血清谷丙转氨酶活性 的测定（King法）
■【目的要求】 ■1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 ■2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 方法。 ■3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义
【原理】 ■生物机体内转氨基作用是ā-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到 α一酮酸的酮基位置上，生产相应的酮酸和氨基酸的化学反应， 催化这反应的酶称为转氨酶(transaminase),其辅酶为磷酸 吡哆醛。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中，在肝、心、肾 等组织中的谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase, GPT),谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase, G0T)活性较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内维持一定水 平的转氨酶活性（即正常值）。当肝、心、肾等组织发生病变 时，由于组织细胞肿胀，坏死导致大量的酶释放至血流中，从 而引起血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(G0T)活性显著 升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临场诊断具有重要 的参考价值
■血清中的谷-丙转氨酶(ALT),在37℃、 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸： COOH COOH CHs C-H ALT -0 COOH 0-0 37℃、pH7.4 H2N -c-H COOH COOH L-丙氨酸 a酮戊二酸 a丙酮酸 L-谷氨酸
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生 加成反应，生成丙酮酸2,4二硝基苯腙，进而在碱性环境 中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范 围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关 系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或 通过标准曲线查出血清中ALT的活性。 NO2 NO2 GH3 H +H2N一N NO2- -NO2 doOH G-N- H-O COOH α-酮酸 2,4二硝基苯肼 丙酮酸二硝基苯腺（黄色） OH NO2 -H0 GH3 G=N-N= >=N一O 茶踪销酿化合物红棕色)