540ml振摇萃取,碱水液加HCl酸化,析出的沉淀过滤干燥,用10ml乙酸 乙酯重结晶,得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。 ④大黄酚和大黄素甲醚的分离——磷酸氢钙柱色谱 蒽醌类成分的鉴定
1．大黄总蒽醌苷元的提取 大黄粗粉（100g） 加20%H2 SO4水溶液200ml，氯仿500ml， 水浴回流4hr，过滤，测量滤液体积。 残渣 氯仿提取液（约450ml） 注意：①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在于植物组织 中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂， 用苯时应注意苯蒸气的挥发，严防中毒；②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用 分液漏斗分出弃去，并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取液 放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余液进行下一步分离试验用。 2．总蒽醌苷元分离方案的设计 ① 大黄总蒽醌苷元的纸色谱 ② 蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验 ③ 最佳萃取剂及其用量的确定 各种萃取剂用量的确定 新分离方法的设计 蒽醌类成分的分离与精制 大黄酸的分离与精制 将含有总游离蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8缓冲液 275ml振摇萃取，静置至彻底分层，放出氯仿液后，到出碱水液至置250ml烧杯中， 加HCl酸化至PH=3，待黄色沉淀析出完全后，过滤、干燥，干燥后的样品加冰醋酸 10ml加热使溶，趁热过滤，滤液静置，析出黄色针晶为大黄酸，过滤即得纯品。 大黄素的分离与精制 将提过大黄酸的氯仿液继续移至分液漏斗中，用PH9.9缓冲液275ml振摇萃取， 彻底分层后，分出碱水层，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黄色沉淀，过滤，沉淀经 干燥后，用10ml冰醋酸加热使溶，趁热过滤，析出橙色大针晶，过滤后，即得大黄 素纯品。 芦荟大黄素的分离和精制 余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 碱水液540ml或用 0.5%KOH540ml振摇萃取，碱水液加HCl酸化，析出的沉淀过滤干燥，用10ml乙酸 乙酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品。 ④ 大黄酚和大黄素甲醚的分离——磷酸氢钙柱色谱 蒽醌类成分的鉴定
①纸色谱鉴定 ②IR光谱解析 (四)实验指导 1.本实验讲解要点及注意事项 ①PH梯度萃取的原理及注意事项。 ②如何设计萃取分离方案的程序与方法 ③蒽醌化合物红外光谱的特点 ④分离萃取时一定注意乳化层的分出,不要混入,并且每步最好用新鲜CHCl, 回洗碱水液。 ⑤缓冲液的配制和碱液的配制要准确,严格注意检查。 每步萃取时,利用纸色谱检查跟踪萃取效果,如未达到预想效果应及时纠正。 2.实验报告要求 ①记录大黄总蒽醌的提取方法。 ②总蒽醌的纸色谱检查结果(附色谱图)。 ③总蒽醌的缓冲纸色谱结果,并说明它对总蒽醌分离方案设计有何启示。 ④记录总蒽醌的分离程序(包括溶剂用量),及各分离物粗品的纸色谱检查结果 与原设计有何出入,原因何在? ⑤记录大黄素、大黄酸、芦荟大黄素的精制方法及纸色谱、红外光谱的鉴定结果
① 纸色谱鉴定 ② IR光谱解析 （四）实验指导 1．本实验讲解要点及注意事项。 ① PH梯度萃取的原理及注意事项。 ② 如何设计萃取分离方案的程序与方法。 ③ 蒽醌化合物红外光谱的特点。 ④ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步最好用新鲜CHCl3， 回洗碱水液。 ⑤ 缓冲液的配制和碱液的配制要准确，严格注意检查。 每步萃取时，利用纸色谱检查跟踪萃取效果，如未达到预想效果应及时纠正。 2．实验报告要求 ① 记录大黄总蒽醌的提取方法。 ② 总蒽醌的纸色谱检查结果（附色谱图）。 ③ 总蒽醌的缓冲纸色谱结果，并说明它对总蒽醌分离方案设计有何启示。 ④ 记录总蒽醌的分离程序（包括溶剂用量），及各分离物粗品的纸色谱检查结果， 与原设计有何出入，原因何在？ ⑤ 记录大黄素、大黄酸、芦荟大黄素的精制方法及纸色谱、红外光谱的鉴定结果