RNA聚合酥保护区结构基因 3 3 3 50 -40 32010110 3 5 35区 开始转录 10区 TTGACA AACTGT TATAAT Pu ATATT APy RNA-Po辨认位点 (recognition site) (Pribnow box) 原核生物启动子保守序列
由含可M多聚酶全酶识别的典型大肠杆菌启动子 UP element -35 Region SpacerF-10 Region Spacer RNA start """ Consensus quence NAA个个 TTTTNNAAAANNN N TTGACA⊥N1 TATAAT rrnB Pl AGAAAATTATTTTAAATTTCCT N GTGTCA N16 TATAAT Ns A TTGACA N17 TTAACT N,A ac TTTACA N TATGTT NGA rec TTGATA N16 TATAAT N A araBAD CTGACG N1S TACT N Pribnow box
由含 70RNA多聚酶全酶识别的典型大肠杆菌启动子 Pribnow box Pribnow box
Sextama框 35区,保守序列为 TTGACA- Sextama框,是 RNA聚合酶中σ的识别位点,也是RNA聚合酶 的初始结合位点。 Pribnow框与 Sextama框之间的碱基序列并不重 要,但两个序列之间的距离十分重要; 天然启动子这段距离多为15~20bp,距离的大 小可能是决定启动子强度的因素之 实验表明:两个序列之间的距离为17bp时, 转录效率最高
•Sextama 框： －35区，保守序列为TTGACA--Sextama 框，是 RNA聚合酶中 σ 的识别位点，也是RNA聚合酶 的初始结合位点。 •Pribnow框与Sextama 框之间的碱基序列并不重 要，但两个序列之间的距离十分重要； •天然启动子这段距离多为15～20bp，距离的大 小可能是决定启动子强度的因素之一。 • 实验表明：两个序列之间的距离为17bp时， 转录效率最高
Solution of identical dna ir radioactively labeled at one end of one strand. Treat with DNase under conditions in Site of which each strand is,dNa cut once on average) No cuts are made in the area where RNA lymerase has bound 足迹法原理 (Footprinting) Isolate labeled DNA fragments nd denature. Only labeled strands are detected in next step. Separate fragments by polyacrylamide gel electrophoresis and visualize radiolabeled bands on x-ray film Uncut DNA DNA Missing bands indicate where RNA polymerase was bound to dna
足迹法原理 (Footprinting)
Nontemplate strand + c 10 利用足迹法确 20 定RNA聚合 30 酶结合位点的 Regions bound by RNA polymerase -40 50
利用足迹法确 定 RNA 聚合 酶结合位点的 实验