扩增曲线(amplification curve) PCR过程中,以循环数为横坐标,以反应过程中实 时荧光强度为纵坐标所做的曲线。 平台期 荧光基团 (国米装)12 指数期 基线期 荧光检测元件 Cycle(循环数)
PCR过程中,以循环数为横坐标,以反应过程中实 时荧光强度为纵坐标所做的曲线。 扩增曲线(amplification curve) 荧光检测元件 荧光基团 Rn(荧光强度) 基线期 指数期 平台期 Cycle(循环数)
荧光阈值(threshold) 是指在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它 可以设定在指数扩增阶段的任意位置上。 平台期 前15个循环信号作为 A 荧光本底信号 指数期 B 是3~15个循环的荧光 荧光阙值 信号的标准偏差的10倍。 大于荧光背景值,进 基线期 入指数期的最初阶段。 Cycle(循环数)
Rn(荧光强度) 基线期 指数期 平台期 Cycle(循环数) 荧光阈值 荧光阈值(threshold) 是指在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它 可以设定在指数扩增阶段的任意位置上。 前15个循环信号作为 荧光本底信号 A B 是3~15个循环的荧光 信号的标准偏差的10倍。 C 大于荧光背景值,进 入指数期的最初阶段
Ct(cycle threshold value PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定 的荧光阈值所经过的循环次数。 平台期 指数期 C1值 基线期 Cycle(循环数)
Ct值(cycle threshold value ) PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定 的荧光阈值所经过的循环次数。 Rn(荧光强度) 基线期 指数期 平台期 Cycle(循环数) Ct 值
Ct值特点 96 Replicates 1,40E+00 9.00E-01 4.00e-01 11 16 Cycle Number 相同模板进行96次扩增,终点处产物量不恒定; Ct值极具重现性
Ct值特点 相同模板进行96次扩增,终点处产物量不恒定; Ct值极具重现性
扩增效率(amplification efficiency,E) 指PCR反应一个循环后的产物增加量与这个循环的 模板量的比值,其值在0~1之间。 =1 理论值 实际值
指PCR反应一个循环后的产物增加量与这个循环的 模板量的比值,其值在0~1之间。 扩增效率(amplification efficiency,E) =1 理论值 <1 实际值