常用免疫学检测与临床应用 简述免疫应答 天然免疫( natural immunity):有生理屏障结构、血液及组织液中吞噬细 胞和嗜酸粒细胞及自然杀伤细胞(NK)、天然存在的抗微生物分子。特点是天然 存在,对外源微生物无特异区分,也不因外源微生物侵入而加强。 获得性免疫或特异性免疫( acquired/ specific immunity):由接触外源性 物质而诱生,并特异性针对不同大分子。特点是须有外源物质诱生,能对外源物 质进行区分并有记忆,且随再次接触某一大分子物质而增强。特异性免疫由抗原 ( antigen)淋巴细胞( lymphocyte)、及抗体( antibody)和淋巴因子( cytokine) 组成。免疫应答为特异性免疫所特有。 免疫应答过程 记忆T淋巴细胞 T淋巴细胞→致敏T淋巴细胞→淋巴因子 抗原己→吞噬细胞 非特异物质 B淋巴细胞匚今桨细胞 抗体 今记忆B淋巴细胞 抗原( antigen Ag):能刺激机体产生免疫应答,并能与免疫应答产物特异性 结合的物质。异物性、分子大小、分子结构决定物质是否有抗原性及抗原性大小。 抗体( antibody Ab):机体受抗原刺激后,血清和组织液中出现的一类与该 抗原发生特异结合的物质。 免疫学检测常用方法 凝集反应 2.沉淀反应 3.溶血实验 放射免疫 4.荧光免疫 5.免疫 6.发光免疫 7.流式细胞仪
1 常用免疫学检测与临床应用 一． 简述免疫应答 天然免疫（natural immunity）：有生理屏障结构、血液及组织液中吞噬细 胞和嗜酸粒细胞及自然杀伤细胞（NK）、天然存在的抗微生物分子。特点是天然 存在，对外源微生物无特异区分，也不因外源微生物侵入而加强。 获得性免疫或特异性免疫（acquired /specific immunity）：由接触外源性 物质而诱生，并特异性针对不同大分子。特点是须有外源物质诱生，能对外源物 质进行区分并有记忆，且随再次接触某一大分子物质而增强。特异性免疫由抗原 （antigen）、淋巴细胞（lymphocyte）、及抗体（antibody）和淋巴因子（cytokine） 组成。免疫应答为特异性免疫所特有。 免疫应答过程 记忆 T 淋巴细胞 T 淋巴细胞 致敏 T 淋巴细胞 淋巴因子 抗原 吞噬细胞 非特异物质 B 淋巴细胞 桨细胞 抗体 记忆 B 淋巴细胞 抗原（antigen Ag）：能刺激机体产生免疫应答，并能与免疫应答产物特异性 结合的物质。异物性、分子大小、分子结构决定物质是否有抗原性及抗原性大小。 抗体（antibody Ab）：机体受抗原刺激后，血清和组织液中出现的一类与该 抗原发生特异结合的物质。 二． 免疫学检测常用方法 1． 凝集反应 2． 沉淀反应 3． 溶血实验 4．放射免疫 4． 荧光免疫 5． 酶免疫 6． 发光免疫 7． 流式细胞仪
三.常用免疫学检查与临床意义 )蛋白检测 免疫球蛋白( Immunoglobulin IG):lgG、lgA、lgM、lgE、lgD 补体( complement C):cH50、C3、C4、BF 丙反应蛋白( C-reactive protein CRP) 二)徹生物感染的免疫学检查 肥达氏反应( Widal reaction) 抗链球菌溶血素“o”试验(ASLO) 梅毒血清学检查( rapid plasma RPR) 自身抗体检测 类风湿因子检测(RF) 抗DNA抗体检测( SS-DNA) 免疫印迹法抗核抗体检测 四)肝炎病毒免疫学检测 甲肝( HAV-IGM)检测 乙肝( Hbs Ag HbsAb…) 丙肝抗体检测 戊肝抗体检测 五)肿瘤标志物检测 甲胎蛋白检测(AFP) 癌胚抗原检测(cEA) 六)免疫细胞检测 T淋巴细胞检测: Erythrocyte- Rosette-formation Test试验T细胞转化试验 B淋巴细胞检测: EA-RFT )蛋白检测 (一)免疫球蛋白检测 免疫球蛋白是一种具有抗体活性的蛋白,由浆细胞分泌,存在于机体的血液、体 液、外分泌液及某些细胞膜上。