3,培养室。是培养材料生长发育的场所。要充分考虑温度、湿度 照和空气等因素对培养体生长的影响,并且要求在无菌条件下进行培 养。培养室温度一般控制在20-27℃C,温度变化大而无规律易遭杂菌污 染,相对湿度在70%一80%,光源可使用荧光灯或普通日光灯,光强为1 000-30001x,光照时间大多是连续照光或16h照明 4、培养基配制组织培养和整体植物在营养上的主要区别是它的异 养性,整体植物只需要无机营养,而组织培养则需另外供给C源和许多有 机养料。各种植物以及同一植物的不同器官和材料进行培养时对无机养 料的要求也略有区别,甚至在增减过程中也发生变化。因此在培养过程 中随着组织和细胞的分化发育的进展正确选用培养基,及时调整培养基 中的某项成分(转换培养基)是成功的关键之
3．培养室 是培养材料生长发育的场所。要充分考虑温度、湿度、 光照和空气等因素对培养体生长的影响，并且要求在无菌条件下进行培 养。培养室温度一般控制在20—27 ℃，温度变化大而无规律易遭杂菌污 染，相对湿度在70％一80％，光源可使用荧光灯或普通日光灯，光强为1 000--30001x，光照时间大多是连续照光或16h照明。 4、培养基配制 组织培养和整体植物在营养上的主要区别是它的异 养性，整体植物只需要无机营养，而组织培养则需另外供给C源和许多有 机养料。各种植物以及同一植物的不同器官和材料进行培养时对无机养 料的要求也略有区别，甚至在增减过程中也发生变化。因此在培养过程 中随着组织和细胞的分化发育的进展正确选用培养基，及时调整培养基 中的某项成分(转换培养基)是成功的关键之一
二、培养基的配制 L.材料的选用一般常用作快速繁殖的材料有鳞茎、 球茎、茎段、茎尖、花柄、花瓣、叶柄、叶尖、叶片等, 们的生理状态对培养时器官的分化有很大影响。一般来讲, 发育年幼的实生苗比发育年龄老的成年树容易分化,顶芽比 服芽容易分化,萌动的芽比休眠的芽容易分化,采用大树基 的萌蘖有利于芽的诱导和分化。此外可以用未成熟的种子 子房、胚珠及成熟的种子为材料,剥去种皮经过胚胎培养 一打破休眠得到试管苗后,再进行快速繁殖
二、培养基的配制 1．材料的选用 一般常用作快速繁殖的材料有鳞茎、 球茎、茎段、茎尖、花柄、花瓣、叶柄、叶尖、叶片等，它 们的生理状态对培养时器官的分化有很大影响。一般来讲， 发育年幼的实生苗比发育年龄老的成年树容易分化，顶芽比 腋芽容易分化，萌动的芽比休眠的芽容易分化，采用大树基 部的萌蘖有利于芽的诱导和分化。此外可以用未成熟的种子、 子房、胚珠及成熟的种子为材料，剥去种皮经过胚胎培养， 打破休眠得到试管苗后，再进行快速繁殖
2.外檀体的消毒与接种将接种材料用自来水 冲洗干净,擦于。然后,在超净台上或接种箱内, 将接种材料浸在饱和漂白粉上清液里,作表面灭菌 1530mn,也可用0.1%的升汞溶液加适量吐温, 作表面灭菌8-12min。灭菌时间快到时,即倾去灭 菌溶液,用无菌水涮洗多次,然后用无菌纱布吸干 接种材料外部的水分,最后在无菌的条件下接种在 培养基上以待器官分化
2．外檀体的消毒与接种 将接种材料用自来水 冲洗干净，擦干。然后，在超净台上或接种箱内， 将接种材料浸在饱和漂白粉上清液里，作表面灭菌 15—30min，也可用0．1％的升汞溶液加适量吐温， 作表面灭菌8—12min。灭菌时间快到时，即倾去灭 菌溶液，用无菌水涮洗多次，然后用无菌纱布吸干 接种材料外部的水分，最后在无菌的条件下接种在 培养基上以待器官分化
3.芽的分化接种后,要使材料分化出许多芽,必须对培养基及激素的种 类和浓度进行严格地筛选。在诱导芽的分化过程中,常用的基本培养基为MS培养 些,适当降低M培养基中无机盐的浓度,特别是降低氮素水平,对芽的分化和生 长都是有利的 激素的种类和浓度对芽的分化起着重要的作用。由于不同的植物和不同的组 织器官所含的内源激素的种类和浓度不同,因而使细胞、组织、器官脱分化和分 化所需要的激素水平也不相同。原则上讲,细胞分裂素可以促进芽的分化,常用 的细胞分裂素有激动素、6-苄基腺嘌呤、玉米素和异戊烯基腺嘌呤。在快速繁殖 中,一般用6一苄基腺嘌呤比激动素的效果好,合适的浓度一般为0.25ng/L 数种类的植物适合用玉米素和异戊烯基腺嘌呤。生长素虽然不能促进芽的分化 但是一般植物芽的分化需要它与细胞分裂素浓度有一定的比例。当细胞分裂素的 相对含量大于生长素时,有利于芽的分化和生长,在MS培养基中,附加0.5mg L吲哚乙酸,1mg/L6—苄基腺嘌呤,是芽分化的最佳配比 男外,也可将接种材料置在含高浓度生长素的培养基上,先诱导材料脱分化 形成愈伤组织,然后诱导愈伤组织再分化形成不定芽或胚状体,继续培养后萌发 成为小植株。也可以将愈伤组织打散,再进行液体转化培养,促进胚状体、芽和 原球茎的分化,这样可使愈伤组织细胞同时分化出大量的原球茎和胚状体,大大 加速无性系繁殖的速度。但是用这种方法所繁殖的植物,染色体倍性容易发生变 化,影响无性系后代的一致性
