复旦大学：《仪器分析 Instrumental Analysis》课程教学资源（讲义课件）荧光分析法（fluorometry）第一节 基本原理 第二节 荧光定量分析方法 第三节 仪器与其他荧光分析技术

振动弛豫 同一电子能级 内部能量转换 S,*→>S1 荧光发射第一电子激发态的最低振动能级S~(1 基态的任一振动能级S0(Vn 外部能量转换 S1*/T1*→>S0 体系间跨越 1*→>T1 ·磷光发射

• 振动弛豫 • 内部能量转换 • 荧光发射 fluorometry • 外部能量转换 • 体系间跨越 • 磷光发射 6 同一电子能级 S2 *S1* 基态的任一振动能级S0 (Vn ) 第一电子激发态的最低振动能级S1*(V0 ) S1*/T1 *S0 S1 * T1 * T1* (V0 ) S0 (Vn )

(二)激发光谱与发射光谱 光源 单色器 荧光强度 单色器 300 400 nm 检测器 excitation spectrum 横坐标λ灬,纵坐标 发射光强度 荧光强度 fluorescence spectrum 横坐标λ。,纵坐标 入 发射光强度 400 500 nn

（二）激发光谱与发射光谱 7 excitation spectrum  横坐标ex，纵坐标 发射光强度 fluorescence spectrum  横坐标em，纵坐标 发射光强度 荧 光 强 度  (nm) 300 400 光 源 单 色 器 单色器 2 检测器 1 荧 光 强 度  400 500 (nm)

溶液荧光光谱通常具有如下特征 Stokes shift >荧光光谱的形状与激发波长无关 >荧光光谱与激发光谱的镜像关系

溶液荧光光谱通常具有如下特征 Stokes shift 荧光光谱的形状与激发波长无关 荧光光谱与激发光谱的镜像关系 8

1.斯托克斯位移 > em eX (b》 △入=- 荧光强度 入 (a) 300 400 500mm)

1. 斯托克斯位移 em> ex 9  =  - ’ 荧 光 强 度  300 400 500 (nm)

2.荧光光谱的形状与激发波长无关 12() 0 荧光强度 300 400 500 (nm)

2. 荧光光谱的形状与激发波长无关 10 荧 光 强 度  300 400 500 (nm) S1*(V0 ) S0 (Vn )