可分为lgG、lgA、lgM、lgD、lgE五类。兔疫 球蛋白二条重链和二条轻链经二硫键结合而成,重链可分为a、δ、γ、ε、μ五种 轻链分为K、λ二种。 1.常用检测方法:沉淀法、浊度法、放射免疫、酶免疫 2.临床意义 1)免疫球蛋白降低 (1)先天性lg减低 有全部lg缺乏或降低和部分缺乏,最常见为lgA缺乏。分泌型lgA是机体肠道粘 膜抵抗感染的重要因素,患者常见呼吸道、肠道反复感染。 (2)继发lg减低 引起原因很多,最常见于大量蛋白流失,如剥脱性皮炎、肾病综合症。另一主要
2 三． 常用免疫学检查与临床意义 一）蛋白检测 免疫球蛋白（Immunoglobulin IG）：IgG、IgA、IgM、IgE、IgD 补体（complement C）：CH50、C3、C4、BF 丙反应蛋白（C-reactive protein CRP） 二）微生物感染的免疫学检查 肥达氏反应（Widal reaction） 抗链球菌溶血素“O”试验（ASLO） 梅毒血清学检查（rapid plasma RPR） 三）自身抗体检测 类风湿因子检测（RF） 抗 DNA 抗体检测（ss-DNA） 免疫印迹法抗核抗体检测 四）肝炎病毒免疫学检测 甲肝（HAV-IGM）检测 乙肝（HbsAg HbsAb …） 丙肝抗体检测 戊肝抗体检测 五）肿瘤标志物检测 甲胎蛋白检测（AFP） 癌胚抗原检测（CEA） 六）免疫细胞检测 T 淋巴细胞检测 :Erythrocyte-Rosette-formation Test 试验. T 细胞转化试验 B 淋巴细胞检测：EA-RFT 一）蛋白检测 （一）免疫球蛋白检测 免疫球蛋白是一种具有抗体活性的蛋白，由浆细胞分泌，存在于机体的血液、体 液、外分泌液及某些细胞膜上。可分为 IgG、IgA、IgM、IgD、IgE 五类。免疫 球蛋白二条重链和二条轻链经二硫键结合而成，重链可分为、、、、五种， 轻链分为、二种。 1．常用检测方法：沉淀法、浊度法、放射免疫、酶免疫 2．临床意义 1） 免疫球蛋白降低 （1）先天性 Ig 减低 有全部 Ig 缺乏或降低和部分缺乏，最常见为 IgA 缺乏。分泌型 IgA 是机体肠道粘 膜抵抗感染的重要因素，患者常见呼吸道、肠道反复感染。 （2）继发 Ig 减低 引起原因很多，最常见于大量蛋白流失，如剥脱性皮炎、肾病综合症。另一主要
原因为合成障碍,如淋巴网状系统肿瘤及骨髓病变。 ◆lg缺乏主要临床症状为反复感染。主要有败血症、化浓性脑膜炎、肺炎、气 管炎、中耳炎等。 2)增高 依l增高种类可分为单克隆和多克隆增高,临床以单克隆增高多见。依疾病性质 可分良性与恶性增高二类。依发病机理可分原发和继发 3)其它引起lg增高疾病 非淋巴网状系统肿瘤 单核细胞白血病 慢性肝胆疾病 自身免疫性疾病 良性lg增高(主要见于老年人) 介绍脑脊液和尿液免疫球蛋白检测 ◆M蛋白:是由单克隆B细胞分化而来的浆细胞异常增生,导致血液或尿液中 现的大量结构一致的免疫球蛋白或轻链或重链。临床症状依增殖情况不同而 不同。 ◆多发性骨髓瘤( MM multiple myeloma): 是B淋巴系恶性肿瘤,肿瘤细胞合成无免疫 活性的单克隆免疫球蛋白或轻链或重链。 临床表现主要为:溶骨性破坏、贫血、反复感染、肾功能损害及高钙血症。 检测方法常用电泳法 gA(血清)gM 参考值7.6-1669L071-3359/L048-2129/L06-20mgL01409m9L 占血液的%|70-80 10-15 5-10 0.02-1 0.002 常见增高原因「多发性骨髓瘤。多发性骨髓瘤。巨球蛋白血多发性骨髓多发性骨髓 SLE.RF等自身 SLE.RF。 症 瘤 免疫性疾病。|肝硬化 SLE.RF 单核细胞白血过敏性疾病。 慢性肝病。 lgA型肾病。肝硬化 病 慢性肝病。 慢性感染。 病毒性肝炎早甲状腺炎。 淋巴瘤 期 肺结核。 慢粒。 常见降低原因先天缺陷。先天缺陷。先天缺陷。「先天缺陷先天缺陷。 应用兔疫抑制反复呼吸道感应用兔疫抑制 应用兔疫抑制 剂。 染 剂 剂 肾病综合症。非GA型MMGG型重链病 恶性肿瘤 蛋白流失。轻重链病。GA型MM淋 免疫失调性毛 巴系统肿瘤 细血管扩张症 (二)补体检测( complement) 补体是主要有巨噬细胞分泌存在于新鲜血液中具有酶样活性的球蛋白,补体不耐 热易降解,故补体检测须用新鲜血清。补体有c1、c2。c9及AF、BF、DF