3．芽的分化 接种后，要使材料分化出许多芽，必须对培养基及激素的种 类和浓度进行严格地筛选。在诱导芽的分化过程中，常用的基本培养基为MS培养 基，适当降低MS培养基中无机盐的浓度，特别是降低氮素水平，对芽的分化和生 长都是有利的。 激素的种类和浓度对芽的分化起着重要的作用。由于不同的植物和不同的组 织器官所含的内源激素的种类和浓度不同，因而使细胞、组织、器官脱分化和分 化所需要的激素水平也不相同。原则上讲，细胞分裂素可以促进芽的分化，常用 的细胞分裂素有激动素、6-苄基腺嘌呤、玉米素和异戊烯基腺嘌呤。在快速繁殖 中，一般用6—苄基腺嘌呤比激动素的效果好，合适的浓度一般为0．25mg／L。 少数种类的植物适合用玉米素和异戊烯基腺嘌呤。生长素虽然不能促进芽的分化， 但是一般植物芽的分化需要它与细胞分裂素浓度有一定的比例。当细胞分裂素的 相对含量大于生长素时，有利于芽的分化和生长，在MS培养基中，附加0．5mg／ L吲哚乙酸，lmg／L6—苄基腺嘌呤，是芽分化的最佳配比。 另外，也可将接种材料置在含高浓度生长素的培养基上，先诱导材料脱分化 形成愈伤组织，然后诱导愈伤组织再分化形成不定芽或胚状体，继续培养后萌发 成为小植株。也可以将愈伤组织打散，再进行液体转化培养，促进胚状体、芽和 原球茎的分化，这样可使愈伤组织细胞同时分化出大量的原球茎和胚状体，大大 加速无性系繁殖的速度。但是用这种方法所繁殖的植物，染色体倍性容易发生变 化，影响无性系后代的一致性
4.根的诱导要促使试管苗生根,常用的有两种方法:一种是把试管苗在 无菌条件下从叶腋处剪下来,转移到生根培养基上。生根培养基和分化培养基的 差别主要在于生长素和细胞分裂素的比例上,适当增加生长素的浓度,不用细胞 分裂素或极少量的细胞分裂素,一般在茎的基部就能分化出根。、但是不同的植 物诱导生根时所需要的生长素的种类和浓度是不同的。一般常用的有吲哚乙酸 孝乙酸、吲哚丁酸3种。在生产实践中,生长素浓度过低不利于试管苗生根,而 生长素浓度过高时,先在茎的基部形成一块愈伤组织,而后再从愈伤组织上分化 出,但是这样茎与根之间维管束往往连接不好,影响了物质和水分的吸收和运 输,这种苗移栽不易成活,即使成活后生长速度也较慢,所以要求生长素的浓度 能使伤口处直接生长出根为合适。另一种方法是将无菌苗剪下后,浸泡在含有 定浓度生长素的无菌水中,几小时后再接种到无激素培养基上,一般1星期后 即开始分化出根原基,2-3星期后根生长良好即可移栽 若适当降低培养基的含糖量,同时将大量元素的含量减少一半左右,并适 当增加培养基中维生素B2、维生素Bi2的含量,也可以提高根的诱导频率
4．根的诱导 要促使试管苗生根，常用的有两种方法：一种是把试管苗在 无菌条件下从叶腋处剪下来，转移到生根培养基上。生根培养基和分化培养基的 差别主要在于生长素和细胞分裂素的比例上，适当增加生长素的浓度，不用细胞 分裂素或极少量的细胞分裂素，一般在茎的基部就能分化出根。、但是不同的植 物诱导生根时所需要的生长素的种类和浓度是不同的。一般常用的有吲哚乙酸、 萘乙酸、吲哚丁酸3种。在生产实践中，生长素浓度过低不利于试管苗生根，而 生长素浓度过高时，先在茎的基部形成一块愈伤组织，而后再从愈伤组织上分化 出根，但是这样茎与根之间维管束往往连接不好，影响了物质和水分的吸收和运 输，这种苗移栽不易成活，即使成活后生长速度也较慢，所以要求生长素的浓度 以能使伤口处直接生长出根为合适。另一种方法是将无菌苗剪下后，浸泡在含有 一定浓度生长素的无菌水中，几小时后再接种到无激素培养基上，一般1星期后 即开始分化出根原基，2--3星期后根生长良好即可移栽。 若适当降低培养基的含糖量，同时将大量元素的含量减少一半左右，并适 当增加培养基中维生素B2、维生素Bi2的含量，也可以提高根的诱导频率