第十一章 高致液相 色 Highi Performance Liquid Chromatography, HPLC
High Performance Liquid Chromatography, HPLC 第十一章 高效液相色谱
高效液相色谱(PLC)是以溶剂液体为流动相的色 谱方法。按照固定相不同可分为：液液分配色谱；吸 附色谱（液固色谱）；离子交换色谱；尺寸排阻色谱（凝 胶渗透色谱)。此外，还有亲和色谱、平板色谱（薄层 色谱)等。 早期液相色谱，包括Tswett,都是在直径15cm, 长50500cm的玻璃柱中进行。为保证有一定的柱流 速，填充的固定相颗粒直径多在150200u范围内。即 使这样，流速仍然很低(K1 mL/min),分析时间仍然很 长 2011/12/27 石河子大学化学化工学院
2011/12/27 石河子大学化学化工学院 2 高效液相色谱(HPLC)是以溶剂液体为流动相的色 谱方法。按照固定相不同可分为：液液分配色谱；吸 附色谱(液固色谱)；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝 胶渗透色谱)。此外，还有亲和色谱、平板色谱(薄层 色谱)等。 早期液相色谱，包括Tswett，都是在直径1~5cm, 长50~500cm的玻璃柱中进行。为保证有一定的柱流 速，填充的固定相颗粒直径多在150~200m范围内。即 使这样，流速仍然很低(<1mL/min)，分析时间仍然很 长
当加压增加流速（真空或空气泵）时，尽管分析时间 减少，但柱塔板高度Hmin也相应增加了！或者说 柱效下降了。(H=A+CU) 为了解决分析时间及柱效问题，人们认识到： 最为有效地增加柱效的唯一方法是减小填充物的 粒径(3~10μm)! 直到60年代，由于在高压下操作的液压设备、 高效固定相以及高灵敏检测器的出现及发展，才 彻底解决了分析时间及柱效的问题。即所谓的高 效液相色谱技术才真正得到广泛应用。 2011/12/27 石河子大学化学化工学院
2011/12/27 石河子大学化学化工学院 3 当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间 减少，但柱塔板高度Hmin也相应增加了！或者说 柱效下降了。（H=A+CU） 为了解决分析时间及柱效问题，人们认识到： 最为有效地增加柱效的唯一方法是减小填充物的 粒径（3~10 m ）！ 直到60年代，由于在高压下操作的液压设备、 高效固定相以及高灵敏检测器的出现及发展，才 彻底解决了分析时间及柱效的问题。即所谓的高 效液相色谱技术才真正得到广泛应用
HPLC特点 分离系统也由两相 固定相和流动相组成 液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学 键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液 膜)、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相 是各种溶剂。 根据各组分在固定相及流动相中的吸附 能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸 大小的差异进行分离。 2011/12/27 石河子大学化学化工学院
2011/12/27 石河子大学化学化工学院 4 一 、HPLC特点 分离系统也由两相——固定相和流动相组成 液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学 键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液 膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相 是各种溶剂。 根据各组分在固定相及流动相中的吸附 能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸 大小的差异进行分离
经典液相色清法 概述 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称~。 ·经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短 2011/12/27 石河子大学化学化工学院
2011/12/27 石河子大学化学化工学院 5 经典液相色谱法 概述 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀 常压下输送流动相 柱效较低 分析周期长 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀 高压下输送流动相 柱效较高 分析周期短