3 原因为合成障碍，如淋巴网状系统肿瘤及骨髓病变。 ◆ Ig 缺乏主要临床症状为反复感染。主要有败血症、化浓性脑膜炎、肺炎、气 管炎、中耳炎等。 2） 增高 依 Ig 增高种类可分为单克隆和多克隆增高，临床以单克隆增高多见。依疾病性质 可分良性与恶性增高二类。依发病机理可分原发和继发。 3）其它引起 Ig 增高疾病 非淋巴网状系统肿瘤 单核细胞白血病 慢性肝胆疾病 自身免疫性疾病 良性 Ig 增高（主要见于老年人） ◆ 介绍脑脊液和尿液免疫球蛋白检测 ◆ M 蛋白：是由单克隆 B 细胞分化而来的浆细胞异常增生，导致血液或尿液中 现的大量结构一致的免疫球蛋白或轻链或重链。临床症状依增殖情况不同而 不同。 ◆ 多发性骨髓瘤（MM multiple myeloma）: 是 B 淋巴系恶性肿瘤，肿瘤细胞合成无免疫 活性的单克隆免疫球蛋白或轻链或重链。 临床表现主要为：溶骨性破坏、贫血、反复感染、肾功能损害及高钙血症。 检测方法常用电泳法 IgG IgA(血清) IgM IgD IgE 参考值 7.6-16.6g/L 0.71-3.35g/L 0.48-2.12g/L 0.6-2.0mg/L 0.1-0.9mg/L 占血液 Ig 的% 70-80 10-15 5-10 0.02-1 0.002 常见增高原因 多发性骨髓瘤。 SLE.RF 等自身 免疫性疾病。 慢性肝病。 慢性感染。 淋巴瘤。 肺结核。 慢粒。 多发性骨髓瘤。 SLE.RF。 肝硬化。 IgA 型肾病。 巨 球 蛋 白 血 症。 SLE.RF。 肝硬化。 病毒性肝炎早 期。 多 发 性 骨 髓 瘤。 单核细胞白血 病。 甲状腺炎。 多 发 性 骨 髓 瘤。 过敏性疾病。 慢性肝病。 常见降低原因 先天缺陷。 应 用 免疫 抑 制 剂。 肾病综合症。 蛋白流失。 先天缺陷。 反复呼吸道感 染。 非 IGA 型 MM 轻/重链病。 先天缺陷。 应用免疫抑制 剂。 IGG型重链病。 IGA 型 MM。淋 巴系统肿瘤。 先天缺陷 先天缺陷。 应用免疫抑制 剂。 恶性肿瘤。 免疫失调性毛 细血管扩张症 （二）补体检测（complement） 补体是主要有巨噬细胞分泌存在于新鲜血液中具有酶样活性的球蛋白，补体不耐 热易降解，故补体检测须用新鲜血清。补体有 C1、C2。。。C9 及 AF、BF、DF、
PF组成。临床常作总补体活性(cH50)和单一因子C3、C4、BF及C1q检测 1.检测方法 cH50溶血法 单因子检测同免疫球蛋白 2.参考正常值 cH50:50-100u/ml c3:0.87-141g c4:0.44-0.66g BF:0.5-075g 3.临床意义 1)降低 补体消耗引起如自身免疫性疾病的SLE、肾病。 合成障碍引起如严重肝病变 先天性缺乏 2)增高 急性感染、恶性肿瘤和凤湿病早期,补体增高常与其它血浆蛋白改变相伴随。 (三)丙反应蛋白检测(cRP) cRP是一种急性时相蛋白,由肝脏合成,能激活补体促进细胞吞噬等免疫功能。 近年来cRP检测被广泛应用。 1.检测方法 同免疫球蛋白 2.参考正常值 CRP: <10 mg/ 3.临床意义 cRP增高特点为:急性期增高明显,预后降低迅速,且受其它因素影响很小,非 特异性 急性细菌性感染时急剧增高 病毒感染cRP增高不如细菌感染明显恶性肿瘤 恶性肿瘤cRP增高而良性肿瘤一般正常 风湿病活动期较稳定期增高明显, 烧伤、肝炎、心肌梗塞、移植反应可增高 )微生物感染免疫检测 (一)肥达氏试验 伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病。伤寒杆菌有二种抗原,即菌体抗原“o” 抗原和鞭毛抗原“H”。肥达氏反应就是检测由上述二种抗原刺激机体产生的抗体。 副伤寒分甲(A)、乙(B)、丙(c)三型,它们也有各自的菌体和鞭毛抗原,产 生相应抗体。鞭毛抗原产生相应抗体多为GG型。菌体产生抗体多为GM型。 菌体 鞭毛
