正相和反相键合色谱法 固定相极性大 硅胶-OH(或双-OH,硅胶-CN 正相键合色谱法 流动相极性小 烃类+适量极性溶剂(CHCL,CH3OH,CH,C) 分析对象 多用于极性或中等极性化合物的分离。还可用于分离 异构体、极性不同的化合物以及不同类型的化合物。 正相键合色谱中，随流动相极性增加，组分分配比增加。 固定相极性小 如硅胶-C18,硅胶苯基； 流动相极性大 甲醇水、乙腈水、水和无机盐的缓冲液。 反相键合色谱法 多用于多环芳烃PAHs等低极性化合物分离；改变流 分析对橡 动相配比，也可分离极性化合物；缓冲液可用于易离 解的化合物，如有机有机酸、有机碱和酚类。 1.在PLC分析中，有时要在流动相中加入适量的盐（碳酸铵、四烷基铵 盐)或酸，为什么？答：都是为防止峰形拖尾。加入盐类是为了减少待测物 与键合相表面的残留硅醇基作用；加入酸是抑制酸类待测物的离解，使其 以游离酸在柱内分离。 2.何为正相色谱，何为反相色谱？ 2011/12/27 石河子大学化学化工学院
2011/12/27 石河子大学化学化工学院 16 固定相极性大 硅胶-OH(或双-OH)，硅胶-CN 正相键合色谱法 流动相极性小 烃类+适量极性溶剂(CHCl3，CH3OH，CH3CN) 分析对象 多用于极性或中等极性化合物的分离。还可用于分离 异构体、极性不同的化合物以及不同类型的化合物。 正相和反相键合色谱法 正相键合色谱中，随流动相极性增加，组分分配比k增加。 1.在HPLC分析中，有时要在流动相中加入适量的盐(碳酸铵、四烷基铵 盐)或酸，为什么？答：都是为防止峰形拖尾。加入盐类是为了减少待测物 与键合相表面的残留硅醇基作用；加入酸是抑制酸类待测物的离解，使其 以游离酸在柱内分离。 2.何为正相色谱，何为反相色谱？ 固定相极性小 如硅胶-C18，硅胶-苯基； 流动相极性大 甲醇-水、乙腈-水、水和无机盐的缓冲液。 反相键合色谱法 分析对象 多用于多环芳烃(PAHs)等低极性化合物分离；改变流 动相配比，也可分离极性化合物；缓冲液可用于易离 解的化合物，如有机有机酸、有机碱和酚类
正、反相色谱中极性和保留时间的关系 正相色谱 反相色谱 低极性流动相 高极性流动相 时间 时间 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 待测物极性：A>B>C 2011/12/27 石河子大学化学化工学院
2011/12/27 石河子大学化学化工学院 17 正相色谱 低极性流动相 反相色谱 高极性流动相 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 时间 时间 待测物极性：A>B>C 正、反相色谱中极性和保留时间的关系
根据涂渍方法的不同，可将固定相分为机械涂渍型 和化学键合型，后者应用更为广泛。 1)机械涂渍固定相：将固定液通过机械混合的方法 涂渍到表面多孔型(0.5-1.5%涂布量)或全多孔型载体 (⑤-10%涂布量)上形成的液液色谱固定相。该种固定 相最大的不足是固定液易流失、分离稳定性及重现 性差，不适合梯度淋洗。 为减少固定液的流失，通常在柱前加一根很短的 前置柱，该柱涂有与分析柱相同但有更高含量的固 定液，使流动相进入分析柱之前，预先被固定液饱 和。 2011/12/27 石河子大学化学化工学院 18
2011/12/27 石河子大学化学化工学院 18 根据涂渍方法的不同，可将固定相分为机械涂渍型 和化学键合型，后者应用更为广泛。 1）机械涂渍固定相：将固定液通过机械混合的方法 涂渍到表面多孔型(0.5-1.5%涂布量)或全多孔型载体 (5-10%涂布量)上形成的液液色谱固定相。该种固定 相最大的不足是固定液易流失、分离稳定性及重现 性差，不适合梯度淋洗。 为减少固定液的流失，通常在柱前加一根很短的 前置柱，该柱涂有与分析柱相同但有更高含量的固 定液，使流动相进入分析柱之前，预先被固定液饱 和