4 PF 组成。临床常作总补体活性（CH50）和单一因子 C3、C4、BF 及 C1q 检测 1．检测方法 CH50 溶血法 单因子检测同免疫球蛋白 2．参考正常值 CH50：50 – 100 u/ml C3: 0.87 – 1.41 g/l C4: 0.44 –0.66 g/l BF: 0.5 –0.75 g/l 3．临床意义 1） 降低 补体消耗引起如自身免疫性疾病的 SLE、肾病。 合成障碍引起如严重肝病变 先天性缺乏 2） 增高 急性感染、恶性肿瘤和凤湿病早期，补体增高常与其它血浆蛋白改变相伴随。 （三）丙反应蛋白检测（CRP） CRP 是一种急性时相蛋白，由肝脏合成，能激活补体促进细胞吞噬等免疫功能。 近年来 CRP 检测被广泛应用。 1． 检测方法 同免疫球蛋白 2． 参考正常值 CRP：< 10 mg/l 3． 临床意义 CRP 增高特点为：急性期增高明显，预后降低迅速，且受其它因素影响很小，非 特异性 急性细菌性感染时急剧增高 病毒感染 CRP 增高不如细菌感染明显恶性肿瘤 恶性肿瘤 CRP 增高而良性肿瘤一般正常 风湿病活动期较稳定期增高明显， 烧伤、肝炎、心肌梗塞、移植反应可增高 二）微生物感染免疫检测 （一）肥达氏试验 伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病。伤寒杆菌有二种抗原，即菌体抗原“O” 抗原和鞭毛抗原“H”。肥达氏反应就是检测由上述二种抗原刺激机体产生的抗体。 副伤寒分甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，它们也有各自的菌体和鞭毛抗原，产 生相应抗体。鞭毛抗原产生相应抗体多为 IGG 型。菌体产生抗体多为 IGM 型。 菌体 鞭毛
1.检测方法 凝集试验(混合抗体) 醇免疫(IGM型) 2.参考正常值 To:<1:80TH:<1:160副伤寒TH:(1:80 肥达氏反应用于辅助诊断伤寒和付伤寒感染,由于抗体产生需要一定时间,故第 周阳性率10%第二周达60%-70%,第四周达90%。临床常以二次标本(早 期和中期或恢复期)的凝集效价变化来判断是否感染。伤寒病人的“o”抗体较 “H”出现早,存在时间短,“H”相反。预防接种可引起“H”增高,“”正常 (二)抗链球菌溶血素“O”检测( anti-streptolysin O ASLO) 风湿热是一种变态结缔组织疾病,常见有风湿性心脏病、风湿性关节炎等。风湿 热常由A组溶血性链球菌引起,此菌可产生一种“O”溶血素,ASLO就是检测 机体产生的抗溶血素“o”抗体。 1.检测方法 胶乳凝集试验(定性) 比浊法(定量) 2.参考正常值 定性:阴性 定量:<200U/ml 3.临床意义 链球菌感染后抗“o”的产生一般在一周左右,46周达高峰。可见于风湿性心脏 病、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、呼吸道感染等。ASLO动态检测对病程及 疗效观察意义较大,结合cRP和ESR、WBc检测临床意义更大。 (三)梅毒血请学 当机体感染梅毒螺旋体后,会产生二种抗体,一种为抗类脂抗体,另一种为抗螺 旋体抗原抗体,后者较前者特异性强。由于目前螺旋体体外培养较难,故血清学 检测是目前临床常用检査方法。常用方法有快速血浆素反应(RPR)和梅毒螺旋 体血凝试验(TPPA),后者特异性高一般用于确定试验,RPR一般作过筛试验。 (四)艾滋病血清血检查 艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症( acquired immunodeficiency syndrome AD|S)机体感染艾滋病病毒后血清中产生抗体,实验室一般首先用过筛试验进行 检测,发现阳性再作确诊试验。过筛试验常用酶免疫法,要求敏感性高,不能有 假阴性,允许少量假阳性。确定试验一般用蛋白印迹法,要求敏感性高、特异性 高。遇到可疑标本,一般病人三月后复查 )自身免疫病血清学检测检测 人类具有完善的免疫系统,正常情况下,免疫系统具有识别自我与异己的功能 因而能够防御异物入侵,而对自身组织不产生或产生极微弱的免疫应答反应,称 自身耐受。一且机体外部或内部因素发生改变时,可使免疫耐受受到影响,导致 免疫系统对自身组织产生明显的免疫应答反应。如是低限度和非持久性,一般影 响不大,高限度和持久存在则引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清学检测
5 1． 检测方法 凝集试验（混合抗体） 酶免疫（IGM 型） 2． 参考正常值 TO : <1:80 TH : <1:160 副伤寒 TH：〈1：80 肥达氏反应用于辅助诊断伤寒和付伤寒感染，由于抗体产生需要一定时间，故第 一周阳性率 10%，第二周达 60%-70%，第四周达 90%。临床常以二次标本（早 期和中期或恢复期）的凝集效价变化来判断是否感染。伤寒病人的“O”抗体较 “H”出现早，存在时间短，“H”相反。预防接种可引起“H”增高，“O”正常。 （二）抗链球菌溶血素“O”检测（anti-streptolysin O ASLO） 风湿热是一种变态结缔组织疾病，常见有风湿性心脏病、风湿性关节炎等。风湿 热常由 A 组溶血性链球菌引起，此菌可产生一种“O”溶血素，ASLO就是检测 机体产生的抗溶血素“O”抗体。 1． 检测方法 胶乳凝集试验（定性） 比浊法（定量） 2． 参考正常值 定性：阴性 定量：<200IU/ml 3． 临床意义 链球菌感染后抗“O”的产生一般在一周左右，4-6 周达高峰。可见于风湿性心脏 病、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、呼吸道感染等。ASLO 动态检测对病程及 疗效观察意义较大，结合 CRP 和 ESR、WBC 检测临床意义更大。 （三）梅毒血请学 当机体感染梅毒螺旋体后，会产生二种抗体，一种为抗类脂抗体，另一种为抗螺 旋体抗原抗体，后者较前者特异性强。由于目前螺旋体体外培养较难，故血清学 检测是目前临床常用检查方法。常用方法有快速血浆素反应（RPR）和梅毒螺旋 体血凝试验（TPPA），后者特异性高一般用于确定试验，RPR 一般作过筛试验。 （四）艾滋病血清血检查 艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症（acquired immunodeficiency syndrome ADIS）机体感染艾滋病病毒后血清中产生抗体，实验室一般首先用过筛试验进行 检测，发现阳性再作确诊试验。过筛试验常用酶免疫法，要求敏感性高，不能有 假阴性，允许少量假阳性。确定试验一般用蛋白印迹法，要求敏感性高、特异性 高。遇到可疑标本，一般病人三月后复查。 三）自身免疫病血清学检测检测 人类具有完善的免疫系统，正常情况下，免疫系统具有识别自我与异己的功能， 因而能够防御异物入侵，而对自身组织不产生或产生极微弱的免疫应答反应，称 自身耐受。一旦机体外部或内部因素发生改变时，可使免疫耐受受到影响，导致 免疫系统对自身组织产生明显的免疫应答反应。如是低限度和非持久性，一般影 响不大，高限度和持久存在则引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清学检测